第二节基因工程的酶学基础1.3 III类限制性内切酶在完全肯定的位点切割DNA，但反应需要ATP、Mg2+和SAM（S-腺苷蛋氨酸）。它们的识别位点分别是AGACC 和CAGCAG ，切割位点则在下游24-26bp处。在基因工程操作中用途不大。EcoP1: AGACCEcoP15: CAGCAG第二节2. DNA连接酶基因工程的酶学基础2.1 DNA连接酶（ligase)的发现从细菌DNA环化现象推测，必定存在一种能把两条DNA双链连接到一起的酶。DNA复制一定有断口，断口一定由酶连接第二节
2.2.1 两种DNA连接酶
基因工程的酶学基础
2.2 DNA ligase的特点
（1）大肠杆菌连接酶：只能连接粘性末端。
（2）T4噬菌体的连接酶：不但能连接粘性末端，还能连接平末端。2.2.2连接条件
（1）必须是两条双链DNA。（2）DNA3’端有游离的-OH，5’端有一个磷酸基团（P）。（3）需要能量
动物或噬菌体中：ATP 大肠杆菌中：NAD+
第二节
3. DNA聚合酶
基因工程的酶学基础
3.1 基因工程中常用的DNA聚合酶
3.1.1 大肠杆菌DNA聚合酶3.1.2 Klenow fragment 3.1.3 T7 DNA聚合酶3.1.4 T4 DNA聚合酶3.1.5 修饰过的T7 DNA聚合酶3.1.6 逆转录酶第二节
3.2.1共同特点
基因工程的酶学基础
3.2常用的DNA聚合酶的特点
把dNTPs连续地加到引物的3’—OH端。3.2.2 主要区别
持续合成能力和外切酶活性不同。T7 DNA聚合酶可以连续添加数千个dNTPs而不从模板上掉下来。其它几种DNA聚合酶只能连续添加10多个dNTPs就会从模板上解离下来。