5．斯氏第一结扎：
用玻璃分针将心尖翻向头端，将预先穿入的线沿窦房沟进行结扎，阻断静脉窦和心房之间的兴奋传导（斯氏第一结扎），观察心房、静脉窦活动情况。 待心房、心室恢复跳动后，分别计数静脉窦、心房、心室跳动频率。
6．斯氏第二结扎：
在心房、心室的交界处（房室沟）做斯氏第二结扎，观察心房、心室活动变化情况。待心室恢复跳动后，分别计数静脉窦、心房、心室跳动的频率，填入表格。
表 心脏各部分活动频率的观察
实验条件 结扎前状态
静脉窦（次/min） 心房（次/min） 心室（次/min）
斯氏第一结扎 斯氏第二结扎
五、实验要求和注意事项
1．剪胸骨和胸壁时，伸入胸腔的剪刀要紧贴胸壁，以免损伤心脏和血管。
2．倒三角形创口不要太大，尽量不要暴露肺和肝脏。 3．提起和剪开心包膜时要细心，避免损伤心脏。
4．斯氏第一结扎后，若心房和心室迟迟不能恢复搏动，可做斯氏第二结扎加速其恢复。而每次结扎不宜扎得过紧过死，以能阻断兴奋传导为宜。 5．实验中经常滴加任氏液，使心脏保持湿润。
六、分析与思考
1．为什么用双毁髓蛙进行心搏起源的分析？
2．正常情况下，静脉窦、心房、心室的节律性有何不同?为什么? 3．比较第一、第二斯氏结扎后心房、心室停搏时间的长短，并分析其原因。 4．第一斯氏结扎后和第二斯氏结扎后的心室搏动频率是否相同？为什么？
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实验五 蛙类肠系膜微循环的观察（必做）
一、实验目的
通过观察蟾蜍肠系膜中不同血管内的血流状况，了解微循环各组成部分的结构和血流的特点。
二、实验原理
微循环是指微动脉经毛细血管网到微静脉之间的血液循环，是血液与组织液直接进行物质交换的场所。微循环由微动脉、后微动脉、毛细血管前括约肌、真毛细血管网、通血毛细血管、动-静脉吻合支和微静脉等七部分组成。
在组织较薄的部位，借助于显微镜很容易观察到其中血液的流动情况： 小动脉、微动脉管壁厚 ，内径小，血流速度快，有轴流现象（血细胞在血管中
央流动），血流方向是从主干向分支；
小静脉、微静脉管壁薄 ，内径大，血流速度慢，无轴流现象，血流方向是从分
支向主干汇合；
毛细血管因受管径限制， 仅允许血细胞单个通过，故在显微镜下能清晰地看到
血细胞流动的情况。
三、实验器材和药品
实验对象：蟾蜍或蛙（肠系膜、舌及后肢足蹼等部位的组织较薄，适于用来制备微循环观察标本）
实验器材：蛙类手术器械一套，蛙板，玻璃板，橡皮泥，大头针，显微镜，1ml注射器，滴管；20﹪氨基甲酸乙酯，任氏液。
四、实验方法和步骤 1．蛙肠系膜标本的制备
(1) 取蛙1只，称重后于其皮下淋巴窦注人20%氨基甲酸乙酯(2－3mg/g体重)，约10－15min，动物即进入麻醉状态。
(2) 将已麻醉的蛙背位固定于蛙板上，使其身体左侧紧靠蛙板上的小孔。用镊子轻轻提起左侧腹壁， ★不要将内脏也夹起。
再用剪刀在腹壁上剪一长约1cm的纵向切口。 轻轻拉出小肠拌，将肠系膜
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展开过蛙板上的小孔，并用大头针固定在蛙板上。
★ 小肠拌不能绷得太紧，以免拉破肠系膜或阻断血流，另需要适量任氏液润湿肠系膜，以免干燥，影响血液循环。
2．若用蛙舌或足蹼作观察标本，则用大头针将麻醉的蛙固定在蛙板上，使其鼻端离板孔0.5 cm，拖出舌头，拉紧过孔，并用大头针将舌缘固定在蛙板孔的周缘；或将蛙两足趾展开，使趾蹼过孔，用大头针固定。
3．观察
将标本置低倍镜下观察。可见有许多纵横交错粗细不等的血管。根据血管的粗细和分支情况、血流方向和血流特征，可区别小动脉、小静脉和毛细血管。
(1) 动脉血流的观察 在镜下移动标本直到发现一段较粗血管内的血液流向2分支血管，这段血管就是小动脉。注意观察管中血流速度快，不均匀，有搏动，有轴流现象（血细胞在血管中央流动）。
(2) 静脉血流的观察 移动标本真到发现血流由2支血管汇人1支血管，这2个分支血管就是小静脉，观察管内血流有无搏动和轴流现象，比较动脉和静脉内血流的速度。
(3)毛细血管血流的观察 寻找管径最小、透明、近乎无色的血管即毛细血管。在高倍镜下可见一串串红细胞以单个排列形式在管内移动，或红细胞断断续续地单个移动。血流速度如何？有无搏动？
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★ 三类血管的形态和血流特点与其生理功能有何联系？ 4．血管对药物的反应
(1)滴加几滴0.01%去甲肾上腺素于肠系膜上，持续观察各血管管径及血流的变化。出现变化后立即用任氏液冲洗。
(2)待血流恢复正常后，再滴加几滴0.01％组织胺于肠系膜上，观察血管及血流的变化。若用蛙蹼作为观察标本，则难以观蔡血管对药物的反应。
五、作业：比较动脉、静脉、毛细血管壁的结构特点有哪些不同？
血管名称 血管简图 动脉 静脉 毛细血管 管壁特点 血流速度 分布部位 生理功能
六、实验要求和注意事项
1．掌握小动脉、小静脉和毛细血管内的血流特点。 2．手术过程中应尽量避免出血。
3．用大头针固定时，不能将肠系膜绷得太紧，以免损伤肠系膜或妨碍血流。 4．为防止肠系膜干燥，应经常滴加任氏液保持湿润。
七、分析与思考 1．何谓微循环？
2．微循环是由哪些部分组成的？其功能如何？
3．小动脉和小静脉的血流方式有何区别？
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实验六 血涂片的观察和ABO血型的鉴定（必做）
一、实验目的
1．学习人血涂片的制备，观察红细胞、白细胞和血小板的形态结构。 2．学习ABO血型的鉴定方法，观察红细胞的凝集现象。
3．掌握ABO血型鉴定的原理，认识血型鉴定在临床输血中的重要性。
二、实验原理
血型是血细胞膜上特异凝集原的类型。在ABO血型系统中，根据红细胞膜上所含凝集原（A、B凝集原）的种类和有无，将血型分为A型、B型、AB型、O型四种类型。在人类血清中含有与上述凝集原相对应的天然凝集素（抗A、抗B凝集素）。当凝集原与其相对应的凝集素相遇时将发生红细胞凝集反应，即红细胞彼此聚集在一起，成为肉眼可见的细胞团。因此，将受试者的红细胞分别加入已知的标准A型血清（含抗B凝集素）与标准B型血清（含抗A凝集素）中，观察有无凝集现象，即可判定红细胞膜上有无A或（和）B凝集原，从而鉴定受试者的血型。
三、实验器材和药品 实验对象：人
实验器材：消毒注射器，一次性采血针，玻棒，双凹玻片，试管，显微镜，离心机，棉球；标准A型和B型血清，75﹪酒精，2﹪碘酒，生理盐水。
四、实验方法和步骤 1．血细胞自制涂片
（1）采血：用酒精棉球将手指消毒、采血。
（2）涂片：沾1滴血于一干净载玻片的右端，另用一载玻片作为推片之用，将此推片的末端斜置于第一块载玻片上的血滴的左缘，成30°-40°角度。将推片稍向后退，使之与血滴接触，这样，血液即向推片末端的两边伸展，并在两载玻片之间的斜角中充满。此时把推片向前推动，血液随推片而行，就成了血涂片。 （3）染色：用瑞氏—姬姆萨混合染色液染色5分钟后，滴加蒸馏水稀释，继续染3分钟，冲洗待干，观察。
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