（PAF）可促进血小板的活化及血小板血栓的形成；②内皮细胞活化可诱导硫酸肝素缺失，导致抗凝血酶Ⅲ作用消失，这种缺失需有天然抗体和补体，天 然抗体加上C5a已足够介导此缺失，其与补体连锁激活的整个过程无关；③血栓调节素在内皮细胞活化时缺失而丧失与凝血酶结合的能力；④纤维蛋白溶解酶原激 活因子，可以破坏纤维蛋白凝块，而内皮细胞活化时纤维蛋白溶解酶原激活因子抑制物（PAI-1）的分泌可抑制纤维蛋白溶解酶原激活因子的天然作用，存在一 个与PAI-1产生相关联的网络促凝血作用；⑤含有攻膜复合体成分的活化内皮细胞胞膜破裂，凝血酶原酶激活而导致凝血；⑥当内皮细胞受到天然抗体加补体的 刺激时，最重要的途径可能是由于内皮细胞产生组织因子，引起因子Ⅶ转化为Ⅶa，随后发生凝血连锁反应。
血小板的生理和病理生理学功能被普遍认为可 以导致组织损伤和炎症反应。目前的研究已经证明活化的血小板可以引起内皮系统的活化，血小板与内皮系统的相互作用在移植后早期发挥重要作用[40]。血小 板的活化、聚集亦与活化内皮细胞释放的TXA2和PAF明显升高关系密切。另外,血小板与内皮细胞的初始结合还依赖血小板受体GPIb和内皮下基质中的 Von Willebrand因子(vWF)的相互作用，人的GPIb和vWF之间相互作用可以诱导血小板的活化，但这种作用依赖于血管切应力。猪的vWF也可以 与人的GPIb相互作用诱导血小板聚集，与人和人之间不同的是，猪与人之间的这种相互作用并不依赖于血管切应力的影响。Xu等[41]在DXR的研究中发 现，移
植物内皮细胞和受者血小板之间的相互作用在异种排斥反应的凝血过程起着至关重要的作用，表达CD40L的人血小板和表达CD40的猪内皮细胞之间的 相互作用可导致猪内皮细胞的活化，且此活化可以被抗CD40L的单克隆抗体直接抑制，表明此相互作用在DXR的凝血机制中起到一定的作用，而且可以利用抗 CD154单克隆抗体作为治疗非协调性异种移植排斥反应的一种有效方法。
血小板活化产生的微量凝血酶可以导致内皮细胞的显著改变。包括诱导组织因 子活化和释放E-选择素，分泌型内皮素-1。这些变化在一定程度上是由于血小板表面转化生长因子修饰的IL-1的作用， 并受分泌型转化生长因子-β（TGF-β）的调控[23]。Chen等[42]在研究活化的内皮细胞激活凝血因子的作用时，测试了因子Ⅹa和凝血酶是否能 激活猪内皮细胞，以及表达组织因子通路抑制剂和水蛭素-CD4融合蛋白是否能抑制这种内皮细胞的活化，结果显示，用人因子Ⅹa和凝血酶孵化的猪内皮细胞可 以诱导内皮细胞表面表达E-选择素、VCAM和组织因子，并且此表达呈时间和浓度依赖性。 相反，转染人组织因子通路抑制剂-CD4（TFPI-CD4）融合蛋白的猪内皮细胞可以选择性地抵御因子Ⅹa的促炎效应；同样地，转染水蛭素-CD4融合 蛋白的猪内皮细胞也可以选择性地抵御凝血酶的促炎效应。若因子Ⅹa和凝血酶合并应用则可增强对内皮细胞的活化能力，共同表达TFPI-CD4融合蛋白和水 蛭素-CD4融合蛋白的猪血管内皮细胞则可以完全抑制Ⅹa和凝血酶诱导的VCAM上调表达。另外，Henn[43]和Rushworth等[44]研究发 现极少量的凝血酶就可以刺激血小板
CD40L表达，并与血小板膜表面组成表达的CD40分子结合后，可导致血小板的聚集和释放；与此同时血小板表面的 CD40L还可与内皮细胞表面的CD40分子结合，诱导内皮细胞的炎症反应。 最近的体外实验研究表明猪外周血祖细胞（PBPC）能诱导狒狒血小板 聚集[45]，当大于90%的血小板聚集被抑制后，血栓性微血管病（thrombotic microangiopathy ，TM）被延迟[46]。说明这种PBPC诱导的内皮细胞活化是在输注入猪PBPC的狒狒体内产生TM的机制之一。但这种TM并不是PBPC引起内皮细胞 的活化而产生的，而是PBPC与血小板直接作用而导致的，或者还受补体系统的影响[45]。研究证明，经过人XNA和补体刺激后的内皮细胞具有抗溶解纤维 蛋白原的功能，说明这种抗溶解纤维蛋白原活性与异种移植排斥反应血栓形成有关[46]。另外内皮细胞受损后释放的核苷酸能促进血小板和内皮细胞活化，而表 达在内皮细胞细胞膜上的ATPDase可使ATP和ADP降解成AMP，最终形成有潜在抗血小板聚集和抗炎症反应能力的腺苷，因此内皮细胞丧失 ATPDase活性是促进移植物损伤和血栓形成的原因之一[37]。另外，NK细胞激活内皮细胞也可以使内皮细胞从抗凝状态转为促凝状态，从而促进异种移 植物血管内凝血[47]。
以往影响异种排斥反应凝血过程的治疗方法主要是应用肝素相关药物、抗血小板药物、抗组织因子药物和抗凝血酶药物等抗凝血 药物。近来在体内实验研究中，利用基因工程技术使猪内皮细胞表达人血栓调节素（Thrombomodulin, TBM）、 人ATPDase和人组织因子通
路抑制剂（tissue factor pathway inhibitor, TFPI）等均能不同程度地抑制异种移植物内血栓的形成[48]。其中血栓调节素（TBM）是表达在内皮细胞上的一种重要的调节凝血酶的分子，但猪的 TBM和人的凝血酶及蛋白C有着不相容性，因此在猪内皮细胞上表达人的TBM就可以调节移植物的凝血平衡。另外利用人TFPI可以抑制人凝血因子Ⅹ和组织 因子－Ⅶ复合物的活性这一机理，使猪内皮细胞表达人TFPI 可以抑制异种移植排斥反应中血管内凝血的发生[4]。 最近Cowan等[49]在研究中发现重组抗凝血酶III在猪到人异种移植中可以改善早期移植物的破坏和抑制血管内凝血的发生。 五、内皮细胞与炎性细胞
研究表明异种移植排斥反应发生时，有多种炎性细胞侵润移植物，如NK细胞、单核细胞和中性粒细胞等。NK细胞和单核细胞可以大量浸润异种移植物，而且活化的内皮细胞、NK细胞和单核细胞产生多种细胞因子可以使异种移植物发生炎症反应和血管内血栓形成。 内 皮细胞不仅仅是免疫攻击的靶细胞，同时也通过与抗体间的相互作用和调节炎性细胞－内皮细胞之间的相互作用来激活内皮细胞，使内皮细胞的抗凝功能变为促凝， 加之炎性细胞的浸润，使得移植物遭受排斥反应。内皮细胞活化时，一系列细胞表面粘附分子表达增加，如E-选择素和ICAM-I等。而中性粒细胞、单核细 胞、NK细胞和淋巴细胞等血细胞可表达与活化内皮细胞上E-选择素和ICAM-I等粘附分子有亲和力的配体并与之结合。 另外内皮细胞活化时还分泌多种细胞因子和其它分子，包括IL-1、IL-6、IL-8及PAF。IL-1可活
化单核细胞等血细胞，IL-8是白细胞的化学 趋化因子，而PAF则可以激活中性粒细胞[2]。
白细胞从血管腔内迁移到局部组织的这一过程受到粘附分子包括选择素、整合素、免疫球蛋白家族和 趋化因子家族的调控。内皮细胞表面表达的E-选择素、P-选择素和表达在白细胞表面的L-选择素通过与其对应的受体结合而诱导白细胞在内皮细胞表面滚动， 而且这种滚动所需要的牢固的粘附可以通过白细胞整合素（CD11a/CD18，CD11b/CD18，CD11c/CD18，和CD49d/CD29）结 合到内皮细胞免疫球蛋白超家族（ICAM-1，-2，-3和VCAM-1）来执行。内皮细胞分泌的细胞因子有助于整合素的活化和结合。另外急性跨内皮细胞 迁移步骤与另一种免疫球蛋白超家族CD31或PECAM-1有关，通过嗜同种抗体和嗜异种抗体的相互作用使白细胞利于迁移通过内皮细胞层和基底层。这一浸 润过程在异种排斥反应移植物功能丧失的机制中发挥重要的作用[50]。
免疫组化分析提示，异种移植物浸润的细胞中NK细胞占很大比例，说明NK细 胞的激活和NK细胞介导的细胞毒作用是异种移植的障碍之一。NK细胞通过两种方式粘附到内皮细胞，参与内皮细胞的溶解破坏[51]：① NK细胞通过NK细胞Fc受体（FcγⅢ：CD16）结合到内皮细胞所介导的抗体依赖性细胞毒性作用（ADCC）；② NK细胞通过其表面分子和内皮细胞表面MHCⅠ类分子的相互作用对内皮细胞产生直接毒性作用。 这2种方式都通过NK释放的穿孔素和颗粒酶来发挥效应。 Cascalho等[52]认为有3种机制诱导NK的毒