迹‖(Blot)。值得注意的是，只有单链DNA才能附着在滤膜上。完成印迹后，加入带标记的探针杂交，使用放射自显影等方法即可检出目的片段(见图12.6)。Southern印迹法也可用于判断哪些片段相互重叠。用酶1消化后得到的片段作探针，标记，与酶2的消化片段进行杂交。只有二者相互重叠的部位才能进行杂交。 4．论述cDNA基因文库的构建过程及应用
真核生物中，成熟的mRNA翻译产生的蛋白质和mRNA共线性。所以mRNA经过反转录酶的作用，产生互补于mRNA的DNA、这种DNA称为cDNA。按照构建基因文库的方法构建cDNA文库，再从cDNA文库中选择目的基因。 （1）mRNA的制备
细胞中如果某种mRNA的含量丰富，那么制备它就容易。例如，在鸡的输卵管中，有一种mRNA是非常丰富的，它编码卵清蛋白，每个细胞中大约有10万个分子，在很少的cDNA克隆中就可选择到目的克隆；
如果mRNA的含量贫乏，那么必须首先富集mRNA，富集的方法是用琼脂糖凝胶电泳分离、RT-PCR扩增、oligo dT亲和层析柱分离等构建。 （2）cDNA基因文库的构建
以mRNA为模板，通过反转录酶的作用，获得大量的cDNA。获得cDNA的方法有两类，一是不完全cDNA克隆，即在反转录后加碱，除去mRNA，新合成cDNA的单链末端自动弯曲，该弯曲成为第二条链合成的引物，然后用S1 核酸酶切开发夹结构成为双链cDNA片段。S1 酶的作用往往使一些有用的核苷酸被除去，产生非完整的cDNA，这样构建的cDNA文库可能是不完整的cDNA文库。 另一种方法是当反转录完成后，并未立即除去mRNA，而是利用末端转移酶在cDNA末端加尾，然后再除去mRNA。这样合成的cDNA，即使用S1核酸酶除
去发夹结构，也不会损坏目的基因的任何核苷酸，这种方法就是全长双链cDNA的合成，利用它构建的cDNA文库就是全长cDNA文库。 （3）在cDNA克隆中随机引物的应用
cDNA合成始于mRNA的poly(A)+，这样的合成有三种局限性： ①并非所有的RNA 3‘端都带有poly(A) +序列； ②对于大的mRNA难于预料cDNA的全合成；
③由于cDNA合成始于poly(A) + mRNA 3‘端，所以，3‘端的序列被富集。 前两种局限性在RNA病毒基因克隆中是共同的，第三种局限性对以λgtl1或λZAP为载体构建cDNA文库和筛选融合多肽的克隆可能是重要的。
克服这些局限性的方法是使用随机引物，这类引物是化学合成的6核苷酸的混合物，它们沿RNA链随机退火，促进全长cDNA的合成。 5．当前蛋白子分子结构研究法有哪些？ （1）X-射线衍射结构分析 （2）核磁共振 （3）圆二色性光谱 （4）荧光光谱 （5）激光拉曼光谱 （6）氢同位素交换 （7）小角中子衍射