四螨嗪·联苯肼酯30%悬浮剂高效液相色谱分析
李静，张晓婉，段元红，姜士聚
（山东省农药检定所，山东 济南 250100）
Analysis of Clofentezine and Bifenazate 30% SC by HPLC
Li Jing，Zhang Xiaowan，Duan Yuanhong，Jiang Shiju(Institute for the Control of Agrichemicals of Shandong Province，Shandong Jinan 250100，China)
Abstract：A method for separation and quantitative analysis of Clofentezine and Bifenazate by HPLC，with methanol-water（80:20 V/V） as mobile phase，Hypersil C18 250×4.6 (i.d)mm 10μm column，diode array detector（DAD）at 270nm wavelength was described. The result showed that the liner correlation coefficients were 0.9999 and 0.9998，the standard deviations were 0.01 and 0.02，the variation coeffi-
cients were 0.08% and 0.15% and the average recoveries were 99.8% and 99.8%. Key words：clofentezine；bifenazate；HPLC；analysis
摘 要：本文采用高效液相色谱法，以甲醇+水=80+20（V+V）为流动相，使用Hypersil C18
250×4.6(i.d)mm 10μm为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器，在270nm波长下对四螨嗪·联苯肼酯30%悬浮剂进行分离和定量分析。结果表明分析方法的线性相关系数分别为0.9999、0.9998；标准偏差分别为0.01、0.02；变异系数分别为0.08%、0.15%；平均回收率分别为99.8%、99.8%。
关键词：四螨嗪；联苯肼酯；高效液相色谱；分析 1 前言
四螨嗪是一种新型高效杀螨剂,对叶螨的卵和幼、若螨触杀效果好,不能触杀成螨,但成螨触药后产卵量减少,卵的孵化也受到抑制；联苯肼酯是一种新型选择性叶面用喷雾药剂，其对螨的各个生活阶段有效,且持效期长。二者均为农业部2014年版《种植业生产使用低毒低残留农药主要品种名录》中推广使用的产品，发展前景较好，目前已有不少企业有两种成分混剂的登记，但都是分别进行测定有效成分含量。为了提高检测速度，拓宽分析方法，我们经过严格地分析条件筛选，采用高效液相色谱法对四螨嗪与联苯肼酯混剂同时进行分离测定，方法简便易行，适于生产质量控制。 2 试验部分
2.1试剂和溶液 甲醇：HPLC级；水：新蒸二次蒸馏水；四螨嗪标准品：已知质量分数≥98.0%； 联苯肼酯标准品：已知质量分数≥98.0%；30%四螨嗪?联苯肼酯悬浮剂（由某企业提供）。 2.2仪器 高效液相色谱仪：岛津20AT，具二极管阵列检测器；色谱工作站；微量进样器：
100μL；色谱柱：250mm×4.6mm（i.d.）不锈钢柱，内装Hypersil C18、10μm填充物。 2.3高效液相色谱操作条件 流动相：甲醇+水=80+20（V+V），经滤膜过滤，并进行脱气；流量：1.0mL/min；柱温：35℃；检测波长：270nm；进样量：5μL；保留时间：联苯肼酯4.0min,四螨嗪5.6 min；以上操作参数是典型的，可根据不同仪器特点对给定操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。 2.4测定步骤
2.4.1标样溶液的制备 分别称取四螨嗪、联苯肼酯标准品0.02g(精确至0.0002g)，置于同一50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超声振荡10min冷却至室温后，再用甲醇定容至刻度，摇匀，备用。
2.4.2试样溶液的制备 称取试样0.13g（精确至0.0002g），置于50mL容量瓶中，先加入少量水溶解，再加入甲醇稀释，超声振荡10min冷却至室温后，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，备用。
2.4.3测定 在上述条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针响应值的重复性，待相邻两针的相对响应值变化＜1.5%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
联苯肼酯四螨嗪mAU1000270nm,4nm (1.00)7505002500
0.02.55.07.5min
图 1 四螨嗪和联苯肼酯混剂液相色谱图
2.4.4 计算 将测得的2针试样溶液及试样前后2针标样溶液中的四螨嗪和联苯肼酯峰面积，按下式计算。
X=
A2?m1?pA1?m2
式中： A1—标样溶液中四螨嗪（联苯肼酯）的峰面积； A2—试样溶液中四螨嗪（联苯肼酯）的峰面积；
m1—标样的质量，g； m2—试样的质量，g；
P—标样中四螨嗪（联苯肼酯）的质量分数，%。 3 结果与讨论 3.1色谱条件的选择
3.1.1检测波长的选择 利用二极管阵列检测器对四螨嗪和联苯肼酯分别进行扫描的光谱图（图2），从图中可以看出四螨嗪在194nm,联苯肼酯在200nm处有最大吸收，考虑到分离好、且避免溶剂及杂质干扰和峰面积、峰高的比例，故选用270nm作为检测波长。
图 2 四螨嗪和联苯肼酯混剂光谱图
3.1.2色谱柱和流动相的选择 分离柱采用常用的C18柱，从分离时间和效果考虑，选定250mm×4.6mm(id) C18不锈钢柱。分别选用甲醇和水配成不同的流动相，反复筛选进样，得到不同的分离效果图。经过多种分离情况对比，选定流动相为甲醇+水＝80+20(V+V),流速为1.0mL/min时，有效成分与杂质能够互不干扰分离，峰形对称，基线平稳，保留时间适宜。 3.2方法的线性相关性 分别移取2.4.1中1、3、5、7 、9ｍL标样母液于10ｍL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，各自配成5个不同浓度的标准溶液，在选定的操作条件下进样，分别得出5个相应的峰面积。当四螨嗪标准溶液的浓度分别是0.05、0.14、0.23、0.32、0.41 (mg/mL)时，峰面积分别为1165396、3411452、5591058、7835492、9941430；当联苯肼酯标准溶液的浓度分别是0.06、0.17、0.29、0.40、0.51 (mg/mL)时，峰面积分别为621036、1813205、3018677、4204158、5289525。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图3)，得出四螨嗪线性回归方程为y = 2.4E+7x -27151,线性相关系数为0.9999，联苯肼酯线性回归方程为y = 1.0E+7x +21127,线性相关系数为0.9998。
图 3 四螨嗪与联苯肼酯线性关系图
3.3 方法的精密度测定 按上述处理方法，同样的仪器条件，取同一样品，进行5次平行测定，计算标准偏差和变异系数。结果统计四螨嗪和联苯肼酯的标准偏差分变为0.01、0.02，变异系数分别为0.08%、0.15%（表1）.表明该分析方法精密度良好。
表1四螨嗪?联苯肼酯30%悬浮剂精密度测定结果表
编号 四螨嗪（%） 联苯肼酯（%）
1 15.13 15.02
2 15.15 15.05
3 15.13 15.01
4 15.12 15.00
5 15.14 14.99
平均值
标准偏差
(%)
(%) 变异系数
15.13 15.01
0.01 0.02
0.08 0.15
3.4方法的准确度 称取已知含量的四螨嗪?联苯肼酯30%悬浮剂样品和已知量标准品配成5个已知样品，按分析条件和操作方法进行定量回收率测定。测得四螨嗪和联苯肼酯的平均回收率分别为99.8%和99.8%（表2）。
表2 回收率测定数据表
组分
序号
样品中有效成分质量（mg）
加入标准品质量（mg）
理论质量（mg）
实测质量（mg）
回收率（%）
平均回收率（%）
1 2
四螨嗪（15.13%）
3 4 5
联苯肼酯（15.01%）
1 2 3 4 5
15.15 19.91 25.37 23.54 21.78 15.03 19.75 25.17 23.34 21.61
10.05 14.86 20.02 25.20 29.91 10.12 14.93 20.54 24.85 30.47
25.20 34.77 45.39 48.74 51.69 25.15 34.68 45.71 48.19 52.08
25.11 34.79 45.32 48.67 51.56 25.11 34.55 45.66 48.08 51.97
99.64 100.06 99.85 99.86 99.75 99.84 99.63 99.89 99.77 99.79
99.8 99.8
4 结论
试验结果表明，本方法可同时测定四螨嗪和联苯肼酯两种组分，精密度高，准确度好，线性关系良好，具有操作简便、快速、准确及分离效果好的优点，是一种可行的分析方法。
参考文献
[1]俞幼芬。四螨嗪的高效液相色谱测定[J].农药，1995，34(9)15-16.
[2]曹巍，陈高部，关云飞等.联苯肼酯的高效液相色谱测定[J].农药，2011，50(6)424-425.