19.乳糖操纵子中的I基因编码产物是
A.β-半乳糖苷酶；B.透酶；C.乙酰基转移酶；D.一种阻遏蛋白 20.下列关于TATA盒的叙述，正确的是
A.是与RNA-pol稳定结合的序列；B.是蛋白质翻译的起始点；C.是DNA复制的起始点；D.是与核蛋白体稳定结合的序列；E.是远离转录起始点，增强转录活性的序列 21.下列哪种乳糖操纵子序列能与RNA聚合酶结合
A. P序列； B. O序列；C. CAP结合位点；D. I基因；E.Z基因 22.共同参与构成乳糖操纵子的组分
A.三个结构基因；B.一个操纵序列；C.一个启动序列；D.一个调节序列 23.下列选项中，属于顺式作用元件的有 A.启动子；B.增强子；C.沉默子；D.操纵子 24.下列属于基因表达终产物的是
A.蛋白质；B.mRNA；C.tRNA；D.rRNA 25.小分子RNA对翻译的调节机制实际是
A.反义脱氧寡核苷酸的作用；B.在翻译水平上阻遏基因的表达； C.互补RNA片段与mRNA特定位点的结合；
D.小分子正义RNA与mRNA特定序列的结合 26.真核基因的结构特点有
A.基因的不连续性；B.单顺反子；C.含重复序列；D.一个启动基因后有几个编码基因 1.B 2.B 3.A 4.B(2007) 5.B 6.C 7.A 8.C（2002）9.A 10.C 11.E（2003）12.ADA 13.BD 14.CD 15.BCD 16.BC 17.AB 18.C 19.D（2000）20.A（2006） 21. A （2006）22.ABCD（2003） 23.ABC（2006） 24.ACD
25.BC（小分子RNA的调节作用实质是由于一小段互补RNA（反义RNA）通过碱基互补的方式与mRNA特定位点结合，从而在翻译水平上阻遏基因的表达） 26.ABC（2007）
? 名词解释
基因表达gene expression; 管家基因 housekeeping gene； 乳糖操纵子lac operon；
顺式作用元件cis-acting element； 反式作用因子trans-acting factor; 单顺反子 monocistron
基因表达：基因转录及翻译的过程，即生成具有生物学功能产物的过程。
管家基因：某些基因产物对生命全过程都是必需的或必不可少的。这类基因在一个生物个体的几乎所有细胞中持续表达，称谓管家基因。
乳糖操纵子：大肠杆菌中与乳糖代谢相关的基因成簇的串连在一起共同组成一个转录单位即乳糖操纵子，包括：Z、Y、A三个结构基因，一个操纵序列O，一个启动序列P及一个调节基因I。
顺式作用元件：指可影响自身基因表达活性的DNA序列。
反式作用因子：真核转录调节因子由它的编码基因表达后，通过与特异的顺式作用元件的识别、结合，反式激活另一基因的转录，故称为反式作用蛋白或反式作用因子。 单顺反子：真核基因的一个编码基因转录只生成一个mRNA分子、经翻译生成一条mRNA分子、经翻译生成一条多肽链。
? 问答题
1. 简述基因表达的规律与方式。
基因表达具有严格的规律性，即时间和空间特异性。时间特异性是指基因表达按一定的时间顺序发生，空间特异性是指多细胞生物个体在某一特定生长发育阶段，同一基因在不同的组织器官表达不同。有些基因几乎在所有细胞中持续表达，或变化很小，即基本（组成性）表达。有些基因受到环境变化的诱导和阻遏，即基因的诱导表达和阻遏表达。
2.简述乳糖操纵子的结构及调控原理
乳糖操纵子含Z、Y及A三个结构基因，分别编码β-半乳糖甘酶、透酶和乙酰基转移酶，一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I.I基因具有独立的启动序列（PI），编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解（代谢）物基因结合蛋白（CAP）结合位点。在没有乳糖存在时，lac操纵子处于阻遏状态。当有乳糖存在时，乳糖经β-半乳糖甘酶催化转变为半乳糖，结合阻遏蛋白，使蛋白质构象变化，lac操纵子即可被诱导。当没有葡萄糖及cAMP浓度较高时，cAMP与CAP结合，CAP结合在lac启动序列附近的CAP位点，可刺激RNA转录活性；当有葡萄糖存在时，cAMP浓度降低，cAMP与CAP结合受阻，因此lac操纵子表达下降。
3.转录激活调节的基本要素是什么？
特异DNA序列决定基因的转录活性，在原核生物中包括：启动序列（promoter）、操纵序列（operator）以及其他调节序列；真核基因中包括：启动子、增强子和沉默子等顺式作用元件。转录调节蛋白可以增强或抑制转录活性，原核生物基因转录调节蛋白分为三类：特异因子、阻遏蛋白和激活蛋白；真核基因转录调节蛋白又称转录调节因子或转录因子，可分为基本转录因子和特异转录因子。DNA元件与调节蛋白对转录激活的调节最终是由RNA聚合酶体现。
4.真核基因表达调控的特点是什么？
真核基因转录有三种RNA聚合酶，多种转录因子参与；活性染色体发生结构变化：核酸酶敏感，碱基修饰变化，组蛋白乙酰化，拓扑结构变化；以正性调节为主；转录和翻译分开进行；在转录及翻译后的修饰、加工及运输等环节均可进行调控。
5.简述真核基因启动子、增强子和沉默子的概念、结构与功能。
真核基因启动子指的是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括TATA盒，它的共有序列是TATAAAA。位于转录起始点上游-25— -30bp，控制和转录起始的准确性及频率。TATA盒是基本转录因子TFⅡD结合位点。GC盒（GGGCGG）和CAAT盒（GCCAAT，位于转录起始点上游-30—-110bp区域。）典型的启动子则由TATA盒和（或）GC盒组成，具有一个转录起始点及较高的转录活性。
增强子是指远离转录起始点（1-30kb）、决定基因的时间、空间特异性表达、增强启动子转录活性的DNA序列，其发挥作用的方式通常与方向、距离无关。增强子和启动子常交错
覆盖或连续。从功能上讲，没有增强子存在，启动子通常不能表现活性；没有启动子时，增强子也无法发挥作用。
沉默子是指某些基因含有的负性调节元件，当其结合特异蛋白因子时，对基因转录起阻遏作用。
6.RNAi是在什么水平上对基因表达进行调控的？ ??细胞内存在一类双链RNA（doble-stranded RNA,dsRNA），通过一定酶切机制，转变为双链-22个核苷酸的小（分子）干扰RNA（siRNA），参与RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex，RISC）组成。RISC是一种多成分核酸酶，可使特异mRNA降解，阻断翻译过程。因此RNAi实际上是通过降解特异的mRNA，在转录后/翻译水平发生的一种基因表达调节机制。
第十四章 基因重组与基因工程 1.不能用作克隆载体的DNA是
A.噬菌体DNA； B.质粒DNA；C.细菌基因组DNA；D.腺病毒DNA 2.基因工程中，将目的基因与载体DNA拼接的酶是
A.DNA聚合酶Ⅰ；B.DNA聚合酶Ⅲ；C.限制性内切核酸酶；D.DNA连接酶； E.反转录酶
3.能识别DNA特异序列并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶是
A.核酸外切酶；B.核酸内切酶；C.限制性核酸外切酶；D.限制性核酸内切酶；E.核酸末端转移酶
4.确切的说，cDNA文库包含
A.一种物种的全部mRNA信息；B.一种物种的全部遗传信息；C.一种生物组织或细胞的全部遗传信息；D.一种生物体组织或细胞的全部mRNA信息. 5.下列DNA中，一般不用做克隆载体的是
A.质粒DNA；B.大肠杆菌DNA；C.病毒DNA；D.噬菌体DNA；E.酵母人工染色体 6.下列关于限制性内切酶的叙述哪一项是不正确的？
A.它能识别DNA特定的碱基顺序，并在特定的位点切断DNA；B.切割点附近的碱基顺序一般呈回文结构；C.它能专一降解经甲基化修饰的DNA；D.是重组DNA的重要工具酶；E.主要从细菌中获得
7.下述双链DNA序列（仅列出其中一条链序列）中，不属于完全回文结构的是 A.TGAATTCA；B.AGAATTCT；C.GGAATTCC；D.CGTTAAGC. 8.已知序列的情况下，获得目的DNA最常用的方法是
A.筛选cDNA文库；B.化学合成法；C.DNA合成仪合成；D.聚合酶链反应. 9. A.RNA聚合酶；B.末端转移酶；C.碱性磷酸酶；D.反转录酶 （1）能在DNA3’-羟基末端进行同聚物加尾的是 （2）能切除DNA末端磷酸基的是 （3）合成cDNA用的是
10.A.转化；B.转导；C.转座；D.转染
（1）插入序列和转座子介导的基因位移或重排 （2）将表达载体导入真核细胞的过程
（3）通过自动获取或人为供给外源DNA，使细胞获得新的表型 11.进行基因工程实验时，常用的技术有
A.分子杂交技术；B.DNA探针技术；C.质粒重组技术；D.基因调控技术 12.可用于基因工程载体的DNA分子有
A.染色体DNA；B.噬菌体DNA；C.细菌DNA；D.病毒DNA
13.下列关于质粒载体的叙述，正确的是
A.具有自我复制能力；B.有些质粒常携带抗药性基因；C.为小分子环状DNA；D.含有克隆位点
14.重组DNA技术中常用的工具酶
A.限制性核酸内切酶；B.DNA连接酶；C.DNA解链酶；D.转转录酶.
15.以同聚物加尾连接法连接目的基因与载体需要
A.限制性核酸内切酶；B.DNA连接酶；C.DNA拓扑异构酶；D.末端核苷酸转移酶 1.C 2.D（2002）3.D（2004）4.D 5.B（2006）6.C（1993）7.D 8.D 9.B；C；D 10.C；D;A 11.ABC 12.BD 13.ABCD(2003) 14.ABD（2001） 15.BD
? 名词解释
基因工程：在体外，用酶学方法将各种来源的DNA与载体DNA连接成为重组DNA，继而通过转化和筛选得到含有目的基因的宿主细胞，最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子的过程称为基因工程，又称基因克隆、DNA克隆和重组DNA等。
cDNA文库：以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，即cDNA，再复制成双链的cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌。不同的细菌包含了不同的mRNA为模板的cDNA分子或片段，故生长的全部细菌所携带的各种cDNA分子或片段就代表了整个组织或细胞表达的各种mRNA信息，这就是cDNA文库。
基因组DNA文库：利用限制性核酸内切酶将染色体DNA切割成许多一定基因水平的片段，其中即含有人们感兴趣的基因片段。将这些片段分子与适当的克隆载体拼接成重组的DNA分子，继而转入受体菌，使每个细菌内都携带一种重组的DNA分子。不同细菌所包含的重组DNA分子可能为不同的染色体DNA片段，这样全部的转化细菌所携带的各种染色体片段就代表了染色体的整个基因组。这些存在于转化细菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA片段的集合称为基因组DNA文库。基因组DNA文库涵盖了基因组的全部基因信息。 粘性末端：双链DNA被限制性内切酶切割后，形成的两条链错开几个碱基，而不是平齐的末端。
回文结构：大部分限制性核酸内切酶属于Ⅱ类酶，它们识别DNA位点的核苷酸序列呈二元旋转对称，这种特殊的结构顺序通常被称为回文结构。
目的基因：应用重组DNA技术为分离、获得某一感兴趣的基因或DNA序列，或者为获得感兴趣基因的表达产物-蛋白质。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因，又称目的DNA。有两种类型的目的DNA，即cDNA和基因组DNA。
restriction endonuclease：限制性核酸内切酶，为识别DNA的特异序列，并能在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。限制性核酸内切酶存在于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制-修饰体系，能够限制外源DNA，保护自身DNA，对细菌遗传性状的稳定遗传有着重要意义。分为三类，重组DNA技术中常用的限制性核酸内切酶为Ⅱ类酶。
vector载体：即基因载体，或克隆载体，是在基因工程中为携带感兴趣的外源DNA，实现外源DNA的无性繁殖或者表达有意义的蛋白质而采用的一些DNA分子，具有自我复制和表达的功能。其中，为使插入的外源DNA序列可以转录、进而翻译成多肽链而特意设计的克隆载体又称为表达载体。克隆载体有质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA，它们经适当改造后仍具有自我复制的能力，或兼有表达外源基因的能力;
plasmid 质粒：存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。分子本身有复制功能的遗传结构，能在宿主细胞内独立自主的进行复制，并在细胞分裂时恒定的传给子代细胞。质粒带有某些遗传信息，因此会赋予宿主细胞一些遗传性状。因质粒DNA有自我复制功能及携带遗传信息等特性，可作为重组DNA操作的载体。
Yac 载体酵母人工染色体，用于大片段的DNA克隆。
cosmid（柯斯质粒/粘粒）；为COS序列与质粒载体的结合产物，可以用作克隆大片段基因组DNA的一种载体。如pJB8.
COS序列：γ噬菌体为线状的双链DNA病毒，野生型的γ噬菌体基因组两端各有12个核苷酸的5’突出，碱基互补，是极有效的粘性末端，称为COS序列。
同源重组：发生在同源序列间的重组，又称基本重组。其发生依赖于两个分子之间序列的相同性或相似性。如果通过转化或转导获得的外源DNA与宿主DNA同源，那么此外源DNA就可以通过同源重组方式整合进宿主染色体。
转化：受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变的过程。
转染：指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。 转化子：被导入了载体的受体细胞。 重组子：导入了重组载体分子的受体细胞。
转座：在基因组内有些基因可以从一个位置移动到另一位置。这些可以移动的DNA序列包括插入序列和转座子。由插入序列和转座子介导的基因移位或重排现象即为转座。 感受态细胞：经低温CaCl2处理后，容易导入外源DNA分子的受体细胞。；
蓝白斑实验：肠杆菌的LacZ基因常被用作遗传标记，此基因编码的半乳糖苷酶能够分解X-gal，使其从无色变成蓝色。在含有X-gal的培养基中，在乳糖操纵子的诱导物IPTG的作用下，细菌合成半乳糖苷酶，分解X-gal，此菌落即为蓝色，若LacZ基因被外源DNA的片段插入而破坏，则不能制造半乳糖苷酶，菌落即为白斑。
? 问答题：
1.什么是基因克隆？简述基因克隆的基本过程。 为研究基因的结构和功能，从构建的基因组DNA文库或cDNA文库中分离扩增某一感兴趣的基因（目的基因）就是基因克隆或分子克隆，又称重组DNA技术。例：以质粒为载体进行DNA克隆的过程，包括：目的基因的获取，基因载体的选择与构建，目的基因与载体的拼接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选并无性繁殖含有重组分子的受体细胞。 2.什么是目的基因？其主要的来源或途径是什么？
应用重组DNA技术为分离、获得某一感兴趣的基因或DNA序列，或者为获得感兴趣基因的表达产物-蛋白质。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因，又称目的DNA。有两种类型的目的DNA，即cDNA和基因组DNA。 3.试述获得目的基因的方法。 ①限制性内切酶法； ②cDNA合成法；
③基因人工合成法；
④PCR法以特异的引物扩增目的基因。
4.什么是限制性核酸内切酶？大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点如何？
限制性核酸内切酶，为识别DNA的特异序列，并能在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。限制性核酸内切酶存在于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制-修饰体系，能够限制外源DNA，保护自身DNA，对细菌遗传性状的稳定遗传有着重要意义。分为三类，重组DNA技术中常用的限制性核酸内切酶为Ⅱ类酶。 大多数限制性核酸内切酶识别DNA位点的核苷酸序列呈回文结构。
5. 载体的种类和特性是什么？
①质粒：能自我复制，可含有抗性基因，β-半乳糖基因。
②γ噬菌体：线性双链，两端有粘性末端，裂解生长，可包装成颗粒释放出，与溶源生长有关的较大区域可以被外源DNA取代。