深圳中仁泌尿外科医院检验科 ABO血型鉴定操作规程 文件编号：ZR-XK-01 版本/修订号：A/0 生效日期：20130815 第1页 共4 页 ABO血型鉴定操作规程
1 目的
为了规范ABO血型鉴定操作，特制订本规程。 2 范围
对献血者、患者进行ABO正反定型。 3 职责
试验上岗工作人员应严格执行本操作规程。 4 要求
4.1 试验前准备及要求
4.1.1 试剂准备及要求
4.1.1.1 血清：抗A、抗B分型血清，核对试剂批号、失效期。
4.1.1.2 细胞：A、B、O型试剂红细胞，观察细胞质量，核对试剂批号、失
效期。
4.1.1.3 生理盐水0.9%无菌生理盐水。 4.1.2 试验用品准备及要求
4.1.2.1 滴管：一次性使用、洁净、无污染。 4.1.2.2 试管：10mm×100mm 4.1.2.3 离心机：L600A型离心机
4.1.2.4 光学显微镜：CX21FS1型OLYMPUS光学显微镜。 4.1.3 待检标本的准备及要求
4.1.3.1 待检标本应同时备两管血样，一管用EDTA抗凝，另一管不抗凝。 4.1.3.2 血清：待检的不抗凝标本应退缩充分，用离心机离心并分离相互血
清。
4.1.3.3 从待检的抗凝标本中吸出少量红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤三
深圳中仁泌尿外科医院检验科 ABO血型鉴定操作规程 文件编号：ZR-XK-01 版本/修订号：A/0 生效日期：20130815 第2页 共4 页 遍，配制成约3%红细胞盐水悬液。
4.2 原理
根据红细胞表面上有无A或B抗原而将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正（血清试验）反（细胞试验）定型准确来鉴定ABO血型。所谓正定型是用已知抗A或抗B血清试剂来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；。所谓反定型是用已知A1细胞或B型细胞来测定血清中上有无相应的抗A或抗B抗体。
4.3 操作
4.3.1 取洁净小试管2支（内径10mm×100mm），分别标明抗A，抗B，用滴管分别加抗A、抗B血型试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3%RBC悬液1滴，混合。
4.3.2 另取洁净小试管三支（内径10mm×100mm）3支，分别标明A，B或O型细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴（或100微升）于试管底部，再分别以滴管加入A1、B、O型3%RBC悬液1滴，混匀。
4.3.3离心3000rpm,15s。
4.3.4先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，使管底的红细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集，如轻微凝集或不见凝集，则将反应物倒于玻片上，用低倍镜观察。
4.3.5观察结果时，既要看有没有凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B、cisAB的发现。
4.3.6 结果判断 （1）凝集判断标准
完全凝集：上层液体清亮，无色，底部有红细胞凝块，管底细胞呈花边状，轻弹试管凝块不散开。
无凝集：上层液体清亮、无色，血细胞均匀地沉到管底，边缘整齐，用手指轻弹试
深圳中仁泌尿外科医院检验科 ABO血型鉴定操作规程 文件编号：ZR-XK-01 版本/修订号：A/0 生效日期：20130815 第3页 共4 页 管，红细胞立即上升，随即成为均匀的悬液。
（2） 凝集强度判断标准
4+ 红细胞凝集成一个结实的凝集块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成几个大的凝块，血清尚清晰。
2+ 红细胞凝集成中等大的凝块，背景清晰，周围可见到游离红细胞。 1+ 肉眼可见凝集块，背景混浊，周围有较多游离红细胞。 ± 微小凝集，背景混浊。
mf 即混合凝集外观，指红细胞凝集大块与游离红细胞共存。 0 阴性，无凝集或溶血，镜下红细胞均匀分布。 PH 表示完全溶血，无残留细胞。 4.4 结果判定原则
ABO血型正反定型结果
分型血清+受检者红细胞 受检者血清+试剂红细胞
受检者血型
抗AB 抗AB 抗AB O细胞 A细胞 B细胞 ＋ ＋ O A O O ＋ ＋ O ＋ B O ＋ O O O O O O ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ AB O O O
5 注意事项
5.1 正反定型不一致的原因，有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见者有以下数种：
5.1.1 分型血清效价太低亲和力不强。
深圳中仁泌尿外科医院检验科 ABO血型鉴定操作规程 文件编号：ZR-XK-01 版本/修订号：A/0 生效日期：20130815 第4页 共4 页 5.1.2 红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显误判为阴性反应。
5.1.3 受检者红细胞上抗原点过少（如亚型）或抗原性减弱（检于白血病或恶性肿瘤）以及类B或cisAB等。
5.1.4 受检者血清蛋白紊乱（高球蛋白血症）或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。
5.1.5 受检者血清中缺乏应有的抗A或抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。 5.1.6 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。
5.1.7 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。 5.1.8 血清中有意外抗体，如自身抗I，常干扰定型。 5.1.8 老年人血清中抗体水平大幅度下降。
5.2 如发现ABO正反定型不一致时，首先要重复做一次。严格执行操作规程，使用质量合格的试剂及细心观察和解释试验结果，就可以解决问题。对一些疑难问题必须进一步研究。
6 支持文献
6.1 中华人民共和国卫生部医政司《全国临床检验操作规程》2006年11月第3版
6.2 抗A、抗B单克隆血型试剂说明书。