一、氯化物检查法
药物的生产过程中，常常要用到盐酸，或原料、中间体呈盐酸盐等，氯化物因此极易被引入到药物中。Cl-对人体虽然无害，但它的量可以反映出药物的纯净程度及生产过程是否正常。因此作为信号杂质，氯化物在很多药物中需要检查。
原理 中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。
方法 除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml(溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较。
中国药典对无水葡萄糖中氯化物的检查记叙为：取本品0.60g，依法检查(附录ⅤⅢ A)，与标准氯化钠溶液6.0ml制成的对照液比较，不得更浓 (0.010%)。
讨论 以上检查方法中使用的标准氯化钠溶液每1ml相当于10μg的Cl-。在测定条件下，氯化物浓度以50ml中含50μg～80μg的Cl-（相当于标准氯化钠溶液5.0ml～8.0ml）所显浑浊梯度明显，便于比较。因此设计氯化物的检查方法时，应根据其限量，取用适宜的供试品量，使氯化物的浓度处在适宜比浊的范围内。 氯化物检查宜在硝酸酸性溶液中进行，因加入硝酸可避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成而干扰检查，同时还可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。
为了避免光线使单质银析出，在观察前应在暗处放置5min。由于氯化银为白色沉淀，比较时应将比色管置黑色背景上，从上向下观察，比较。
供试品处理 有的药物在上述试验条件下对检查有干扰，应排除干扰后再检查。供试品溶液如不澄清，可用含硝酸的水洗净滤纸中的氯化物后滤过。供试品溶液如带颜色，可按中国药典附录所规定的方法处理。即取两份供试品溶液，于其中一份中先加入硝酸银试液1.0m1，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复滤过，至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再在其中加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，作为供试品溶液，将两液在暗处放置5 min后比较，即可消除颜色的干扰。某些有颜色的药物也可根据其化学性质，设计其他的排除干扰的方法。如高锰酸钾中的氯化物检查，可先加乙醇适量使高锰酸钾还原褪色后，再依法检查。检查碘化物（如碘化钠）， I-也能与硝酸银形成沉淀，干扰检查。可在供试品中加入一定量的酸和过氧化氢溶液，加热煮沸，使氧化产物碘挥去、溶液澄明无色后，再依法检查。也可以利用碘化银沉淀稳定，在氨溶液中不溶解，而氯化银、溴化银沉淀在氨溶液中溶解的性质，除去碘化物的干扰。如检查碘中氯化物和溴化物，是将供试品加水研磨、滤过，于滤液中加锌粉使碘还原为无色的碘化物，再在氨碱性条件下滴加硝酸银试液使生成碘化银沉淀而滤除。向滤液中加入硝酸，破坏络离子后， AgBr和AgCl沉淀复析出，与一定量标准氯化钠溶液生成的沉淀比较，即可确定氯化物和溴化物是否符合要求。
溶于水的有机药物，可按中国药典附录规定的方法直接检查氯化物。不溶于水的有机药物，多数采用加水振摇，使所含氯化物溶解，滤除不溶物；或加热溶解供试品，放冷后析出沉淀，滤过，取滤液依法检查。如药物在稀乙醇或丙酮中有一定溶解度，也可加稀乙醇或丙酮溶解后依法检查。三氯叔丁醇、氯法齐明中氯化物的检查即如此。
检查有机氯杂质，可根据杂质结构，将有机氯转变为离子状态，再依法检查。若有机氯为氯代脂烃或氯在环的侧链上，可在碱性溶液中加热使水解生成Cl-。若杂质中氯原子连接于环
上，则需先对其进行有机破坏，使分解后再检查。有关讨论详见本书第四章第一节“定量分析样品的前处理方法”。
二、硫酸盐检查法
原理 药物中存在的微量硫酸盐与氯化钡在盐酸酸性介质中生成硫酸钡白色浑浊，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的浑浊比较，浊度不得更大。
方法 除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成约40ml(溶液如显碱性可滴加盐酸使成中性)；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2m1，摇匀，制得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准硫酸钾溶液，置50 ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇匀，制得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5ml，用水稀释至50ml，充分摇匀，放置10min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较。
讨论 所用标准硫酸钾溶液每1ml相当于0.1mg的SO。本法适宜比浊的浓度范围为每50ml溶液中含0.1mg～0.5mg的SO，相当于标准硫酸钾溶液1.0ml～5.0ml。若SO的浓度小于0.05mg/50ml，产生的硫酸钡浑浊不明显，若大于1mg/50ml，则产生的浑浊度较大，无法区别其浓度差异，且重现性也不好。 供试品溶液加盐酸成酸性，可防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀的生成。溶液的酸度也能影响硫酸钡的溶解度，以50ml中含稀盐酸2ml，溶液的pH值约为1为宜。酸度增加，灵敏度下降，应注意控制。氯化钡溶液的浓度在10%～25%范围内所呈硫酸钡的浑浊度差异不大。中国药典采用25%氯化钡溶液，呈现的浑浊度较稳定，使用时不必新配。经试验，放置1个月后，反应的效果仍无显著改变。加入氯化钡试液后，应立即充分摇匀，防止因局部过浓而影响产生浑浊的程度。
供试品处理 供试品溶液如需滤过，应先用加盐酸使成酸性的水洗净滤纸中硫酸盐，再滤过。有色供试品如富马酸亚铁处理的方法与氯化物检查法相同。
其他国家药典如JP(14)、USP(24)、BP(2000)检查硫酸盐的方法基本相同，都是在酸性条件下使SO与氯化钡反应后进行比较。但USP(24)和JP(14)是用0.010mol/L的硫酸作为标准溶液。
三、铁盐检查法 (一)硫氰酸盐法
检查药品中的铁盐杂质，中国药典和USP均采用硫氰酸盐法。
原理 铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较，颜色不得更深。 Fe3++6SCN- [Fe(SCN)6]3-
方法 除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml, 移置于50ml纳氏比色管，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，加水稀释至约35ml后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量使成50ml，如显色，立即与标准铁溶液一定量按相同方法制成的对照溶液比较。
讨论 本法用硫酸铁铵[FeNH4(S04)2·12H2O]配制标准铁溶液，并加入硫酸防止铁盐水解，使易于保存。标准铁溶液每1ml相当于10μg的Fe3+。当50ml溶液中含Fe3+为5μg～90μg时，溶液的吸收度与浓度呈良好线性关系。目视比色时以50ml溶液中含10μg～50μg Fe3+为宜。在此范围内，溶液的色泽梯度明显，易于区别。
在盐酸酸性条件下反应，可防止Fe3+的水解。经试验，以50ml溶液中含稀盐酸4ml为宜。加入氧化剂过硫酸铵既可氧化供试品中Fe2+成Fe3+，同时可防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。
2Fe2+ +（NH4）2S2O8 2Fe3++（NH4）2SO4+ SO
某些药物（如葡萄糖、糊精和硫酸镁等）在检查过程中需加硝酸处理，则不再加过硫酸铵，但必须加热煮沸除去氧化氮，因硝酸中可能含亚硝酸，它能与硫氰酸根离子作用，生成红色亚硝酰硫氰化物，影响比色。 HNO2+SCN-+H+ NO?SCN+H2O
铁盐与硫氰酸根离子的反应为可逆反应，因此，加入过量的硫氰酸铵，不仅可以增加生成的配位离子的稳定性，提高反应灵敏度，还能消除因氯化物等与铁盐形成配位化合物而引起的干扰。
供试品处理 若供试液管与对照液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，各加正丁醇或异戊醇提取，分取醇层比色。因硫氰酸铁配位离子在正丁醇等有机溶剂中的溶解度大，上述处理能增加颜色深度，同时也排除某些干扰物质的影响。
某些酸根阴离子，如Cl-、PO、SO、枸橼酸根离子等，能与Fe3+形成有色配位化合物而干扰检查。排除干扰的方法有适当增加酸度，增加硫氰酸铵试液的加入量，用正丁醇提取后比色等。如枸橼酸钠中铁盐的检查，系采用正丁醇提取硫氰酸铁后比色，枸橼酸钠留在水层，不影响检查。又如检查硫酸钙中的铁盐，是取供试品0.20g，加过硫酸铵50mg后，加稀盐酸10ml与硫氰酸铵试液5.0m1，再依法检查。一些金属离子可与SCN-反应而干扰检查。如Hg2+与SCN-能生成离解度很低的Hg(SCN)2或[Hg(SCN)4]2-，银、铜、钴、铋等离子能与硫氰酸根离子生成有色沉淀，在设计方法时应予以注意。 某些有机药物特别是具环状结构的有机药物，在实验条件下不溶解或对检查有干扰，需经炽灼破坏，使铁盐转变成三氧化二铁留于残渣中，处理后再依法检查。盐酸普鲁卡因、泛影酸、羟丙纤维素等药物中铁盐检查。 （二）巯基醋酸法
BP采用巯基醋酸 (mercaptoacetic acid) 法检查药物中铁盐。
原理 巯基醋酸还原Fe3+为Fe2+，在氨碱性溶液中进一步与Fe2+作用生成红色配位离子，与一定量标准铁溶液经同法处理后产生的颜色进行比较，以限制铁的量。
Fe2++2HSCH2COOH→Fe(SCH2COOH)2+H+ Fe(SCH2COOH)2[Fe(SCH2COO)2]2-+2H2O
红色
讨论 在加巯基醋酸试液前，应先加入20%枸橼酸溶液2ml，使枸橼酸与铁离子形成配位离子，以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉淀。 本法检查铁盐灵敏度较高，但试剂较贵。
四、重金属检查法
重金属系指在实验条件下能与S2-作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等。在药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。中国药典对重金属的检查一共收载有四种方法。
第一法 硫代乙酰胺法，用于在实验条件下供试液澄清、无色，对检查无干扰或经处理后对检查无干扰的药物。
原理 硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，颜色不得更深。
CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2S H2S+Pb2+PbS↓+2H+
方法 除另有规定外，取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml后，加水或各药品项下规定的溶剂稀释使成25ml，乙管加入按各药品项下规定方法制成的供试液25ml；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2min，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。
讨论 本法标准铅溶液为每lml相当于10μg的Pb2+。适宜目视比色的浓度范围为每27ml溶液中含10μg～20μg的Pb2+，相当于标准铅溶液1 ml～2ml。USP（24）固定取标准铅溶液2ml，再根据各药品规定含重金属的限量改变供试品取用量。
溶液的pH值对于金属离子与硫化氢呈色影响较大。当pH3.0～3.5时，硫化铅沉淀较完全。酸度增大，重金属离子与硫化氢呈色变浅，甚至不显色。因此供试品若用强酸溶解，或在处理中用了强酸，在加入硫代乙酰胺试液前，应先加氨水至溶液对酚酞指示液显中性，再加pH3.5醋酸盐缓冲液调节溶液的酸度。 供试品处理 供试品如有色，应在加硫代乙酰胺试液前在对照溶液管中滴加少量稀焦糖溶液（取蔗糖用小火加热后，再混悬于水中作成。随加热温度与时间的不同，其水溶液呈黄、褐或棕黑色。根据供试溶液颜色，适当掌握蔗糖的加热程度），使之与供试品溶液管的颜色一致，然后再加硫代乙酰胺试液比色。如按以上方法仍不能使两管颜色一致，可取两倍量供试品，加水溶解后，分成两等份，在一份中加硫代乙酰胺试液，用孔径3μm的滤膜滤除金属硫化物沉淀后，加入规定量的标准铅溶液作为对照溶液，再与另一份供试溶液按药典规定方法处理后比较。
供试品中若有微量高铁盐存在（如葡萄糖酸亚铁），在弱酸性溶液中将氧化硫化氢析出硫，产生浑浊、影响比色。可先加抗坏血酸0.5g～1.0g，使高铁离子还原为亚铁离子，再按上述步骤分析。为保证分析的平行性，应在对照液中加入相同量的抗坏血酸。 供试品为铁盐，如枸橼酸铁铵，可在相对密度1.103～1.105的盐酸（盐酸9ml加水6ml）中，使大部分Fe3+生成HFeCl，用乙醚提取除去；再加氨试液使溶液呈碱性，用氰化钾掩蔽残留的微量铁盐后，加硫化钠试液检查铅盐。
药物本身也能生成不溶性硫化物、干扰重金属的检查时，应作特殊处理。如葡萄糖酸锑钠中铅盐检查。当供试品加水和酒石酸溶解后，可先加10%氢氧化钠试液和氰化钾试液，使锑形成稳定的配位化合物，再加硫化钠试液，这时锑不能生成有色硫化锑，因而不干扰铅的检出。 第二法 适用于在水、乙醇中难溶，或能与重金属离子形成配位化合物的有机药物。
原理 将供试品炽灼破坏后，加硝酸加热处理，使有机物分解、破坏完全后，再按第一法进行检查。
方法 除另有规定外，取炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸0.5m1，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后(或取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5ml～1.0m1，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500℃～600℃炽灼使完全灰化)，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml；另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25ml；照上述第一法检查，即得。
注意事项 炽灼温度对重金属检查影响较大，温度越高，重金属损失越多，例如铅在700℃经6h炽灼，回收率仅为32%。因此，应控制炽灼温度在500℃～600℃。
炽灼残渣加硝酸加热处理后，必须蒸干、除尽氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。蒸干后残渣加盐酸，是使重金属成为氯化物。为了消除盐酸或其他试剂中可能夹杂
重金属的影响，在配制供试品溶液时，如使用盐酸超过1ml（或与盐酸1ml相当的稀盐酸），使用氨试液超过2ml，以及用硫酸与硝酸进行有机破坏或其他试剂处理者，除另有规定外，对照品溶液应取同样量试剂在磁皿中蒸干后，依法检查。 含钠盐或氟的有机药物在炽灼时能腐蚀瓷坩埚而引入重金属，应改用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿。安乃近及盐酸氟奋乃静中重金属的检查即如此。
第三法 适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性水溶液的药物，如磺胺类、巴比妥类药物等。 原理 在碱性介质中，以硫化钠为显色剂，使pb2＋生成PbS微粒的混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，不得更深。
方法 除另有规定外，取供试品适量，加氢氧化钠试液5ml与水20ml溶解后，置纳氏比色管中，加硫化钠试液5滴，摇匀，与一定量的标准铅溶液同法处理后的颜色比较。 硫化钠试液对玻璃有一定的腐蚀性，且久置后会产生絮状物，应临用新制。 第四法 微孔滤膜法。适用于重金属限量低的药物。
原理 使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上，比较供试品和一定量的标准铅溶液同法处理后产生的色斑深浅，确定重金属是否超过限量。
试验装置 所用滤器由具有螺纹丝扣并能密封的上下两部分，以及垫圈、滤膜和辅助滤板所组成（图3-1）。
图3-1 微孔滤膜过滤法检查重金属装置 第四版 第29页 图2-1
方法 精密量取标准铅溶液一定量，用水或规定溶剂稀释成10ml，加入醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与硫代乙酰胺试液1.0ml，摇匀，放置10min，用50ml注射器转移至滤器中滤过（滤速约1ml/min），滤毕，取下滤膜，放在滤纸上干燥，制得标准铅斑；另取供试溶液10ml，照标准铅斑的制备法，自“加入醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml”起，依法操作，生成的铅斑与标准铅斑比较，不得更深。
注意事项 供试品溶液如有色或浑浊，应进行预滤。如滤膜上有污染，应更换滤膜再滤，直至滤膜无污染，再制备铅斑、检查。
因重金属限量低时，用纳氏比色管难以观察比较，改用微孔滤膜法，将重金属的硫化物富集于滤膜上，比较色斑颜色深浅，可以提高检查的灵敏度。BP（2000）亦采用此方法，所用的过滤装置也相似。
讨论 各国药典的重金属检查法不尽相同，USP(24)检查重金属时，主要使用硫代乙酰胺，特殊情况下也采用新制饱和硫化氢试液。除用供试溶液管与对照溶液管外，还规定用监控管(含25ml供试品溶液和2ml标准铅溶液)。三管均调pH为3.0～4.0，加水至40ml，分别加入醋酸盐缓冲溶液2.0ml、硫代乙酰胺试液1.2ml后，加水稀释至50ml，摇匀，放置2 min 后进行比较。规定：供试溶液管呈色不得深于对照溶液管；监控管呈色应深于或等于对照溶液管，若浅于对照溶液管，则供试药物中重金属可能不呈游离状态或与供试药物形成配位化合物，应另取供试品炽灼破坏后再检查。此法适用于有机药物，若无机药物对检查有干扰时则不能排除。
BP(2000)采用硫代乙酰胺法检查重金属。方法是：取12ml供试品溶液作为供试品管，标准铅溶液10ml加供试品溶液2ml作为标准管，另取水（或其他溶剂）10ml和供试品溶液2ml作为空白对照管。上述三管在相同条件下显色后，供试品管所呈棕色不得深于标准管，标准管与空白管比较应显棕色。在标准管中加入一定量供试品溶液，目的是减小或消除供试品对检查的影响，空白管则用来检查标准管的呈色是否正常。
JP(14)使用硫化钠试液作为重金属检查的显色剂。硫化钠的纯度应很高，否则放置时易析出乳硫，影响比色。