4、 体积排阻色谱
高效液相色谱仪的结构：
高压泵系统：1、往复柱塞泵；2其他类型的泵；3、流速控制系统和程序系统
进样系统：1、采用硅胶或亚硝酸氟橡胶作隔垫片的注射器进样口，用高效液相色谱专用注射器取一定的体积试样穿过垫片注入色谱柱头；2、高压六通阀进样；3、自动进样系统 高效液相色谱柱：
1、色谱柱类型：常规分析柱、制备或半制备柱、小内径或微内径柱、毛细管柱
2、保护柱 3、柱恒温器 4、柱填充技术 液相色谱检测器
1、光吸收检测器：紫外吸收检测器、光二极管阵列检测器、红外吸收检测器 2、荧光检测器
3、示差折光检测器
4、蒸发光散射检测器
5、电化学检测器：安培检测器、电导检测器
高效液相色谱固定相：具有高机械强度、化学稳定、耐溶剂、一定比表面积和中孔，且孔径分布范围窄的微孔结构材料
液相色谱流动相：1、化学惰性，保证柱的稳定性和分离的重现性；2、适用低沸点、低粘度的组分；3、清洗和更换方便
液固吸附色谱的固定相：分为极性和非极性多孔微粒固体吸附剂
液液分配色谱的固定相：将极性或非极性固定液涂渍在全多孔或薄壳硅胶等载体表面形成的液膜。
要求：载体表面惰性，比表面不太高 液液分配色谱的特点：柱容量高、重现性好、适用试样类型广
非极性键合相反相色谱分离条件优化：固定相的选择、流动相的选择、流动相pH以及衍生化技术
离子对色谱：分离分析离子性溶质的色谱方法
手性色谱：直接分离手性化合物对映体具有速度快、柱效高、操作简单、适用范围广的优点。
手性色谱流动相：手性固定相/非手性固定相和非手性固定相/含手性选择剂流动相。 常用的CSP类型：给体—受体手性固定相、多糖类手性固定相、环糊精手性键合固定相、蛋白质手性固定相以及其他应用不多的CSP类型
亲和色谱：以生物活体配体通过间隔臂键合到多孔微粒固体基质为固定相，不同pH的缓冲液为流动相，依据生物分子与固定相配体间的特异、可逆的相互亲和作用力差异，即形成可解离的配位复合物，亦称锁-键结构复合物或络合物，以是实现生物活性分子分离和分析
亲和色谱固定相的组成：基质、间隔臂、配体
离子交换色谱：通过固定相表面的带电荷的基团与试样离子和流动相淋洗离子进行可逆交换、离子-偶极作用或吸附作用实现溶质分离。
离子交换色谱固定相：苯乙烯和二乙烯苯交联聚合物交换树脂、表面薄壳型无机-有机复合型交换剂、硅胶化学键合离子交换剂
体积排阻色谱的应用：分离测定合成和天然高分子产物
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制备高效液相色谱的指标：1、最大允许分离试样体积或量；2、单位时间分离纯物质的量，即产率；3、淋洗溶剂的量或者试样在分离过程中的稀释度
制备色谱产率的主要因素：1、产率随柱长、柱内径、柱效升高而增加，但不成线性关系；2、一般选用制备柱内径较大，较大粒径填料以降低分离成本；3、制备分离的目标组分要有比较高的分离选择性α，可以允许较大的进样量；4、制备色谱经常在柱超负荷条件下操作，应选择与流动相相互溶的溶剂制备试样溶液；5、以硅胶为填料的正相色谱通常是制备分离的首选方法，具有成本较低的特点，但对于各种特殊分离，需要采用手性、弱疏水性填料
毛细管电泳
毛细管电泳的特点：操作简单、试样量少、分析速度快、柱效高、成本低。 缺点：迁移时间的重现性、进样的准确性和检测的灵敏度方面较高效液相色谱法差。 毛细管电色谱是毛细管电泳技术和液相色谱结合形成的严重高效、快速的微分离分析技术。其克服了毛细管电泳对电中性物质难分离的缺点，并利用液相色谱固定相和流动相选择类型多的优点，其适用范围比CE大为扩展。
电泳：在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下，以不同的速度或移动速率向其所向带电荷相反方向迁移的现象。
电渗：毛细管中整体溶剂或介质在轴向直流电场作用下发生的定向迁移或流动
影响电渗流的因素：电场强度、黏度、介电常数和Zeta电势等直接因素，及温度、缓冲液的组成和pH、管壁的性质等间接因素
柱效N=5.54（tR/2Δ单位塔板高H=Ld/N
1/2
）2 (tR为保留时间、2Δ
1/2
为半峰高宽度)
CE分离的柱效N=Ld/H=（μep+μeo）VLd/（2DLt） H=A+B/μ+Cu R=2（tR1+tR2）/（W1+W2） （tR为迁移时间、W为色谱峰底宽度） 检测系统：紫外、荧光、化学发光、电化学和质谱检测器
电化学检测器与光学检测方法相比，质量检出限低，线性范围宽，选择性好，而且响应不依赖与光路的长度，可以用于极细的毛细管
缓冲溶液的选择应遵循：1、在所选择的pH范围内有合适的缓冲量；2、本底检测响应低；3、自身淌度低，即离子大而带电小
添加剂的种类：1、中性盐；2、表面活性剂；3、手性添加剂；4、非电解质高分子添加剂
毛细管区带电泳的应用：适合分离带电化合物，包括无机离子、无机阳离子、有机酸、胺类化合物、氨基酸、蛋白质等，不能分离中性化合物。
胶束电动毛细管色谱：以胶束为固定相的一种电动色谱，是电泳技术和色谱技术的巧妙结合
毛细管凝胶电泳：在毛细管中充填多孔凝胶为支持介质进行电泳 毛细管等电聚焦过程：进样、聚焦、迁移
毛细管等速电泳：不连续介质电泳技术，采用两个不同的缓冲溶液系统，被分离的组分按其淌度的不同夹在中间，以同一个速率移动，实现分离
毛细管电色谱柱技术：填充柱（柱塞制作、填充柱准备、CEC充填固定相、气泡问题）、开管柱、整体柱；
柱塞制作要求：有足够的机械强度、化学惰性、有合适的空隙率、死体积小（应用较多的是水玻璃烧制法和填料直接烧制法）
毛细管填充柱的制作方法：高压匀浆填充法和电动填充法
气泡问题的解决：加压、制备渗透性好的塞子、利用阻尼管消除、利用超声波使试样
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和流动相充分脱气
CEC的应用：在环境、生物医学、食品、石油化工产品的分析等
其他分离方法
分析试样预处理目的：
1、除去试样基底中可能会干扰后续分析的物质；使试样充分溶解并符合后续分析方法的要求：
2、实现痕量分析物的高效富集，还可完成生化衍生等步骤以增加分离分析的选择性和检测灵敏度等
超临界流体色谱仪：高压泵、进样系统、色谱柱、限流器、检测器
超临界流体萃取特点：1、萃取速度快；2、容易控制溶剂强度并调节选择性；3、后处理简单；4；操作自动化；5、安全性好
萃取操作：静态萃取，动态萃取
影响萃取的因素：1、超临界流体的选择；2、萃取条件的选择；3、试样及流体流速；4、萃取物的收集
SFE的应用：
1、作为分析化学式样的预处理技术，即分离测定组分的钱分离富集； 2、工业规模分离，即分离工程的组成部分 固相微萃取操作技术：浸取法和顶空法
SPME的应用：环境、生物、医药学、天然产物、食品、毒物、法学领域
逆流色谱特点：无固相载体；适用范围广；适用分离试样容量范围宽；可与质谱、红外光谱等结构分析仪器联用，实现定性、定量分析；仪器柱结构系统复杂，操作技术复杂等 场流分离的特点：
1、适用于大分子分离测定，无固定相以消除吸附、剪切、过滤、失活、变性等缺点，试样回收率高；
2、可采用载流溶剂和外加力场众多，适用范围广，从合成到生物大分子和粒子性试样，； 3、具有较高分辨率和选择性，操作条件易于控制、调节和优化；
4、有比较严谨的理论基础，其保留行为可通过流体力学原理和物理化学性质预测和计算，因而可以根据保留值测定溶质的相对分子量、体积、密度、电荷、扩散系数等物理化学参数，不需要校准
多维色谱的组合方式：
1、同类色谱、不同选择性色谱柱串联； 2、不同类型色谱分离串联
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