实验与实习卫生职业教育Vol．312013No．2
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验
常见的问题及对策
靳彩虹，柴连明，武洋
（平凉医学高等专科学校，甘肃平凉744000）
摘要：通过分析、总结学生在血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验中常出现的问题，提出相应的解决措施，以进一步提高实验课的教学效果。
关键词：血清蛋白质；醋酸纤维素；薄膜电泳中图分类号：G424.31
文献标识码：B
文章编号：（2013）1671-124602-0107-02
“醋酸纤维素薄膜电泳”是医学研究及临床检验的常规技术，也是生物类与医学类专业学生必须掌握的一项技术。我校在生化及生化检验教学中开设血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验，由于本实验主要由手工操作，并且影响因素较多，实验时间也长，往往花费了很长时间，但最终结果却并不理想，这在一定程度上挫伤了学生学习的积极性。笔者结合多年的实践教学经验，对学生实验中常见的问题进行了分析、归纳，并提出了相应的解决办法，从而大大提高了实验课的教学效果，现报告如下。1常见问题1.1血清紧缺
本实验由于是盖玻片蘸取点样，血清用量相对较多，尤其近年来随着学校的发展，招生规模不断扩大，学生人数不断增多，以致实验成本较高，但教学经费投入十分有限，故实验用血清较紧缺。1.2点样技术不熟练
学生对点样技术掌握不好，结果或因点样量太大而使组分谱峰重叠[1]；或因蘸取血清量少、点样时间短，血清没有渗入薄膜；或因蘸取血清量过少而出现电泳图谱染色浅，导致各组分显示不清，甚至只能观察到白蛋白区带，其余区带显示不清；或因蘸取血清不均匀导致区带不整齐，或者有拖尾现象。1.3实验条件选择不当
由于不同电泳仪、不同薄膜条数所需电压、电流不同，时间也不固定，要灵活掌握（一般用电压10~15V/cm膜长，或90～160Ⅴ/cm膜长，若用电流则按照0.4~0.6mA/cm膜宽进行换算。夏季通电40～50分钟，冬季通电60分钟左右[2-4]），故学生在实验中可能因选择的电压低、电流小、时间短而出现图谱距点，尤其样线近、区带集中，各组分分离不佳（常见α2与β区带）是在点样量过多时，只能观察到四条区带现象；也可能因为选择的电压高、电流大、时间长而使蛋白迁移速度过快，常出现白蛋白迁移至靠近薄膜一端而被盐桥吸附的现象，且图谱位置也不居薄膜中段。
1.4薄膜的透明过程掌握不好
由于本实验费时较长，学生实验一般只进行到染色之后，观察到结果即可。但部分学生的结果较理想时，他们往往要求保存图谱，这就需要透明处理。教科书及文献基本都是选择冰
5]
，这种透明液乙酸25ml、无水乙醇75ml混匀而成的透明液[1，
透明效果虽好，保持时间长，但会使膜变薄、软化，从而使得薄膜容易皱褶、碎裂，不易取出，必须贴附于载玻片上才能取出并干燥，手工操作难度较大、费时，学生获得的透明薄膜往往不平展，欠完整。2解决措施
2.1制备兔血清用于实验
家兔是基础研究和基础学科常用的实验动物，我校在药理、生理、外科等学科实验教学中常用家兔做动物实验。因此，在保证和提高生物化学实验教学质量的前提下，为适应招生规模扩大与实验室建设资金紧张的现状，从降低实验成本、减少对环境的污染角度出发，我室近年来抽取兔血制备血清以代替人血清。其方法取材方便、简单，实验结果稳定，重复性好。和人血清一样，兔血清蛋白也可以分离出五条区带，从正极到负极依次为白蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白（见α1球蛋白、图1A）。
2.2指导学生掌握点样技术
盖玻片截面有粗糙和光滑两面，为使图谱尽量整齐、平直，要选择光滑的截面。小心用镊子夹住一个角，使盖玻片截面宽度稍小于薄膜宽度，以保证血清不会点到薄膜边缘。采用普通滴管取两滴血清滴在普通平板玻璃上，用盖玻片光滑的一个截面均匀蘸取血清（一定注意均匀蘸取，不均就弃掉重新蘸取），再将其平直印于薄膜点样线上。注意是一次蘸取、一次点样，要做到直、准、匀，一定要停留2~3秒钟，待血清渗入膜内。2.3选择最佳电泳条件
考虑到实验课课时紧、学生点样技术不熟练等情况，故电泳时间不宜过长。在指导学生掌握点样技术和点样量的基础上，根据学生实验的实际情况(一般20人的实验班，两人一条薄膜，则双槽中每个槽有十条左右薄膜），对影响分离效果的电压和时间两个因素、3个水平通过随机组合在9种条件下进行了
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