实验六 乳粉中还原糖含量的测定—直接滴定法
一、目的要求
1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点； 2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。 二、实验原理
将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀。稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。反应方程式如下：
CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4 COONa COONa ︱ ∣ CHOH CHO╲
∣ +Cu(OH)2= ∣ Cu +2H2O CHOH CHO╱ ∣ ∣ COOK COOK
COONa COONa
∣ CHO ∣ CHOH CHO╲ ∣ CHOH ∣
2∣ Cu +(CHOH)4 +2H2O=2 ∣ + (CHOH)4+Cu2O↓ CHO╱ ∣ CHOH ∣ ∣ CH2HO ∣ CH2OH COOK COOK 亚甲蓝氧化型+还原糖——→亚甲蓝还原型
(蓝色) （无色） 三、实验试剂
1、碱性酒石酸铜甲液：称取7.5g硫酸铜 ( CuSO4?5H2O) 及0.025g次甲基蓝，溶入水中并稀释至500mL。
2、碱性酒石酸铜乙液：称取25g酒石酸钾钠及37.5g氢氧化钠，溶于水中，再加入2g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至500mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
3、乙酸锌溶液：称取10.95g乙酸锌，加1.5mL冰乙酸，加水溶解并稀释至50mL。
4、亚铁氰化钾溶液：称取5.5g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至50mL。
1
5、乳糖标准溶液：称取约1.4g经过96℃±2℃干燥2h的乳糖，以水稀释至1000mL。此溶液每mL相当于1.4mg乳糖。
四、实验仪器
1、分析天平； 2、牛角匙；
3、50mL小烧杯； 4、250mL容量瓶；
5、100mL量筒，1个/2组； 6、250mL锥形瓶3只； 7、25mL酸式滴定管1支/组； 8、5mL移液管4支/2组；
9、10mL移液管1支/2组； 10、干燥滤纸3张，漏斗1个/组； 11、小玻璃棒1根/组； 12、玻璃珠：9颗/组 ； 13、可调电炉； 五、操作步骤 （一）试样处理
称取约1.2g左右的试样，置于250mL容量瓶中，用50mL水分次溶解样品并洗入250mL容量瓶中，摇匀后慢慢加入5mL乙酸锌溶液，混匀放置片刻，加入5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀、静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
（二）标定碱性酒石酸铜溶液
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠3粒，从滴定管滴加约9mL乳糖，控制在2min内加热至沸，趁沸以每2s1滴的速度继续滴加乳糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗乳糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份（先粗测一次），取其平均值，计算每10mL （甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于乳糖的质量或其他还原糖的质量 （mg）。
A = C?V
式中：A—10mL （甲、乙液各5mL） 碱性酒石酸铜溶液相当于乳糖的质量(mg)；
C—乳糖标准溶液的浓度，mg/ mL；
V—标定时消耗乳糖标准溶液的体积，mL。 （三）试样溶液预测
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠3粒，控制在2min内加热至沸，准确沸腾30s，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。当样液中还原糖浓度过高时应适当稀释，再进行正式测定，使每次滴定消耗样液的体积控制在与标定碱性酒石酸铜溶液时消耗的还原糖标准溶液的体积相近，约在10mL左右。
2
（四）试样溶液测定
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠3粒，从滴定管滴加比预测体积少1mL的试样溶液至锥形瓶中，使在2min内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。
六、数据记录与计算 （一）数据记录 1 2 3 平均值 标定时乳糖用量，mL 10mL碱性酒石酸铜相当于乳糖的量，mg 测定时消耗试样溶液的量，mL 称取试样质量，g （二）结果计算 试样中还原糖(以葡萄糖计)的含量为：
AX??100Vm??1000V0式中：
X—试样中还原糖(以乳糖计)含量，g/100g； A—10 mL碱性酒石酸铜溶液 (甲、乙液各5 mL) 相当于乳糖的质量，mg； m—试样质量，g；
V—测定时平均消耗试样溶液体积，mL； V0—试样液总体积，mL；
3