实验三 PAS反应与联苯胺反应
一：实验目的：
掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。 二：实验原理：
1、高碘酸—希夫试剂反应简称PAS（Periodic Acid Schiff reaction）反应。组织内的多糖等都用PAS法来显示。其化学基础是利用过氧酸的氧化作用打开C—C键，将CH2OH—CH2OH变成CHO—CHO。同样，对CH2OH—CHO，CH2OH—COOH，CH2OH—CH2NH2等物质均有氧化作用而放出醛基，这种新生的醛基和无色品红作用形成紫红色化合物（见图1）。颜色的深浅与糖类的多少有关。
2、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类化合物氧化为有色化合物（见图2），用联苯胺处理样本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为兰色的苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判断过氧化物酶的有无或多少。 三：实验材料与试剂
1. 材料：土豆块茎、洋葱根尖或鳞茎表皮。
2. 器具：显微镜、载波片、单面刀片、培养皿、镊子、染色钵、盖玻片、吸水纸。 3. 试剂：
（1） 过碘酸酒精溶液：
过碘酸（高碘酸） 0.4g 95%酒精 35ml
0.2 mol/L醋酸钠 5ml （即17.2g醋酸钠溶于1000ml 蒸馏水） 蒸馏水 10ml
该液需保存于冰箱，包黑纸，如变黄则失效。 （2） Shiff试剂（详见指导书P75页）
（3） 0.1%钼酸铵溶液：称取0.1 g钼酸铵溶于100 ml 0.85%盐水 （4） 联苯胺混合液（临用前配制）
联苯胺 0.2g 95%乙醇 100ml 3%H202 2滴
（5） 亚硫酸水溶液：取200ml自来水，加10ml10％的偏重亚硫酸钠水溶液和10ml1mol/L
的HCl，三者于使用前混匀。
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（6） 70％乙醇 四：实验的方法和步骤 1 PAS反应
（1）把马铃薯块茎徒手切成薄片，放入高碘酸溶液浸泡10min，用70%乙醇中浸片刻 （2）将薄片浸入Schiff 试剂染色15分钟 （3）取出放入亚硫酸水中洗3次，每次1min (4) 蒸馏水冲洗片刻，压片观察 2. 联苯胺反应
（1）把洋葱根尖徒手切成20-40 μm厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块 （2）浸在溶有0.1%钼酸铵的0.85%盐水溶液中5 min（钼酸铵起催化作用） （3）浸在联苯胺溶液内2 min至切片出现蓝色 （4）在0.85%盐水溶液中洗1 min
（5）将薄片置于载玻片上展开，盖上盖玻片，显微镜检查 五：实验结果
1．PAS反应：块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色的淀粉颗粒，对照片无色或色淡。 2．联苯胺反应：切片中含过氧化物酶部位呈现蓝色或棕色。 六：作业：
绘图表示PAS反应与联苯胺反应的染色结果，并分析。
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图1
图2
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