5、 判断各种蒽醌类成分分离的依据是什么？
6、 你能设计出比该方法更完善的实验条件吗？写出实验方法及验证方案。
（4）柱色谱精制大黄素
一、实验目的
1、学习硅胶柱色谱分离方法 2、得到大黄素精品 二、实验原理
依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚极性差异分离。 三、实验方法
1、装柱方法：100~200目硅胶10g，用脱脂棉填柱子底端。 要求：均匀，柱面平整紧密无气泡。
干法装柱：小漏斗法，下端活塞打开，硅胶均匀地倒入柱中； 湿法装柱：硅胶用洗脱剂拌均匀至无气泡，下端活塞打开，倒入柱中。 2、加样方法
要求：原始色带小，均匀。
干法上样：样品用少量丙酮溶解后，加少许（半牛角匙）硅胶拌匀，将丙酮挥尽后上于柱顶端。
湿法上样：样品用少量（<1ml）洗脱剂溶解，用吸管移入柱顶端。 3、洗脱收集：加洗脱剂洗脱，待色带冲下时，用瓶子分段收集。 分段标准：（1）色带颜色
（2）10~15ml/瓶 洗脱剂：Pet-EtOAc(7:3)
4、合并浓缩：TLC跟踪检查，合并大黄素液，回收至5ml左右。 5、放置析晶 四、注意事项
1、玻璃器皿干燥，无水； 2、装柱时，下端活塞应打开； 3、洗脱剂不能低于柱平面。 五、思考题
1、 比较湿法装柱与干法装柱的特点？ 2、 比较湿法上样与干法上样的特点？
10
（5）鉴 定
一、实验目的
1、蒽醌类化合物的颜色反应 2、大黄素熔点的测定 二、实验内容
1、熔点：大黄素（256~257℃）
2、颜色反应：比较大黄素与茜草素的颜色区别 ( 纸片反应) 试剂：%NaOH，0.5% MgAc2 三、思考题
1、大黄素、茜草素定性反应后的颜色？结构与呈色的关系？ 2、其它鉴别方法
实验三 槐类中芦丁的提取、分离与鉴定
（1）芦丁的提取
一、实验目的
1、 学习苷类化合物的提取方法 2、 得到芦丁粗品 二、实验原理
芦丁在热水中的溶解度为1：200，冷水中的溶解度为1：10000，因此，采用热水提取，冷水析出的方法提取得到芦丁。
三、实验方法
OOHOOHOOOHOHOOMe 11
20g槐米 400ml沸水，煮1hr，过滤
滤液 滤渣
300ml水煮30min，过滤 滤液
放置，抽滤，干燥 芦丁粗品
四、注意事项
1、开始用沸水提取 2、提取液要趁热过滤 3、提取时要不断补充水分 五、思考题
1、 苷类化合物提取时应注意什么？ 2、 提取液为什么要趁热过滤？
3、 槐米中的芦丁还能用什么方法提取？各有什么特点？请设计方法验证。
(2)芦丁的精制和酸水解
一、实验目的
1、 芦丁粗品重结晶，得到芦丁精品；
2、 芦丁酸水解，得到苷元槲皮素精品及糖水解液。 二、实验原理
根据芦丁在热水中溶解度大、冷水中溶解度小的性质重结晶；
OHHOOOOHOOMeOOHO
O+H,OH+MeOH,OHOHHOOOHOHOHO
12
三、实验方法
芦丁粗品 其余芦丁 1g芦丁 水（1：200）加热溶解 2%H2SO4直火回流
趁热抽滤 加热30min,抽滤 滤液 放置析晶，抽滤 沉淀 滤液（PC） 芦丁 水洗中性，95%EtOH重结晶 滤液 加2-3倍量水，静置析晶，抽滤
槲皮素
四、思考题
1、 芦丁精制时为什么要按1：200加水？ 2、 芦丁酸水解时溶液会呈现什么变化？为什么？ 3、 槲皮素重结晶时，为什么加2-3倍量水？
（3）槲皮素五乙酰化物的制备
一、实验目的
学习五乙酰化物的制备方法，得到槲皮素的五乙酰化物。 二、原理
试剂：无水吡啶、乙酸酐 三、方法
OHOHOOOHOHOHOAcOAcOOOAcOAcOAc 13
200mg槲皮素
4ml吡啶溶解，5ml乙酸酐 空气冷凝管回流加热30min 100ml冷水
搅拌至油滴消失，白色沉淀产生，抽滤 滤饼
95%乙醇重结晶
槲皮素五乙酰物 四、注意事项
1、反应在无水条件下进行，玻璃仪器干燥； 2、反应液迅速倒入冷水中搅拌； 3、注意溶剂的挥发性。 五、思考题
1、该反应为什么在无水条件下进行？ 2、反应过程中会出现什么现象？为什么？ 3、加入冷水中的目的？
4、还有什么试剂能用于槲皮素五乙酰化物的制备？请设计方案并验证。
（4）糖鉴定
一、实验目的
学习纸层析鉴定糖种类的方法，确定糖水解液中糖的种类。
二、实验原理
1、 用Ba(OH)2或BaCO3将酸水解液SO4-去除，调PH7； 2、 糖的极性差异，Rf值不同，与标准品对照鉴别。 三、实验方法
1、糖水解液的前处理
20ml上清液
加Ba(OH)2或BaCO3，调PH7，抽滤 滤液
直火加热浓缩 1ml浓缩液
2、PC（圆形滤纸法）
14