色谱柱使用规程AS11

QILU PHARMACEUTICAL 题目：离子色谱柱IonPac AG11/IonPac AS11标准操作规程 登记号 页数：1/5 生效日期：2009-11-27 原登记号： SOP for IonPac AG11/IonPac AS11 审核： 职务： 日期： 制定： 职务： 日期： 批准： 职务： 日期： 分发部门： 研发部分析室 标题 1．领取色谱柱 2. 常规运行条件 正文 颁发部门：研发部分析室 1.1根据从事的分析研究项目的实际要求，领取色谱柱后，进行登记。 1.2仔细阅读说明书，熟悉该柱的类型、使用范围，性能以及使用、保存、再生方法等内容 1.3根据说明书的规定方法，对领取色谱柱进行柱效测试。 取样容积： 定量环25μL + 进样阀死体积0.8μL 色谱柱： AS11 4mm 分析柱 + AG11 4mm 保护住 淋洗液： 12mM NaOH 抑制器： 阴离子自再生抑制器 (ASRS ULTRA) 抑制器循环模式：抑制再循环模式 预期背景电导： ≤8 μS 标准流速： 1.0 mL/min 标准压力： ≤1 000psi（7.58MPa） 存储液： 100 mM硼酸钠 注意：淋洗液必须过滤并除气，样品必须过滤！ 3. 色谱柱使用限度 淋洗液pH范围：0～14 4.淋洗液化学纯度的要求 样品pH范围： 0～14 色谱柱最大流速：3.0mL/min 系统压力限度：200～3000 Psi 应尽可能应用最高纯度的化学试剂、溶剂和去离子水来配制淋洗液 无机化学药品：优级纯（符合或高于美国化学学会ACS标准，可参见药品标签） 去离子水：Ⅰ型试剂级纯度（电阻率 18.2 MΩ·cm ，应无离子杂质、有机物和大于0.2μm的颗粒性物质）。瓶装色谱纯的水不可应用（Burdick&Jackson试剂除外）。 有机溶剂：尽可能应用纯度级别高的溶剂（如Burdick&Jackson超高纯度溶剂、Fisher科技QILU PHARMACEUTICAL 题目：离子色谱柱IonPac AG11/IonPac AS11标准操作规程 登记号 页数：2/5 生效日期：2009-11-27 原登记号： SOP for IonPac AG11/IonPac AS11 审核： 职务： 日期： 制定： 职务： 日期： 批准： 职务： 日期： 分发部门： 研发部分析室 标题 5.淋洗液的配制 5.1配制氢氧化钠淋洗液 5.2含有机溶剂淋洗液的配制 正文 颁发部门：研发部分析室 Optima，有关有机溶剂的详细要求参见条目5）。 按表1，取所需量50%NaOH溶液，用除气去离子水（电阻率 18.2 MΩ·cm）定容至1000mL容量瓶中，得到对应浓度NaOH淋洗液。 避免向50%NaOH或去离子水中引入空气中的CO2，切勿振摇50%NaOH，且不要在溶液顶部吸取溶液。 建议采取称量质量法来取NaOH溶液，例如： 配制1L 12mM NaOH淋洗液，称取 50%NaOH质量=0.012mol/L?40.01g/mol?0.96g 稀释至1L 50%也可以量取一定体积的NaOH溶液，如下公式： g=dvρ g:所需NaOH质量 d：NaOH浓缩液的密度 v：量取NaOH浓缩液体积 ρ：NaOH浓缩液的纯度（%） 应按体积比混合配制，如下例： 配制含乙腈90%淋洗液，先向淋洗液贮器中加入900mL乙腈，然后加入100mL去离子水。 注意： 不要过度清洗或除气含溶剂的淋洗液。 除气和贮存含溶剂淋洗液应在氦气保护的塑料贮器中操作，不可用氮气。 使用含乙腈的碱性淋洗液时，应将乙腈与碱性淋洗液分开存放，以免淋洗液被乙腈的水解产物污染，使用时再用梯度泵按适度比例泵入淋洗液中。 QILU PHARMACEUTICAL 题目：离子色谱柱IonPac AG11/IonPac AS11标准操作规程 登记号 页数：3/5 生效日期：2009-11-27 原登记号： SOP for IonPac AG11/IonPac AS11 审核： 职务： 日期： 制定： 职务： 日期： 批准： 职务： 日期： 分发部门： 研发部分析室 标题 6.含有机溶剂淋洗液使用要求 例如： 正文 安全事项： 颁发部门：研发部分析室 不可将乙腈直接加入含碱性碳酸盐或氢氧化物淋洗液贮器中。 表1 用于IonPac AS11的色谱溶剂 溶剂 乙腈 甲醇 2-丙醇 四氢呋喃 最大浓度 100% 100% 100% 20% 配制1L 12mM NaOH淋洗液，量取 50%NaOH体积=0.012mol/L?40.01g/mol?0.63mL 50%?1.53g/mL由于NaOH淋洗液易吸收CO2，故建议用注射器量取溶液，有利于防止碳酸盐的污染，非要用称量皿称取时，不要倾倒。 表2 50%（w/w）NaOH配制AS11淋洗液的量取标准 50%NaOH g(mL) 0.08(0.0525) 0.40(0.262) 0.96(0.63) 8.00(5.25) 16.00(10.5) 淋洗液中NaOH浓度（mM） 1 5 12 100 200 AS11可适用通常的色谱溶剂（浓度范围0～100%） 有机溶剂与水应提前混合 保证所有的无机化学药品在高浓度有机溶剂淋洗液中可溶 应用纯度级别尽可能高的溶剂 有机溶剂种类、浓度和淋洗液离子强度及流速会影响色谱柱回压，应用时AS11实际回压应QILU PHARMACEUTICAL 题目：离子色谱柱IonPac AG11/IonPac AS11标准操作规程 登记号 页数：4/5 生效日期：2009-11-27 原登记号： SOP for IonPac AG11/IonPac AS11 审核： 职务： 日期： 制定： 职务： 日期： 批准： 职务： 日期： 分发部门： 研发部分析室 标题 7.色谱柱的保养 7.1推荐最大运行压力 7.2色谱柱的启用 7.3色谱柱的储存 7.4色谱柱的清洗 ≤3000psi 正文 颁发部门：研发部分析室 不超过4000psi（27.57Mpa） 注意： 应用含有机溶剂的淋洗液时，抑制器要在自动抑制外部水模式下工作。 色谱柱封存的淋洗液为色谱柱测试时使用的淋洗液。 将色谱柱安装到仪器色谱模块上，按照色谱测试指明的条件下配制淋洗液，并测试色谱柱的性能，连续进行被测标准品的测试，直到色谱保留时间能够重现。当色谱保留时间能够连续的重现时，说明色谱柱已经平衡好。 短期和长期储存都用100mM硼酸钠作储存液，用储存液冲洗柱子至少10分钟，用柱子自带的堵头封住两端。 分三种方案：除酸性可溶物、碱性可溶物和有机污染物，可合并为一个梯度方法，但应注意： 清洗过程中淋洗液的交替，要避免造成局部高压区，不可逆破坏色谱柱性能。 局部高压区可能由以下几种操作造成： 用泵相继抽取不易互溶的淋洗液至色谱柱中，造成淋洗液中某一组分在另一淋洗液中沉淀析出； 使用酸性淋洗液后立即使用碱性淋洗液会形成中性高压带，即酸碱中和形成的盐在色谱柱清洗过程中会形成压力很高的区域； 含有机溶剂的两种淋洗液混合时会形成高粘度的混合区。 当不好选择清洗方法时，请缩短清洗步骤，减少淋洗液中溶剂含量至5%以下，离子强度需≤50mM，可避免产生高压区。 QILU PHARMACEUTICAL 题目：离子色谱柱IonPac AG11/IonPac AS11标准操作规程 登记号 页数：5/5 生效日期：2009-11-27 原登记号： SOP for IonPac AG11/IonPac AS11 审核： 职务： 日期： 制定： 职务： 日期： 批准： 职务： 日期： 分发部门： 研发部分析室 标题 7.4.1清洗液的选择 7.4.2色谱柱的清洗步骤 正文 颁发部门：研发部分析室 A． 浓碱性溶液 如10倍淋洗液浓度的碱性溶液，可去除低价态亲水性残留。 B． 浓酸性溶液 如1~3M HCl，可通过离子抑制原理去除高价态亲水性离子 并可以去除氯离子。可去除大多金属残留，如果处理后依然有金属残留，建议用多价酸，如0.2M草酸处理。 C． 有机溶剂 如果仅含有疏水性和非电离的污染物，可以单独使用有机溶剂进行清洗。有机溶剂极性的选择极性应随着杂质的疏水性增强而减小，并且是AS11允许使用的有机溶剂范围内（见表1）。 D． 200mM HCl与80%乙腈混合液，去除高价态亲水离子及疏水性污染物。必须随用随配以防乙腈在酸中降解。 无论使用何种清洗溶剂，请遵循以下步骤清洗AG11和AS11。 A． 配制500mL适当的清洗液 B． 拆除抑制器，反转保护柱与分析柱的连接次序，再次检查分析柱与保护住柱标签上标明的流路方向与淋洗液流动方向一致，确保清洗液先通过分析柱再过保护柱。如果不确定，请分开清洗每根柱子。 C． 设置流速为1.0mL/min。 D． 用去离子水过渡色谱柱10min。 E． 用清洗液冲洗柱子色谱柱至少60min。 F． 再次用去离子水过渡色谱柱10min。 G． 用淋洗液平衡色谱柱至少60min，然后可进行正常色谱操作。 H． 接回抑制器，将保护柱放回进样阀与分析柱之间。