[Lys±]＝1.12[Lys＋]＝1.12×46.45＝52
由此可见，在pH9.0时，〔Lys〕含量甚微，可以忽略不计，〔Lys〕占46.45％，〔Lys
＋－－
〕为52％，〔Lys〕为1.53％，整个分子带部分正电荷。 20解答：氨基酸从离子交换柱上被洗脱下来的速度主要受两种因素的影响：①带负电荷的树脂磺酸基和氨基酸带正电荷的功能基团之间的离子吸附，吸附力大的在树脂上停滞的时间长，从柱上洗脱下来的速度慢；②氨基酸的侧链基团与树脂强非极性的骨架之间的疏水相互作用。非极性大的侧链R基氨基酸与树脂骨架间的疏水作用力强，从树脂柱上洗脱下来的速度慢。
根据氨基酸可电离基团的pK’a值，我们可以确定题中每组氨基酸的结构以及在pH7时它们的平均净电荷。如果平均净电荷相同，则取决于它们侧链基团的疏水性。
①天冬氨酸净电荷为–l，赖氨酸净电荷为+1；赖氨酸与树脂磺酸基相反离子吸附力大。因此，天冬氨酸先被洗脱下来。
②精氨酸净电荷为+1，甲硫氨酸净电荷接近零。因此，甲硫氨酸先被洗脱下来。 ③谷氨酸净电荷为–1，缬氨酸净电荷接近零，谷氨酸的负电荷与树脂荷负电的磺酸基之间相互排斥，减小了谷氨酸与树脂的附着力，故先被洗脱下来。
④甘氨酸和亮氨酸的净电荷都接近零，但亮氨酸庞大的非极性侧链与树脂骨架之间的非极性相互作用力大。故甘氨酸先被洗脱下来。
⑤丝氨酸和丙氨酸的净电荷都接近零，但丝氨酸的侧链非极性小，故先被洗脱下来。 21解答：五肽的第一个残基是五个残基中的一个，第二个残基是余下四个残基中的一个，余此类推。因此，可能形成的五肽数目是：5×4×3×2×1＝120
22解答：在游离的氨基酸中，邻近的电荷影响每个基团的pK’a值。带正电荷的–NH3+的存
－
在，使带负电荷的–COO稳定，使羧基成为一种更强的酸．相反地，带负电荷的羧酸使–NH3+稳定，使它成为一种更弱的酸，因而使它的pK’a升高．当肽形成时，游离的α-氨基和α-羧基分开的距离增大，相互影响降低，从而使它们的pK’a值发生变化．
＋＋
＋
23解答：蛋白质的分子形状影响它在凝胶过滤时的行为。分子形状较长的蛋白质在凝胶过滤时具有类似于分子较大的蛋白的行为。用SDS-PAGE测定的蛋白质分子量应该是比较准确的，因为变形后的蛋白质的迁移速度只取决于它的分子大小。
24解答：用凝胶过滤(即分子排阻层析)法先除去分子量为100,000、pI为5.4的蛋白质，余留下来的低分子量的含酶的混合物再用离子交换层析法分离，于是就能获得所需要的纯酶。 25解答：该蛋白质具有2个亚基，每个亚基由2个大小不同的肽链通过二硫键连接而成。 25解答：普通聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质时主要是根据各组分的pI的差别。图1-8(A)的结果只呈现单一的带，表明该蛋白质是纯净的。
由于SDS是一种带负电荷的阴离子去垢剂，并且具有长长的疏水性碳氢链。它的这种性质不仅使寡聚蛋白质的亚基拆离，而且还能拆开肽链的折叠结构，并且沿伸展的肽链吸附在上面。这样，吸附在肽链上的带负电荷的SDS分子使肽链带净负电荷，并且吸附的SDS的量与肽链的大小成正比。结果是，不同大小的肽链将含有相同或几乎相同的Q／r值。由于聚丙烯酰胺凝胶基质具有筛分效应，所以，分子较小的肽链将比较大的、但具有相同的Q／r值的肽链迁移得更快。若蛋白质是由单一肽链或共价交联的几条肽链构成，那么在用SDS处理后进行SDS-PAGE，其结果仍是单一的一条带。若蛋白质是由几条肽链非共价结合在一起，在用SDS处理后进行SDS-PAGE，则可能出现两种情况：一种仍是一条带，但其位置发生了变化(迁移得更快)，表明该蛋白质是由几条相同的肽链构成，另一种可能出现几条带，则可以认为该蛋白质是由大小不同的几条肽链构成．
图1-8(B)的结果表明该蛋白质是由两种大小不同的肽链借非共价键结合在一起的寡聚体蛋白质。从图1–8的电泳结果我们可以断定该蛋白质的等电点低于pH8.2。
七、 第三章：酶化学
一、填充题
1 全酶是由（ ）和（ ）组成，在催化反应时，二者所起的作用不同，其中（ ）决定酶的专一性和高效率，（ ）起传递电子、原子或化学基团的作用。
2 酶活性中心往往处于酶分子表面的（ ）中，形成（ ）区，从而使酶与底物之间的作用加强。
3 T.R.Cech和S.Altman因各自发现了（ ）而共同获得1989年的诺贝尔化学奖。 4 金属离子对酶的激活作用有两种，一是作为（ ），二是作为（ ）。
5 乳酸脱氢酶有（ ）种（ ）个亚基组成。体内有（ ）种乳酸脱氢酶的同工酶，在临床诊断上有应用价值。
6 胰蛋白酶的专一性就是在（ ）残基右侧的肽键上水解；羧肽酶B专一性地从蛋白质的羧羰切下（ ）氨基酸。
7同一种酶有n个底物，就有（ ）个Km值，其中Km值最（ ）的底物，便为该酶的最适底物。
8 测定酶活力时，底物浓度应（ ），反应温度应选在（ ），反应pH选在（ ），反应时间应在反应的（ ）期进行。 9 表示酶量的多少常用（ ）表示。
10 按Michaelis公式，当V分别为0.9Vmax和0.1Vmax时，它们相应的底物浓度的比值[S]0.9/[S] 0.1应为（ ）。
11脲酶只作用于尿素，而不作用于其他任何底物，因此它具有（ ）专一性；甘油激酶可以催化甘油磷酸化，仅生成甘油-1-磷酸一种产物，因此它具有（ ）专一性。 12 双倒数作图法（Lineweaver与Burk作图），横轴截距为（ ），纵轴截距为（ ）。
13 某纯化的寡聚酶随着酶浓度降低，其配基与酶结合作用明显地增强，则最大可能是由于（ ）所造成的。
14 按照催化机制，溶菌酶、RNA酶、羧肽酶A、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶的过渡态或活性基团分别是（ ）。 15 一个有效的自杀性抑制剂必须具有（ ）、（ ）和（ ）。
16 多酶复合物体系总的反应速度取决于其中（ ）反应，一般来说大部分具有自我调节能力的多酶体系的（ ）就是限制速度的步骤。 17 酶原激活的本质是（ ）的形成和暴露的过程。
18 调节酶包括（ ）和（ ）等。解释别构酶作用机理有（ ）模型和（ ）模型两种。
19糖原磷酸化酶的活性形式及非活性形式间的平衡是（ ）磷酸化和去磷酸化，从而控制调节磷酸化酶的活性。
20蛋白磷酸化是可逆的，蛋白质磷酸化时，需要（ ）酶，而蛋白质去磷酸化是需要（ ）。
21酶蛋白可被共价修饰，如酶原激活与磷酸化，此外还有（ ）、（ ）、（ ）、（ ）等。
22以丝氨酸为活性中心的蛋白水解酶，其活性中心含有（ ），（ ）和丝氨酸组成的电荷中继网。
23谷氨酰胺合成酶的活性可被（ ）和（ ）共价修饰调节，这是存在于细菌中一种共价修饰调节酶活性的方式之一。
24判断一个纯化酶的方法优劣主要依据是酶的（ ）和（ ）。
25固定化酶的理化性质会发生变化，如Km（ ），Vmax（ ）等。
二、是非题
1 与非酶反应相比，酶反应能使更多的底物变成为产物。（ ） 2 酶影响它怕催化反应的平衡的到达时间。（ ）
3 辅基与辅酶的区别只在于它们与蛋白质结合的牢固程度不同，并无严格的界限。（ ） 4 氧化酶都含有细胞色素。（ ）
5 酶反应最适pH只取决于酶蛋白本身结构。（ ）
6 在极低底物浓度时，酶促反应初速度与底物浓度成正比。（ ） 7 做为辅因子的金属离子，一般并不参与酶活性中心的形成。（ ） 8 底物与酶的活性中心靠共价键结合，以提高催化效率。（ ）
9 测定反应的最适温度时，先将酶在不同温度下保温一段时间，然后在30℃下测定酶活性。（ ）
10 Km值是酶的一种特征性常数，有的酶虽可以有几种底物，但其Km值都是固定不变的。 11 酶原激活作用是不可逆的。（ ）
12 某些酶的Km值可因某些结构上与底物相似的代谢物的存在而改变。（ ） 13 反竞争性抑制剂不会改变酶的最大反应速度。（ ） 14 丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。（ ）
15 用增加底物浓度的办法可以部分或全部解除酶的非竞争性抑制。（ ） 16 酶反应中，底物类似物的抑制作用与过量底物抑制作用的机制基本上是相同的。（ ） 17 核酶只能以RNA为底物进行催化反应。（ ） 18 ATP是磷酸果糖激酶的底物，因而高ATP可以加快磷酸果糖激酶催化F-6-P生成F-1,6-2P的速度（ ）
19 蛋白质磷酸化和去磷酸化是可逆反应，但其可逆反应是由不同种酶催化完成的。（ ） 20 限制性内切核酸酶是能识别数个（一般为4到6个）特定核苷酸序列的DNA水解酶。（ ）
21磷酸化酶激酶从ATP中获得一份磷酸，而变得活化。（ ）
22 利用过渡态类似物为半抗原，免疫动物获得抗体，从抗体中筛选具有催化活性的免疫球蛋白，这是迄今为止获得抗体酶的唯一方法。（ ） 23 负协同性不能用MWC（序变模型）理论解释。（ ）
24 别构调节物的存在能改变酶与底物的结合常数，但不改变酶的最大反应速度。（ ） 25 别构酶作为多酶系统的调节酶常常位于系统的前面，催化限速反应。（ ） 26 别构酶的特点之一是其催化活性受其构象变化的调节。（ ） 27 所有别构酶都具有S形的动力学曲线。（ ） 28 具有正协同效应的酶其Hill系数总是小于1的。（ ）
29 同工酶往往具有相同的电泳迁移率。（ ）
30对于多酶体系，正调节物一般是别构酶的底物，负调节物一般是别构酶的直接产物或代谢序列的最终产物。（ ）
三、选择题
1在测定酶活力是，用下列哪种方法处理酶和底物才合理（ ）
A 其中一种用缓冲液配制即可 B 分别用缓冲液配制，然后混合进行反应 C 先混合，然后保温进行反应
D 分别用缓冲液配制，再预保温两者，最后混合进行反应
2 假定一种酶只有当某一特定的组氨酸残基侧链未被质子化时，酶分子才具有活性，降低pH对于该酶会发生下列哪一种类型的抑制作用。（ ）
A 反竞争性 B 非竞争性 C 竞争性 D 混合型
3 酶的纯粹竞争性抑制具有下列哪种动力学效应（ ） A Vmax不变，Km增大 B Vmax不变，Km减少 C Vmax增大，Km减小 D Vmax增大，Km不变
4 酶与底物分子间的关系可以恰当地表述成（ ）
A 一种临时性结合 B 通过共价键的一种稳定结合 C 酶在其中发生永久性改变的一种结合 D随机的非互补结合
5 已知胰凝乳蛋白酶的转换数是100s-1，DNA聚合酶是15s-1。下列说法正确的是（ ） A 胰凝乳蛋白酶的底物结合常数高于DNA聚合酶
B 胰凝乳蛋白酶反应速度比DNA聚合酶反应速度更大
C 在一定的酶浓度和饱和底物水平下胰凝乳蛋白酶反应速度比DNA聚合酶在相同条件下更低
D 在饱和底物水平下，胰凝乳蛋白酶的反应速度大约是DNA聚合酶反应速度的6.7倍
6羧肽A催化底物水解的过程包括（ ） A结构重排将必需氨基酸残基靠近敏感键 B 形成一个C端环肽的共价中间物
C 活性部位Tyr残基脱质子形成亲核作用
D 活性部位的结合的活化水被底物待裂解肽键的羰基氧置换
7 若某酶特性按照典型的米氏动力学公式，米氏常数值可以从反应速度对底物浓度所作的双倒数图形中的（ ）求得
A 曲线的拐点 B 曲线的斜率 C 曲线在x轴上的截距的绝对值
D曲线在x轴上的截距的绝对值的倒数
8 在胰凝乳蛋白酶催化期间Asp102和His57的作用是（ ）