实验五 异烟肼的溴酸钾法含量测定
一、目的要求
1. 掌握溴酸钾法测定异烟肼含量的方法。 2. 掌握氧化还原滴定法的原理。 二、主要仪器与试剂
25mL滴定管，100mL容量瓶，25mL移液管，研钵，5cm×20cm硅胶G薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备），层析缸， 1. 异烟肼片（规格100mg） 2. 溴酸钾固体
3. 硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L) 4. 丙醇 5. 丙酮 6. 盐酸
7. 乙醇制对二氨基苯甲醛试液（参见附录） 8. 甲基橙指示液（参见附录） 9. 碘化钾固体 10. 稀硫酸 11. 淀粉指示液
12. 浊度标准贮备液（参见实验一附录15） 13. 浊度标准原液（参见实验一附录15）
14. 1号浊度标准液（参见实验一附录15，学生临用时制备） 15. 比色用重铬酸钾液（参见实验一附录3） 16. 比色用硫酸铜液（参见实验一附录4） 三、实验方法、步骤 异烟肼（Isoniazid ）
（C6H7N3O， FW＝137.14）
本品为4-吡啶甲酰肼。按干燥品计算，含C6H7N3O应为标示量的95.0%~105.0%。 1． 性状 本品为无色结晶，或白色至类白色的结晶性粉末；无臭，味微甜后苦；遇光渐变质。
2. 检查 溶液的澄清度与颜色 取本品1.0g，加水10mL溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（中国药典2005版二部附录Ⅸ B，参见实验一附录15）比较，不得更浓；如显色，与同体积的对照液（取比色用重铬酸钾液3.0mL与比色用硫酸铜液0.10mL，加水稀释至250mL）比较，不得更深。
游离肼 取本品，加水制成每1mL中含50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每1mL中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版二部附录Ⅴ B）试验，吸取供试品溶液10μL与对照溶液2μL，分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇－丙酮（3：2）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15分钟后检视。在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。
干燥失重 取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过0.5%（中国药典2005年版二部附录Ⅷ L，参见实验一附录23）。 3. 含量测定
原理：
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于异烟肼0.2g），置100mL量瓶中，加水适量，振摇使异烟肼溶解并稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液
25mL，加水50mL、盐酸20mL与甲基橙指示液1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）缓缓滴定（温度保持在18～25℃）至粉红色消失。每1mL溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。 四、注意事项
1. 指示剂褪色是不可逆的，滴定过程中必须充分振摇，以避免滴定剂局部过浓而引起指示剂提前褪色，可补加1滴指示剂以验证终点是否真正到达。 2. 过滤前必须充分振摇，使异烟肼完全溶解。 3. 过滤用漏斗、烧杯必须干燥，弃去初滤液。 五、思考题
1.写出异烟肼与溴酸钾的滴定反应式和滴定度的计算过程。 2.当游离肼不合格时，对测定有何影响？
实验三附录 1. 中国药典2005年版二部附录Ⅴ B 薄层色谱法
薄层色谱法，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 1.仪器与材料
(1) 玻板 除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格,要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。
(2) 固定相或载体 最常用的有硅胶G、硅胶GF254 、硅胶H、 硅胶HF254,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、 微晶纤维素F254等。 其颗粒大小,一般要求直径为10～40μm。薄层涂布，一般可分无黏合剂和含黏合剂两种，前者系将固定相直接涂布于玻板上, 后者系在固定相中加入一定量的黏合剂，一般常用10％～15％煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃加热4小时)，混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.5％～0.7％)适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。也有含一定固定相或缓冲液的薄层。
(3) 涂布器 应能使固定相或载体在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 (4) 点样器 同纸色谱法项下。
(5) 展开室 应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另
有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。 2. 操作方法
(1) 薄层板制备 除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合, 去除表面的气泡后，倒入涂布器中,在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
(2) 点样 除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。
(3) 展开 展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。
将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中）,密封缸盖,待展开至规定距离(一般为10～15cm), 取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。
(4) 如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。
薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。
2. 乙醇制对二氨基苯甲醛试液 取对二甲氨基苯甲醛1g，加乙醇9.0mL与盐酸2.3mL使溶解，再加乙醇至100mL，即得。
甲基橙指示液 取甲基橙0.1g，加水100mL使溶解，即得。变色范围 pH3.2～4.4（红→黄）。
3. 溴酸钾滴定液 (0.01667mol/L)
KBrO3=167.00 2.784g→1000mL 【配制】 取溴酸钾2.8g，加水适量使溶解成1000mL，摇匀。
【标定】 精密量取本液25mL，置碘瓶中， 加碘化钾2.0g与稀硫酸5mL，密塞，摇匀，
在暗处放置5分钟后，加水100mL稀释，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定至近终点时，加淀粉指示液2mL，继续滴定至蓝色消失。根据硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)的消耗量，算出本液的浓度，即得。室温在25℃以上时，应将反应液及稀释用水降温至约20℃。
4. 稀硫酸 取硫酸57mL，加水稀释至1000mL，即得。本液含H2SO4应为9.5-10.5％。 5. 淀粉指示液 取可溶性淀粉0.5g，加水5mL搅匀后，缓缓倾入100mL沸水中，随加随搅拌，继续煮沸2分钟，放冷，倾取上层清液，即得。本液应临用新制。