⑶细胞间相互作用改变（识别改变；表达水解酶类；产生新的表面抗原） ⑷蛋白表达谱系或蛋白活性改变（胚胎细胞蛋白、端粒酶活性升高）
⑸mRNA转录谱系的改变（少数基因表达不同；突变位点不同，表型多变） ⑹染色体非整倍性
体外培养的恶性转化细胞的特征
⑴恶性转化细胞同癌细胞一样具有无限增殖的潜能 ⑵在体外培养时贴壁性下降 ⑶失去接触抑制
⑷培养时对血清依赖性降低
⑸当将恶性转化细胞注入易感动物体内，往往会形成肿瘤
3．Why is it gene abrupt change accumulation and the natural selection result that the carcinoma is come into being?
(1)促进细胞增殖相关基因突变：原癌基因 (proto-oncogene)突变形成癌基因(oncogene)
a.原癌基因存在于细胞基因组中(c-onc)，是控制细胞生长和分裂的基因。编码多种类型的蛋白质---细胞生长和分裂的调控因子。癌基因是控制细胞生长和分裂的原癌基因的一种突变形式。
b.这类基因功能获得性突变(显性突变)，其产物量增加或活性升高，促进细胞癌
变。
(2)抑制细胞增殖相关基因突变：肿瘤抑制基因(tumor-suppressor gene)
a.抑癌基因是正常细胞增殖过程中的负调控因子。抑癌基因编码的蛋白抑制细胞增殖，使细胞停留于检验点上阻止周期进程。
b.抑癌基因发生功能丧失性突变(隐性突变)，则导致细胞周期失控而过度增殖。 c.Rb基因突变导致视网膜母细胞瘤形成。pRb对细胞周期运转作用 d.53基因突变将导致细胞癌变或凋亡
(3)细胞癌变是基因突变累积和自然选择的结果，所以患者多为年长者。 (4)原癌基因与肿瘤抑制基因产物协调作用，避免细胞癌
第八章 分子生物学技术原理 Chapter 8 Molecular Biotechnology Principle
一 选择题 B, A, C, B, D, A, B 名词解释
1．基因工程：在体外，将各种来源的DNA片段与载体DNA结合成一个重组载体；重组载体可转化或转染宿主细胞，并在宿主细胞内表达，产生特定的基因产物。
2．genome DNA library：A set of clones containing DNA fragments derived from a genome, rather then from RNA.
3．cDNA library： cDNA文库，以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA (cDNA )，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，
即获得cDNA文库.
4．plasmid：A circular DNA that replicates independently of the cells chromosome. 5.PCR :polymerase chain reaction, amplification of a region of DNA using primers, Mg2+ , dNTP and templates that flank the region and repeated cycles of DNA polymerase action.
6. Cloning: asexual reproduction in eukaryotes or replication of DNA(genes) with aid of plasmid vectors in appropriate host cells(molecular cloning).
7．Cosmid：they are made of plasmid sequences joined to the cos sites of phage λ; they are small (4-6Kb) and can therefore accommodate cloned DNA fragments up to some 47 Kb in length. It can be used to establish genomic library.
8: Vectors: A DNA(a plasmid or a phage DNA) that serves as a carrier in gene cloning experiments.
9．蛋白质组：Proteome，于1994年由澳大利亚的Marc Wilkins和Keith Williams首次提出，是指细胞内全部蛋白质的存在、性质、生理活动，着重是全面性和整体性。
10．蛋白质工程：从一个野生型基因组中将编码某个蛋白质的基因克隆进一个载体后，通过定点突变改造基因，从而使表达出来的蛋白质具有我们所需要的特性。
二 简答与论述
1．试述什么是polymerase chain reaction, PCR及操作关键
定义：polymerase chain reaction即聚合酶链式反应，是以DNA的一条链为模板，在聚合酶的催化下，通过碱基配对使寡核苷酸引物向3′方向延长合成模板的互补
链。它是体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，又称为基因的体外扩增法。实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。 PCR包括三个反应过程：
（1）变性：双螺旋DNA分子的H键断裂，双链DNA变性为单链。 （2）退火：引物复性同单链DNA互补序列结合。
（3）延伸：DNA聚合酶催化使引物延伸。三步为一循环，每一循环产物可作为下一步循环的模板，一段时间后，特异性DNA片段得到大量复制 。 在PCR反应的第一个循环中，包括模板DNA变性，变性后的模板DNA与合成的引物(primer)退火，链延伸。
第一个循环完成后、开始第二个循环，其方式是重复第一个循环的变性、退火、延伸……。
在一个PCR反应中究竟进行多少循环，由所研究的目的决定。 如果需要扩增片段量大，则多几个循环，否则少几个循环。 在PCR反应中的一般温度控制如下： 变性 94℃ 0.5min 退火 55℃ 0.5min 延伸 72℃ 1 min
原核生物的DNA模板变性，94℃是足够的；退火温度可以变化，一般低于Tm值10℃即可，如果目的基因的拷贝数极少，退火温度在开始的几个循环中可适当降低，甚至到42℃；退火时间也可变化；链的延伸温度，一般是72℃；延伸的时间可由扩增片段的大小而定，一般识为DNA聚合酶的聚合速度是
1000bp/min。
PCR反应混合物包括： 模板DNA 0.1一1ug Primer 1 20 pmol prirner 2 20pmol
缓冲液(Tris-HCl，pH8.3) 20mmol/L dNTP 各50umol/L Taq DNA pol 5单位 ddH2O) 补足到50ul
在PCR专用管中完成反应，反应前应在混合物表层加少许矿物油，以防液体蒸发。
目的片段大于3kb时的扩增效率比1kb时的低。 2．简述基因克隆的全过程
任何DNA克隆的过程包括五个基本过程： ①获得目的DNA片段； ②将目的片段连接到载体上；
③将人工重组的DNA引导进入受体细胞； ④检出目的转化子；
⑤将目的转化子进行表达分析。 3．简述Southern blot过程
即Southern印迹杂交作图，提取DNA→内切酶消化→琼脂糖凝胶电泳→将凝胶上的DNA变性→转膜。经染料或紫外线处理而固定DNA的步骤叫做―印