蛋白质浓度的测定(2)

2018-11-23 23:35

常见问题: 1.

常规染色脱色方法和快速染色脱色方法的优缺点?

常规染色脱色方法耗时较长,但检测灵敏度更高,染色效果更加稳定。快速染色脱色方法通常检测灵敏度略低,并且在微波炉加热的过程中有时会出现暴沸导致凝胶碎裂的情况,需特别注意。另外微波炉加热导致的高温会引起染色液和脱色液中的乙酸的挥发,最好能在通风橱中进行。

考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液Commassie Blue Fast Staining Solution 包装:

Cat.No WB021 考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液 WB021 WB021

500ml 130.00 250ml 70.00 产品名称 规格 100ml 价格 35.00 产品简介:

※考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast Staining Solution)是以考马斯亮蓝

R-250为染料配制而成的染色液,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE蛋白电泳胶的快速染色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。

※考马斯亮蓝快速染色液采取新配方,超薄胶只需染色10分钟,就可以显示出清晰的蛋白电泳条带;检测到低达10ng的蛋白电泳条带。

※无需对蛋白和凝胶进行固定,无需脱色,操作更加简单。

※本考马斯亮蓝快速染色液是一种无毒,无刺激性气味的高度环保型染色液。普通的常规方法需使用剧毒的甲醇及强刺激性的乙酸,而本公司生产的考马斯亮蓝快速染色液则采取全新配方,实现了无毒和无刺激性气味。

※本染色液和质谱分析兼容,即经过本染色液染色的蛋白条带或蛋白点可以用于后续的质谱分析。

贮存:

室温密封保存

使用说明

1.洗涤 电泳结束后,将凝胶剥离玻璃板,放入烧杯或塑料盒中,加入100ml的蒸馏水。煮沸或微波炉中加热至沸腾,维持1分钟,弃水。

2.染色 倒入适量染色液,煮沸或微波炉中加热至沸腾,维持2分钟;如果胶非常厚,染色的时间需适当延长。

注:在微波炉中适当加热,可以大大加快染色速度。加热时,敞开容器口,容器尽量大些 ,以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。

3.脱色 到掉染色液(可以回收重复使用),加入适量水,煮沸或微波炉中加热至沸腾,维持2分钟;如果胶非常厚,脱色的时间需适当延长。也可换水3-4次,至背景无色 4.扫描或拍照记录

注意事项:

1.本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。

2.如果使用微波炉加热,敞开容器口,容器尽量大些,以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。如果时间不是特别紧急,推荐按照常规方法进行:洗涤3次,每次摇床摇晃5分钟→染色1~2小时→脱色到出现清晰条带。 常见问题:

1. 无染色条带:可能SDS未除尽、染色时间过短或上样量太少,建议电泳时加适当量的BSA等作为阳性对照。

2. 背景太高:可能SDS等杂质没有除尽,建议延长洗涤时间或增加洗涤次数。

5.考马斯亮蓝染色

这种染色方法在单条电泳带中蛋白质最小检出量为0.1μg的蛋白。通常可以根据所需要的敏感度来选择是使用考马斯亮蓝染色或银染色。

⑴ 戴上手套避免将手指印留在电泳凝胶上,将凝胶移入一个小的盛有少量考马斯亮蓝(20ml已经足够)的容器内(小心不要将胶撕破)。或将玻璃板连同凝胶浸在染料中轻轻振荡直至凝胶脱落。

⑵ 对于0.75mm的凝胶,可在摇床上缓慢震荡5分钟~l0分钟,对于1.5mm的凝胶,则需10分钟~20分钟,在染色和脱色过程中要用盖子或封口膜密闭容器口。弃去染液,将凝胶在水中漂洗数次。戴手套以避免将双手染色。

⑶ 加入考马斯亮蓝脱色液(约50ml),清晰的条带很快会显现出来,大部分凝胶脱色需要1h,使用过的脱色液则可用水冲洗掉。为了脱色完全,需数次更换脱色液并震荡过夜。


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