1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation.
2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5. Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v). 3. Stir at 4℃for 2 hours.
4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours.
5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( e.g., RNase-free ddH2 for virus RNA prep).
沉淀法-病毒提纯方法
主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒，有中性盐沉淀法、聚乙二醇(PEG)沉淀法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、皂土法和鱼精蛋白沉淀法等。
1.中性盐沉淀法：病毒一般在45%以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀，且保持其感染性。在含有病毒的组织培养液中加入等体积的饱和硫酸铵，可以很容易地沉淀某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。
2.聚乙二醇沉淀法：聚乙二醇(PEG)为水溶性非离子型聚合物，具有各种不同的分子量，用于病毒沉淀的主要是分子量为2 000～6000的PEG。将PEG配成50%左右的溶液，或直接将固体PEG加于病毒悬液中，使其达到所需浓度，通常在4℃搅拌过夜，然后离心使病毒沉淀。Tanncock(1985年) 成功地用PEG浓缩了禽脑脊髓炎病毒。
3.有机溶剂沉淀法：甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒，但乙醚、氯仿等脂溶剂对于具有脂质囊膜的病毒具有破坏和灭活作用，故不适于这类病毒的浓缩提纯。
4.等电点沉淀法：病毒粒子在等电点时，所携带的正电荷与负电荷相互中和，因而失去相互排斥的作用而发生沉淀。多数病毒的等电点在pH4.5～5.5之间，因此在pH3～6范围内均可沉淀，由于一部分细胞成份在等电点时亦发生沉淀，此法效果不太理想，但从感染的组织培养液中浓缩病毒，可以获得较好结果。应用酸性范围的等电点沉淀或分级沉淀病毒时，必须注意pH对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。
5.皂土法：Girin(1989年)应用皂土在酸性条件下(pH4～4.5)吸附轮状病毒SA-11，再在碱性条件下（pH8.5），又使其洗脱下来，从而达到纯化目的。
6.鱼精蛋白沉淀法：鱼精蛋白为碱性蛋白，具有携带其它蛋白质共沉淀的作用，能和直径大于50nm的病毒共同沉淀而不影响病毒的感染力。当向这种沉淀物加入1mol/LNaCl时，病毒又重新释放到悬液中，而鱼精蛋白仍然沉淀。直径小于50nm的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。因此，可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于50nm的异种蛋白质。
聚乙二醇HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH(n＞4)( Polyethylene Glycol 简写为 PEG)，它的亲水性强，溶于水和许多有机溶剂，对热稳定，有广泛围的分子量，在生物大分子制备中，用的较多的是分子量为6000～20000的 PEG。
PEG 的沉淀效果主要与其本身的浓度和分子量有关，同时还受离子强度、溶液pH 和温度等因素的影响。在一定的pH 值下，盐浓度越高，所需PEG 的浓度越低，溶液的pH 越接近目的物的等电点，沉淀所需PEG 的浓度越低。在一定范围内，高分子量和高浓度的PEG 沉淀的效率高。以上这些现象的理论解释还都仅仅是假设，未得到充分的证实，其解释主要有：①认为沉淀作用是聚合物与生物大分子发生共沉淀作用。②由于聚合物有较强的亲水性，使生物大分子脱水而发生沉淀。③聚合物与生物大分子之间以氢键相互作用形成复合物，在重力作用下形成沉淀析出。④通过空间位置排斥，使液体中生物大分子被迫挤聚在一起而发生沉淀。
有机聚合物沉淀的优点是：①操作条件温和，不易引起生物大分子变性；②沉淀效能高，使用很少量的PEG 即可以沉淀相当多的生物大分子；③沉淀后有机聚合物容易去除。
水溶性非离子型聚合物沉淀法常用的聚合物为聚乙二醇（PEG）及硫酸葡聚糖。水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制尚不清楚，大致有如下解释：①聚合物与蛋白质形成共沉物；①聚合物与蛋白质之间发生水的重分配；①聚合物与蛋白质形成复合物。此法受许多因素影响，主要是pH、离子强度、蛋白质浓度和PEG的分子量等。分子量为 2000～6000的PEG皆适宜于做蛋白沉淀用。如若使用得当，效果甚为满意。一般认为，PEG浓度在3％～4％时沉淀免疫复合物，6％～7％可沉淀IgM，8％～12％可沉淀IgG，12％～15％可沉淀其他球蛋白，25％可沉淀白蛋白。最突出的应用是用3％～4％的PEG沉淀免疫复合物，未结合的抗原和抗体留在溶液中。按此原理设计了快速测定法和循环免疫复合物测定法
从网上搜索到得关于PEG沉淀提纯病毒的方法，先汇总至此贴，希望大家支持本版 1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；
2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000
就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱，Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。)；
3、4℃过夜或放置一段时间；
4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀； 5、将病毒沉淀加入适量的pbs中，4℃过夜； 6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。 还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。
PEG沉淀法提纯病毒
1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；
2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱，Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。)；
3、4℃过夜或放置一段时间；
4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀； 5、将病毒沉淀加入适量的pbs中，4℃过夜； 6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。 还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。
Concentrating virus (PEG6000)
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1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation.
2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5. Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v).
3. Stir at 4 0Cfor 2 hours.
4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours.
5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( e.g., RNase-free ddH2 for virus RNA prep).
PEG-it?慢病毒浓缩试剂 ? 价 格： ￥3802.5 ? 说 明： 欢迎询价详谈 ? 货 号：LV810A-1
PEG-it?慢病毒浓缩试剂
原理
PEG是高分子聚合物，具有高亲水性，在溶液中会吸收大量水分，减少病毒之间的距离，使病毒与病毒能够很容易的聚合在一起，病毒的相对浓度提高，达到沉淀浓缩的目的。
PEG-it?中还含有特定的（SBI专属的）缓冲液，它能够保持病毒的活性。少量残留的PEG-it?还会提高感染效率，使病毒更稳定。 图1 使用简便快捷
只需将5倍的PEG-it?溶液与包含病毒颗粒的细胞培养基混合离心30分钟，即可得到10-100倍的病毒浓缩液 特点
?快捷：全程只需30min
高效：?能使病毒颗粒浓缩10-100倍
安全：?对所有靶细胞，包括胚胎干细胞是无毒的
?使用方便：无需使用特别的仪器，避免了昂贵的超高速离心机的使用，?只需普通离心机，低速离心即可
无残留：?没有细胞残片的残留，避免对细胞的毒性和免疫原性 ?提高转导效率：为动物转导提供高滴度的病毒 特别?适合大体积的病毒浓缩，解除了超滤管小量的限制 产品信息 货号 产品名称 包装体积 价格（￥） 说明 LV810A-1 PEG-it? Virus Precipitation 100 mL 3802.5 适用于400ml慢病毒细胞上清液浓Solution (100 mL aliquot) 缩 LV825A-1 PEG-it? Virus Precipitation 250 mL 8287.5 适用于1L慢病毒细胞上清液浓缩 Solution (250 mL aliquot)
纯化病毒用终浓度10%PEG处理后8000g离心，溶解于PBS。这样的方法对吗？ PEG沉淀的原理是什么啊？
是这样的，纯化病毒和噬菌体都可以，原理就是PEG8000是一种高度的网状聚合物，很粘稠，可以把病毒沉淀下来。 Catalog # Product Name+ Size Price Buy Now K904-200 PEG Virus Precipitation Kit 200 preparations $725.00 K904-50 中文名称 供应商 产品报价 PEG Virus Precipitation Kit 50 preparations $245.00 PEG Virus Precipitation Kit PEG病毒沉淀试剂盒(200次) Biovision ￥11600/200次分析 包装出来的重组病毒常常含量很少，因此通常需要浓缩之后才能进行储存或其它应用。另外，在病毒包装过程中，可能会产生有毒的蛋白或生物分子杂质。因此需要一种快速、简单而便宜的方法来浓缩病毒，同时去除杂质。 BioVision的PEG病毒沉淀试剂盒提供了一种简单方便省时的方法来浓缩病毒，无需超速离心。本试剂盒可用于小实验样品处理或者大规模高产出、高生物量病毒制备。本试剂盒可利用细胞培养液或者环境样品浓缩逆转录病毒、杆状病毒、慢病毒、噬菌体等。浓缩倍数可达100倍以上。试剂盒中还有一种优化的重悬溶液可最大化地进行病毒复苏，根据病毒类型和来源，复苏比例在40-100%不等。整个过程都使用无毒试剂，浓缩的病毒可用于感染实验、DNA或RNA纯化等。 1、一种快速简单便宜的方法浓缩病毒去除杂质；2、简单方便省时的方法浓缩病毒，无需超速离心；3、病毒可浓缩100以上；4、整个过程都使用无毒试剂。 请在接收到该Biovision品牌的PEG病毒沉淀试剂盒(200次)产品后，置于-20℃保存。 产品货号 K904-200 背景资料 产品描述 产品特点 保存建议
中文名称
PEG Virus Precipitation Kit PEG病毒沉淀试剂盒(50次)
供应商 产品报价
Biovision ￥3920/50次分析 产品货号 K904-50 超速离心法-病毒提纯方法?
录入时间:2009-6-26 9:30:33 来源：青岛海博
?
病毒粒子经过初步浓缩之后，要进一步纯化，通常采用超速离心法，它是分离提纯不同大小的病毒的有效方法之一。在应用超速离心法沉淀病毒时，必须了解所用离心机的离心力。离心机由于转头的回转产生了强大的离心力，这种离心力是随转头的大小和离心管至转轴中心的距离而变化的。高速和超速离心机的离心条件，有的以每分钟速度(r/min)表示，有的则以离心力——重力加速度g(980cm/S?2)为单位来表示。离心沉淀时，沉降]速度与离心力有关。当运转角速度为ω，运转半径为R时，则：?[JZ]离心力g=ω?2Rav，ω=(2πr/min)/60，?[JZ]g=[SX(]4πr/min?2[]3]600×980[SX)]×Rav?????[HT5”SS][JZ]图13-2〓角转头的横剖面图?[JZ]表明从旋转中心到离心管顶部、中部及底部的距离。??[HT5SS] 上式中，Rav为离心管中心至转轴中心的平均距离(如图13-2)。从上式可以作]出r/min、R与g三者关系的贯线图(如图13-3)。三者中如知其二，就可推算另一数值。如转速超过7万，或R为英寸时，可参阅图13-4。?????[HT5”SS][JZ]图13-3〓推算转头离心力的贯线图?????[JZ]图13-4〓推算转头离心力的贯线图??由此图可以获得与半径相关的相对离心力的值。将尺放在图左侧表示离心头中的离心管距转轴中心的距离(即旋转半径的标尺)上，]然后使之与预选转速(即图右侧的离心速度标尺)成一直线，在图中央的标尺上即可读出相对]离心力之值。图中点线表示测量一个相对离心力的例子。?[HT5SS]离心机转速在
4000r/min左右的称为低速(普通)离心机；转速至25]000r/min左右的]称为高速]离心机；转速25]000r/min以上的称为超速离心机。高速和超速离心机装有冷冻装置和抽]真空]装置，以保持离心腔中恒定的低温，并减少转头运转时空气的摩擦力。超速离心机有制备和]分析用两类，最近又生产出制备、分析及区带连续离心三用装置在一起的离心机，有的还带]扫描装置。? 使用超速离心机的分离提纯方法有三种：(1)差速离心法；(2)速度区带离心法；(3)平衡密度梯度离心法(或等密度梯度离心法)。? 1.差速离心法?
这是应用较早的简单方法，建立在不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差别的基础上。具体做法是将被分离的样品交替进行低速离心与高速(或超速)离心。沉降速度差别在一个或几个数量级的粒子，可用本法分离提取。粒子大小、转速与离心沉淀时间的关系，如图13-5。?????[HT5”SS][JZ]图13-5〓病毒粒子大小、转速及离心沉淀时间的关系图??[HT5SS]差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附?释放的病毒]悬液中提纯病毒。在由感染细胞或组织匀浆中提取病毒时，由于与病毒大小相近的细胞亚单位及碎片的存在，提纯效果不理想。差速离心法的优点是能迅速处理大量样品，故常作为病毒精制的第一个阶段，或者用于病毒样品的浓缩和粗提。? 以差速离心法分离提纯病毒时，经常以低速(2]000～3]000r/min，20～30分钟)及中]速(10]000r/min，20～30分钟)去除较大的宿主细胞碎片、污染的细菌及其他较大的杂质。]然后，选择在60分钟内能够沉淀80%以上的病毒粒子的较高速度，离心1～2小时，使病毒沉淀]。对中、大型病毒如流行性感冒病毒，在经红细胞吸附?释放后，于25]000r/min离心60分]钟，即可达到目的。小型病毒如脊髓灰质炎病毒、披膜病毒，则需以35]000～45]000r/min离心1～2小时。高速或超速离心沉淀物，可用研磨和超声波振荡等方法打碎后悬浮于缓冲]液中。对于非病毒杂质较多的样品进行差速离心，由于病毒对沉淀物的非特异性吸附而有较多损失。? ] 2.速度区带离心法
?是根据被分离物质在强大离心力中沉降速度不同而进行的分离方法。该法使用的介质密度应该小于被分离物质的密度。介质可以为均一密度，也可以为梯度密度。当被分离的物质沉降到与介质密度相等的区域时就不再沉降。不同分子形成不同的区带，而称为速度区带。该法要求样品浓度为顶端浓度梯度的1/10，样品体积为离心管体积的5%。常用的介质有蔗糖、甘油、聚蔗糖等。在病毒纯化时，将病毒样品溶液层加于密度梯度层的顶部，借助病毒粒子或其亚单位成分本身的浮密度差别，在离心力作用下降到密度相等的介质层内，最后排列成带状停留不动。密度较小的粒子或成分停留在上面的几层内，密度较大的粒子或成分沉降于下面几层内。应用密度梯度法，可以获得相当纯净的病毒样品。病毒粒子或成分的沉降速度取决于其大小、形状及比重，也取决于离心力及悬液介质的密度和粘度。蔗糖是生物大分子粒子密度梯度分离时最常应用的材料，因其易溶于水，且对核酸及蛋白质呈化学惰性。常用的梯度范围从5%～20%：10%～60%。蔗糖浓度梯度离心后，蔗糖溶液的密度以折射法测定折射率，按如下公式计算：?[JZ]ρ=2?7329η??20?-2?6425?蔗糖溶液的折射率如表13-2。? 除蔗糖浓度连续梯度离心外，近来有人在两层浓度梯度上层加病毒浓缩样品，]经超速离心后将病毒收集于两层界面处；也有人在单层蔗糖浓度溶液上层加病毒浓缩样品，]经超速离心，使病毒沉淀于蔗糖溶液底部。这两种方法比较简单，但浓缩提纯的效果远远不]如多层连续梯度法。?
3.平衡密度梯度离心法?
平衡密度梯度离心法是根据粒子的浮密度不同而加以分离。所谓浮密度就是物质的质量减去在一定介质中所受的浮力，亦称有效密度。?[JZ]浮密度(有效密度)=m-m(ρ?0/ρ)?m为物质质量，ρ为物质密度，ρ?0为介质密度。常用的介质有氯化铯(CsCl)、氯化铷(Rb]Cl)、硫酸铯(Cs?2SO?4)、溴化钾(KBr)、酒石酸钾(K?2C?4H?4O?6)等无机或有机盐。]病毒离心时，病毒粒子ρ比介质密度ρ?0大，即ρ>ρ?0病毒沉淀，ρ<ρ?0时则上浮。]制备梯度的方法有两种：一种是在饱和的CsCI溶液上面层加病毒样品(容量比1∶4)；]另]一种是将病毒样品与CsCl浓溶液均匀地混合。一般用水平转头，经较长时间的超速离心，在]离心管中形成CsCl的浓度梯度，并由于离心力的作用，样品中的病毒粒子分布于相应密度的]区域内。这种方法在分析离心中是最常用的。应用本法时，离心转头的回转数越高，离心时]间越长，越能接近平衡状态。? 平衡密度梯度离心法广泛应用于病毒和核酸的提纯上。用平衡密度梯度离心法提纯的动物病毒有多型瘤病毒、牛痘病毒、乙型脑炎病毒、狂犬病病毒和马传贫病毒等。有的病毒在这些无机盐类溶液中被破坏，可加入0?2%～0?5%牛血清白蛋白，或用0?5%～3?0%甲]醛先将病毒粒子固定，然后进行平衡密度梯度离心，常能较好地回收病毒。大多数病毒的浮密度在1?10～1?40范围内，见表13-3。所以制备密度范围为1?0～1?7的悬浮介质，便可满]足大多数病毒密度梯度离心的需要。用CsCl溶液进行平衡密度梯度离心时，以测定25℃时CsCl溶液的折射率(ｎ??25]??D的方法)，按照下列公式求得各梯度分层液的密度：?密度范围为ρ＝1?00～1?38g/cm?3时，ρ??25?=10?2402ｎ??25??D-12?6423〓](式1)?密度范围为ρ=1?37～1?9g/cm?3时，ρ??25?=10?8601ｎ??25??D-13?4974〓(]式2)?ｎ??25??D指各梯度分层液在25℃时的折射率，ρ??25?指各梯度分层液在25℃时的]密度。?例①〓以马传贫病毒在CsCl平衡密度梯度离心后提纯于第12分段部位中，此部分CsCl溶]液折射率为1?3510，求其密度：? 将所得折射率代入式1中，则?[JZ] ρ??25?=10?2402×1?3510-12?6423=1?1923? 即马传贫病毒浮密度约为1?19。? 例②〓急性传贫马血清中游离铁蛋白在CsCl平衡密度梯度离心后提纯于第18分段部位]，此部分CsCl溶液折射率为1?3811，求其密度：? 将所得折射率代入式2中，则?[JZ] ρ??25?=10?6801×1?3811-13?4974=1?5014? 即铁蛋白浮密度约为1?50。? 各种无机盐溶液的密度与折射率的关系，一般以下列公式表示：?[JZ] ρ=a?n-b? 如果知道各种盐类溶液的系数a和b，即可按测定折射率的方法简单地求得其密度。由折射率计算密度时，常用溶质的质数a和b值及其密度的适用范围如表13-5。? 4.两种超离方法的比较?
速度区带离心法和平衡密度梯度离心法各有特点，现将这两种超离方法加以比较，具体见表]13-6??[JZ][HT5”H]表13-6〓速度梯度离心法与平衡密度梯度离心法的特点?[HT6SS][]BG(!][BHDFG2，WK11，WK20ZQ，WK20ZQW][]速度区带离心法[]平衡密度梯度离心法][BHDG4]原理[]沉降与颗粒质量成正比，以物质沉降速度的不同进行分离[]沉降与颗粒的密度成]正比，以物质的浮密度不同进行分离[BHDG6]介质[]密度小，如蔗糖、甘油、聚蔗糖，蔗糖浓度10%?67%，密度1～1?3286预制梯度，]不连]续[]密度大，如CsCl,Cs?2SO?4，CsCl浓度0～1?355，密度为1～1?9025，自成连续梯]度[BHG4]离心力场[]强，离心速度高，使被分离物质易沉降[]稍强，速度相对低，使CsCl形成梯]度，建立沉降扩散平衡[BHG4]离心过程[]样品向离心管底沉降[]不论样品起始时在什么位置，离心中样品停留于介质]的等密度部位[BHG2]离心时间[]较短，一般为几小时到几十小时[]较长，十几小时到数天[BG)F]? 5.密度梯度离心法的操作程序? (1)密度梯度的制备：制备密度梯度的方法有不连续的(即人工操作)和连续的(即机械操作)密度梯度两种。? 不连续的或分层的密度梯度的制备? 不连续的密度梯度是以人工操作法制备的，在一定温度下(一般在20℃或在25℃)配制一系列浓度差为5%的梯度溶液，例如蔗糖可配制成5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、]40%(W/V)等溶液(用蒸馏水或适宜的缓冲液配制)，用皮下注射器或微量吸管，小心地先吸取浓度最大的溶液注入离心管底，然后依次加入较低的各个浓度(40%→5%)，一层覆盖着一层地层加于离心管中，注意避免产生气泡。假如各层界面被冲动破坏，则应重新制备。也可]以将长针头插入管底，依次从浓度低到高加入各溶液。? 连续的密度梯度的制备? 为了产生一个连续的密度梯度，常用梯度混合装置来制备梯度。????? [HT5”SS][JZ]图13-6〓简易的密度梯度溶液制备装置?[JZ]A、B为盛蔗糖溶液的玻璃管。?[JZ]1?活塞双通；2?搅拌棒；3?活塞；4?连接