12.体细胞杂种植物的鉴定常用方法有哪些？
形态学鉴定；细胞学鉴定；同工酶鉴定；DNA分子标记鉴定。
细胞悬浮培养：是将细胞接种于液体培养基中并保持良好的分散状态的培养13.细胞悬浮培养及其优点； 方式。
优点：(1)可以增加细胞与培养液的接触，促进营养的吸收。
(2)保证良好的混合状态，从而获得良好的气体传递效果 (3)可以达到较高的细胞浓度，容易放大培养。 14.细胞培养生物反应器设计要总体考虑的几个重要因素；
(1)采用对细胞无害和耐腐蚀材料制作，耐受蒸汽灭菌
(2)结构严密，内壁光滑无死角，内部附件尽量减少，严格保证无菌环境。 (3)能提供均匀理想的混合状态，保证良好的传质、传热效果 (4)能精密的控制温度、酸碱度、溶解氧和二氧化碳浓度等条件。 (5)能够方便、快捷的实现培养液的连续添加、样品的采集和观察 (6)尽量节省能源消耗 15.植物细胞固定化培养的优势；
(1)细胞经包埋后所受的剪切力减少，维持细胞的稳定性，适合脆弱的植物(2)细胞密度高于悬浮培养，但不会改变培养液流体性质，利于传质 (3)大多数植物次级代谢查无在细胞生长停止后才大量合成。采用固定化培养可以将细胞生长与产物和成两个阶段分开
(4)细胞生长较为缓慢，利于次级代谢产物的累积
(5)增加了细胞与细胞之间的接触，促进了细胞间信息传递，利于代谢物的合成
(6)固定化细胞可以反复使用，可以方便的进行产物的连续性收获，降低了成本
16.固定化培养的方法；
吸附固定法；离子/共价交联法；共价结合法；包埋法；微囊法；海藻酸盐-多聚赖氨酸微囊法
17.固定化细胞培养的生物反应器；
(1)流化床生物反应器
(2)固定床生物反应器：填充床生物反应器；涓流床生物反应器 细胞的培养，同时也利于采用传统生物反应器大规模培养
18.目前采用植物细胞培养生产的药物成分主要包括哪些？
(1)苷类：皂苷，强心苷，甘草甜苷等 (2)固醇：菜油固醇、豆固醇、谷固醇等 (3)生物碱：主要有吡啶、喹啉、异喹啉等 (4)蛋白质类：氨基酸、蛋白质酶抑制剂等 (5)醌类：萘醌、泛醌等 20、简述微藻的应用；
(1)微藻生物能源：微藻生物柴油；微藻生物制氢 (2)生物活性物质的制备 (3)水产饵料 (4)微藻基因工程 (5)其他应用
21、简述利用微载体培养动物细胞的一般流程； （1）选择合适的微载体类型 （2）侵泡水化及消毒 （3）接种
（4）培养观察与细胞计数 （5）传代培养 （6）细胞消化与收获
22、微载体生物反应器培养的优点；
(1)模拟了体内三维生长环境，减轻了接触性抑制，细胞可以多层生长 (2)比表面积大，单位体积培养液的细胞产率高 (3)把悬浮培养和贴壁培养融合在一起，兼有两者的优点 (4)培养液可以循环使用，利用率高 (5)放大容易，劳动强度小 (6)细胞接种、收获简便
(7)生物反应器空间利用率高，培养系统节省空间 23．动物细胞体外生长的特点
(1)动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁，对机械搅拌或剪切力敏感。 (2)动物细胞生长缓慢，易受污染。
(3)正常细胞培养的世代数有限，只有癌细胞和发生转化的细胞才能无限生长。
(4)动物细胞主要以聚集体形式存在，大多需要贴附在载体表面才能生长。
24．动物细胞大规模培养的方法有哪些？ (1)转瓶培养系统 (2)微载体培养
(3)中空纤维微载体培养
(4)大规模培养方式：流加式培养；灌流式培养 25．动物细胞生物制药包括哪些方面？
(1)病毒疫苗 (2)干扰素 (3)单克隆抗体 (1)原核期胚胎显微注射法。 (2)胚胎干细胞移植法 （3)精子载体导入法 (4)反转录病毒感染法 (5)卵母细胞显微注射法 (6)转基因克隆动物 27．干细胞的特征：
(1)自我更新特征：对称分裂；不对称分裂； (2)增殖特征：增殖的缓慢性；增殖的自稳性 (3)分化特征
28、怎样的植物细胞适合作为植物细胞大规模培养生产次生代谢产物的细胞系？
（1）分散性好，适合大规模生产 （2）均一性好：大小、生长周期 （3）生长周期短、利于无菌操作 （4）细胞中代谢产物含量高 （5）细胞生长与目的产物稳定 29、简述植物快速繁殖的技术路线
（1）采集材料：受精卵或发育中的分生组织细胞 （2）消毒：洗净，切成小块，消毒液消毒；
（3）制备外植体：无菌环境下，用无菌刀剥去材料的鳞片、嫩枝的外皮或种
皮胚
（4）接种和培养：无菌环境下将外植体接种在培养基上，封口，在适合温度
下培养；
（5）根的诱导：将培养出的不定芽和侧芽转到生根培养基上进行生根培养，
一个月后即可获得健壮根系；
（6）炼苗移植：在室内自然光照3天，用自来水洗净根须后栽入消毒过的基
质
26．转基因的方法有哪些？
30、简述植物组织培养存在的主要问题及相防治措施
（1）玻璃化问题，即出现一些半透明状的畸形试管植物，分化能力低，难以增殖成芽，也难以生根成苗。其主要防治措施；适当提高光照强度，适当降低培养基中NH4﹢浓度，注意通气，注意细胞分裂素和生长素的配合以及激素和K+之间的配合使用，及适当进行低温处理等；
（2）褐变问题，防止或缓解褐变的方法有：选择适宜的外植体（生长旺盛时期的材料）；选择适宜的培养条件（酸性环境）；使用抑制剂和吸附剂； （3）微生物污染问题；
（4）其他问题，如研究水平，难培养植物，品种退化问题等。 31、胚胎细胞克隆动物与体细胞克隆动物各有什么优势？ 胚胎细胞克隆动物的优势：
（1）胚胎细胞分化程度较低，成功率较高； （2）可能一次性繁殖性状相同或高度相似的动物。 体细胞克隆动物的优势：
（1）体细胞数量丰富，易于获得；
（2）被获取核供体的动物不受性别、年龄限制。
32、胚胎工程动物培育的关键技术环节有哪些？如何控制成功率？ 关键技术环节： （1） 体外受精； （2） 人工受精； （3） 核移植；
（4） 胚胎移植四个环节； 控制成功率：
（1）要对各个环节技术的熟悉了解及掌握，即深化理论知识； （2）对各个环节的相关技术、应注意的问题进行精细控制。 33、动物细胞培养适合工业化生产的常用细胞株有？
（1）CHO细胞 （2）Vero细胞 （3）BHK-21细胞 （4）WI-38细胞 （5）杂交瘤细胞
34、试论述转基因生物（微生物、动物和植物）反应器的各自特点 P250页表12.1
35、分析植物组织培养中存在哪些问题？试论述如何采取相应的措施解决这些问题？ 1、玻璃化问题 措施：
（1）适当提高光照强度；
（2）注意通气，尽量降低培养容器内相对湿度和改善氧气供应状况； （3）适当降低培养基中NH4+浓度；
（4）注意细胞分裂素和生长素的配合以及急速和K+之间的配合使用； （5）控制温度，适当进行低温处理，避免过高的培养温度。 2、褐变问题 措施：
（1）选择适宜的外植体； （2）选择适宜的培养条件； （3）细胞筛选和材料与处理； （4）使用抑制剂：抗氧化剂等； （5）使用吸附剂：活性炭、PVP等。 3、微生物污染问题 措施：
（1）改进外植体消毒方法，结合常规消毒方法，采用间隙消毒方法； （2）反复检查培养物，初代培养成功后反复检查，不要急于扩大培养； （3）使用抗生素。
4、其他问题——植物细胞全能性和激素作用机制不清楚。 措施：深入开展相应方面的基础研究工作。
36、什么是试管动物？试管动物培育一般需要经过哪几个步骤？其繁殖技术的关键问题有哪些？
试管动物：也称体外受精动物，是指将供体的精子和卵子在体外受精，体外培养胚胎发育到一定阶段，通过胚胎移植移入受体完成发育出生的动物。（2分）
培育步骤：
（1）精子采集与体外获能，卵子采集与成熟培养； （2）体外受精；
（3）重组胚激活与体外培养； （4）胚胎移植； （5）体内发育、出生。 关键问题有：
① 精子的采集、获能和卵子的采集与成熟培养； ② 体外受精问题；
③ 胚胎体外培养中的发育阻滞问题； ④胚胎移植成活率低的问题；
37、试分析论述动物细胞体外培养的特点有哪些？体外培养需要哪些条件？动物细胞大规模培养的方法有哪些？各自主要是为了解决什么问题？ （1） 培养特点：
① 动物细胞大，无细胞壁，对机械搅拌或剪切力敏感； ② 动物细胞生长缓慢，易受污染； ③ 正常细胞培养的世代数有限；
④ 动物细胞间主要以聚集体形式存在，大多需要贴附在载体表面才能生长。
（2） 动物细胞体外培养需要的条件：
① 培养基，应包括细胞各种代谢所需的各种成分；
② 需平衡盐溶液、培养基pH调整液、细胞消化液和抗生素液等； ③ 生长条件，包括温度、pH、渗透压、气体等；
④ 培养工具，如GO2培养箱、相差显微镜、培养皿、培养瓶等。 （3） 动物细胞大规模培养的方法及其为了解决的问题是：
① 转瓶（管）培养系统：为了解决从小量培养到大规模培养的过度问题； ② 微载体培养，为摆脱传统的培养瓶（管）培养限制：实现三维立体贴
附培养；
③ 中空纤维生物反应器培养，为改善传统培养方法的气体、营养物质及
水分等物质的通透性；
④ 大规模培养方式：该法是为使细胞持续生长到较高的密度，目标产品
达到较高水平。