多种.植物总DNA提取方法及详细步骤(2)

2018-11-27 16:47

液中含有1.5 mol/L的钾及2.5 mol/L的乙酸根。待验证

改进的饱和在无菌水配制的饱和NaCl溶待补 NaCl-CTAB溶液液中,加2%PVP,充分溶解后,(Rogstad, 1992;潘晓华缓慢加入CTAB粉末,加热搅等, 2004) 拌至溶解,直至溶液呈透明凝 胶状 (一般每升饱和NaCl溶

液需加30~40g CTAB),冷却后,加EDTA(pH8.0)至50mmol/L及2%2-ME,搅拌,分装至10ml离心管中。

电泳缓冲液P602分子克隆 TEN缓冲液P607 IPTG P612 X-galP614 乙酸钾 P613

三、实验设计 1、五种试材

A. 种苗叶片:种子萌发的幼苗叶片(暗培养1~2d),称量,用灭菌双蒸水清洗后备用

B. 新鲜叶片:采自田间的新鲜叶片,称量,用灭菌双蒸水清洗后干燥,4℃的黑暗中饥饿1~2d

C. 干燥叶片:采自田间的新鲜叶片,称量,用灭菌双蒸水清洗后干燥,装入袋中,加入国产的二级变色硅胶干燥(至少10:1),室温备用。

D. -20保存:采自田间的新鲜叶片,称量,用灭菌双蒸水清洗后干燥,装入袋中,-20保存,备用。

E. 改进的饱和NaCl-CTAB溶液保存:采自田间的新鲜叶片,称量,用灭菌双蒸水清洗后干燥,装入已盛有1ml保存液的2ml离心管中,4℃备用。

样品C~E保存15d后用于提取。

2、以A为起始材料,从CTAB法、高盐低pH值法中筛选高效的提取方法。 3、以B~E为试材,探讨可行的试材保存方法。 4、评价指标:紫外检测(纯度、浓度、得率)、电泳检测、酶切检测、RAPD分析(可能没有条件作)


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