1 0.707 0.251 0.077 2 0.675 0.305 0.061
平均 0.691 0.278 0.069
2.2 酶活测定基本数据
表9 酶活测定表
试管
OD520
E1 E2 E3
1 0.518 0.099 0.059 2 0.565 0.152 0.043 平均 0.5415 0.1255 0.051
2.3 蔗糖酶分离提取效果计算结果
从表3中结果可看出，留样1、2、3中的蛋白质浓度和总蛋白含量逐渐减小，蔗糖酶活、总活力和比活力也逐渐降低，每一步的纯化倍数和产量也是逐渐降低的。
表10 蔗糖酶分离提取效果计算表
留 样
体积 /ml
蛋白质浓度mg/ml 1.734
总蛋白mg
活力u/ml
总活力 u 8.94×10 2.90×10 6.45×10
455
比活力u/mg 3.12×10 2.14×10 3.45×10
455
纯化倍数
产量 （回收率） 100
1 16.5 28.61 5420.25 1
2 19.5 0.696 13.57 1485.09 0.686 32.4
3 11 0.17 1.87 586.35 0.111 22.2
3.讨论
3.1 酵母蔗糖酶提取的其他方法与比较
酵母蔗糖酶的提取较常使用甲苯自溶法，除此还有冻融法和SDS
抽提法，但报道较少。而且，SDS抽提法和冻融法的酶活性远高于甲苯自溶法的。
3.2 讨论
? 本实验先采用自溶法得到蔗糖酶的粗品，再通过测定蔗糖酶活力、还原糖含量、蛋白质含量计算出蔗糖酶提取效果（比活、回收率、纯化倍数）。该实验只能进行粗测定，且本实验对于温度的控制要求比较高。该实验不仅需要花费大量的时间进行现象观察、数据处理，而且在试验中步骤繁琐，重复性实验步骤较多，因此加大了人为因素对实验结果的影响，步骤的繁琐也加大了操作过程中误差出现的频率。所以实验结果跟理论结果相比差异会比较大。 ? 在测定酶活的过程中，可能是由于本组提取的蔗糖粗酶液的浓度过高，导致对照管中滴加0.5ml 1mol/l的NAOH不足以使反应中止，是的酶液与蔗糖反应，测得OD值较小。我们采取改进措施：在留样1的酶活测定中，加了1ml 1mol/l的NAOH,同时扩大反应液的稀释倍数，酶活力单位计算公式调整为：G毫克数×10×15/2；留样2、3测定中，将酶液稀释了200倍，其余步骤不变，酶活力单位计算公式调整为：G毫克数×9×20/2。
? 在测定样品的OD值时，电子读数不稳定，可能是样品溶液中各个部分不均匀。所以在用实验操作过程中，提取酵母蔗糖酶时一定要搅拌均匀。 4. 建议和改善
4.1 自溶法过程中，需加少量防腐剂，以防外界细菌污染。自溶法的缺点是时间较长。可采用其他方法进行。酶的分离纯化有许多种方法，离心、过滤、膜分离、演习沉淀、等电点沉淀、选择性变性沉淀、离
子交换层析、凝胶层析、亲和层析、凝胶电泳、有机溶剂萃取、浓缩、结晶等，在酶的分离纯化过程中，应该充分考虑避免酶的变性失活。一般情况下，所有分离纯化操作都应在低温条件下进行，而且要防止过酸、过碱、重金属离子、变性剂、剧烈搅拌等因素对酶活性的影响。近年来，高效液相层析（ HPLC ）和电泳技术越来越发达。 4.2 测量时，应将剩余的酶液保存于适合温度下的冰箱中，以防止酶液的变性或失活。因此，可增加对实验的设计，考察不同温度梯度下，酶液活力的变化，并寻找在其他适合条件下，酶活力最大时的最适温度，并寻找适合保存酶的温度。
4.3 由于透析时间过长，则可采用超过滤的方法进行，利用压力或离心力，强行使水和其他小分子溶质通过半透膜，而蛋白质被截留在膜上以达到浓缩和脱盐的目的，减少时间。同时，用 HAC 调 PH 至 4.5 时，利用的是蔗糖酶的 最适 PH 为 4.0~4.5 。因此，可增加实验，即在其他适合的条件下，通过不同 PH 梯度下的酶活力的大小，测出蔗糖酶的 最适 PH 值，加强实验的说服力和学生的实验操作能力。