广州中医药大学中药药理毒理研究室
中药药理学总论实验
一、目的:在生理学和药理学实验基础上,开展中药药理的实验,进一步
提高学生的动手能力,培养学生能用现代科学方法从事中药理论研究和新药开发的初步工作能力。总论部分要使学生进一步掌握常用实验动物的给药方法。 二、要求:
1、掌握小鼠、大鼠、兔等动物的捉持和抓取和固定方法 2、掌握小鼠、大鼠、兔等动物的编号、标记方法 3、掌握小鼠、大鼠、兔等动物的给药方法 4、了解小鼠、大鼠的采血技术方法 三、实验材料:
1、动物:NIH小鼠,SD大鼠,新西兰兔。
2、器材:鼠笼、苦味酸、医用棉签、灌胃器、注射器、毛细玻管、兔固定器、烧杯。
四、实验方法: I、编号标记方法
药理实验使用小鼠和大鼠时,往往数量较多,在随机分组后需要编号和标记,良好的标记方法应符合标号清晰、耐久、简便与适用的要求。编号方法无统一规定,以下方法供参考。
常用3~5%苦味酸溶液(黄色)、2%硝酸银溶液(咖啡色)或0.5%中性品红溶液(红色)涂擦在动物颈、背、腿部皮毛上,编号的原则一般是先左后右,从上至下。
部位 号码 左前肢 右前肢 左后肢 右后肢 头 部 背 部 尾根部 1 2 3 4 5 10 20 如果动物编号较多,可采用在上述动物的不同部位,再涂染另一种涂染剂斑点。
II、实验动物的捉持和给药方法
(一)小鼠
1捉持方法:右手提起鼠尾,放在粗糙物(如鼠笼)上面,轻向后拉其尾,用左手拇指和食指捏住其头部皮肤与双耳,将小鼠固定在掌中,使其腹部朝上,然后以第四指和小指夹住鼠尾. 2.给药方法
(1)灌胃(IG):将小鼠固定后,右手持装有灌胃针头的注射器,自口角插入口腔,沿上颚插入食道,如遇阻力,可将针头抽出在另插,以免穿破食道或误入气管. 给药量为0.1~0.3ml/10g体重.
(2)皮下注射(SC):常在背部皮下注射.一手固定动物,另一手注射,注射量为0.1~0.3ml/10g体重.
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(3)肌肉注射(IM):多注射于后肢股部肌肉,每侧不超过0.1ml.
(4)腹腔注射(IP):左手固定小鼠,右手持注射器,从下腹部外侧进针约3~5mm,呈45°刺入腹腔,注射量为0.1~0.2ml/10g体重.
(5)静脉注射(IV):将小鼠置于固定筒内,使尾巴露在外面,用70~75%酒精棉球擦尾部,或将鼠尾浸入40~45℃温水中,待尾部左右侧静脉扩张后,左手拉尾,右手进针.注射量部不超过0.5ml/10g体重.
(二)大鼠
1.捉持方法:基本上同小鼠.将其放在粗糙物上,右手轻拉其尾,左手中指和拇指放到大鼠左右前肢腋下,食指放入颈部,使大鼠伸开两前肢,便能将其握住.
2.给药方法:灌胃、腹腔注射、皮下注射、静脉注射均同小鼠,给药量为小鼠的2~3倍.
(三)家兔
1.捉持方法:一手抓住颈背部皮肤,轻轻地将家兔提起,另一手托其臀部,或将它置于固定箱内。 2.给药方法
(1)灌胃:二人合作,一人坐好,将家兔夹于两腿之间,左手紧握双耳、固定头部,右手抓住两前肢。另一人将开口器横放于兔口中,压在舌头上面,用8号导尿管从开口器中央孔插入口内,在慢慢插入食道和胃。为避免误入气管,可将胃管外口端放入清水中,如无气泡出现,即证明在胃内,然后灌入药物。给药量常为10ml/kg体重。 (2)皮下、肌肉、腹腔注射方法与鼠类基本相同,最大给药量分别为0.5、1.0和5.0 ml/kg体重。
(3)耳缘静脉注射:用酒精棉球涂兔耳或手指弹兔耳,使局部血管扩张,以手指在耳根部压住静脉,然后注入药液。注射量为2ml/kg体重。
III、实验动物的采血方法
(一)小鼠:剪尾采血、摘除眼球采血、心脏采血、断头采血
(二)大鼠:剪尾采血、割尾静脉采血、穿刺尾动脉采血、眼眶静脉丛(窦)采血、摘除
眼球采血、心脏采血、断头采血
(三)家兔:耳缘静脉采血、耳中央动脉采血、心脏采血
IV、实验动物处死及脏器剖检取材程序
(一)实验动物的处死:脱颈椎、麻醉、空气栓塞等。
(二)剖检顺序:多为先腹腔后胸腔,再脑、脊髓、皮肤肌肉等。一般取材:心、
肝、脾、肺、肾、肾上腺、胃、睾丸、子宫、卵巢、胸腺、前列腺等。
(三)检查内容:
1.位置:有无移位、异位。 2.大小:体积增大、缩小或肿大
3.色泽:整体或局部颜色的增减改变。 4.附加物:有无出血、积液、粘连。 5.质地:硬、韧、软等。
6.切面:多汁、泡沫状、带血、脓汁、干燥等。
7.中空器官的粘膜面:有无出血、溃疡、增厚、隆起物等。