(3)可变的acceptor位点 (4)exon越迁
(5)互相排斥的exon
图7-11 可变剪切的不同类型 7.1.4 实例
下面我们以水稻的Rubisco activase基因为例,看一下它的可变剪切形式有哪些? 方法步骤:
(1)在NCBI数据库中搜索水稻的Rubisco activase基因相关的EST数据,包括CDS (2)收集到180条EST数据
(3)用phrap软件拼接这些序列,得到6个contigs
(4)将这6个congtigs用sim4软件比对到水稻的基因组上
(5)可以看出Rubisco activase至少存在两种剪切形式。如图7-12所示。
图7-12 水稻Rubisco activase基因的剪切形式 2 基于EST序列比较的SNPs的筛查
(1)Picoult等利用公共的EST数据库快速筛查候选的SNPs。他们从EST数据库中提取了19个不同的cDNA文库,利用Phred软件对300,000条EST序列进行碱基判读,然后用Phrap软件进行重叠群组装,最后用Consed软件进行SNP的查看分析。他们共筛查出850个候选的SNPs位点,然后他们选取88个位点,证实了55个,证实率62.5%。
(2)Useche等采用Phrap/CAT/PolyBayes软件从公共数据库下载了68,000条玉米的EST序列,发现了2439个候选的SNPs位点以及822个插入/缺失多态性位点(InDel)。
(3)Jalving等通过对来自ChickEST计划的327,000条EST检测候选的SNP位点,利用Phred/Phrap/Consed软件包共筛查出32,268个候选SNPs位点。并构建了一个高密度的SNP遗传图谱。为了证实其可靠性,选取24个BalⅡ酶作用的SNPs位点,进行RFLP检测,并证实了21个位点,检出率87.5%。