8.2.1.4 采血步骤：取血之前用热水将手洗净，一方面清洁另一方面使手指温暖易出血，取血前用酒精消毒手指，待干后用采血针向左手无名指指尖迅速垂直刺入，深约2～3mm，让血液自然流出，擦去第一滴血，用血红蛋白吸管吸取需要血量。如血液不易流出，可由掌端向指端握，局部勿用力挤，取血后用干棉球压伤口以防出血，针刺后2小时内，取血手指不应接触水。
8.2.2 血红蛋白测定方法——氰化高铁血红蛋白法 8.2.2.1 原理：血红蛋白（Hb）是一种色蛋白，其分子量为64458，在波长540nm时，以HiCN计，其毫克分子吸光系数为44.0，铁含量为0.00347（0.347%）。
Hb经铁氰化钾氧化后，生成高铁血红蛋白再与氰化钾作用，形成稳定的氰化高铁血红蛋白(HiCN)，除了硫Hb以外，其余各种Hb，如一氧化碳Hb高铁Hb和氧Hb等，均可在短时间内转变为HiCN, HiCN的最大吸收点在波长540nm可用721分光光度计测定。
8.2.2.2 试剂 氰化钾KCN
高铁氰化钾K3Fe(CN)6 磷酸二氢钾KH2P04
非离子表面活性剂TritonX—100
8.2.2.3 氰化高铁血红蛋白稀释液的配制
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精确称取：KCN O.05g K3Fe(CN)6 0.200g KH2P04 0.140g
以上试剂臵1l容量瓶内，溶于200～300ml蒸馏水中，加入1 ml非离子表面活化剂（如Triton X—100），并用蒸馏水稀释至1l，混匀后，储存于棕色玻璃瓶中。
试剂应清晰透明，pH在7.0～7.4之间，为淡黄色溶液。本液不吸收480nm以上的光波。因此读数与蒸馏水空白一致。如暴露于光线，则试剂不稳定。试剂应存于棕色玻璃瓶中，密闭避光保存，高铁氰化钾受冰冻可破坏分解。溶液不应冰冻，如试剂出现混浊则不能用。
非离子表面活性剂，主要用于加速溶血和防止血红蛋白产生沉淀、浑浊。
8.2.2.4 仪器：可用721型分光光度计，581型光电比色计，72型光电比色计，使用时均需经标准液校正，绘制标准曲线，为保证电压的稳定应加稳压器。
8.3 比色：721型分光光度计调波长540nm，以标准液的任一浓度检验OD读数是否在误差允许范围之内，若在误差允许范围内即可测定样品。 8.4 计算和报告结果：按公式
Hb（g/dl）＝OD×K（常数）计算血红蛋白值 8.5 质量控制
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HiCN测血红蛋白方法虽简单，但受很多因素影响，要得到准确的结果必须进行严格的质量控制。
8.5.1 HiCN所用仪器校正，是测定技术的关键问题。因Hb浓度完全依靠仪器的吸光度计算，因此仪器一定要经过校对。使用HiCN标准液测仪器最大吸收峰，应为540nm，最低吸收峰应为504nm，最高最低吸收峰吸光度比值应在1.59到1.63之间。重复性好，波动性小。为保证其结果准确，建议每一小时用标准液测定吸光度以了解仪器的稳定性。
仪器应备有稳压器以保证电压的稳定。所用比色杯应检查其均一性，光径1.Ocm。去除不符合要求的比色杯。 分光光度计校正方法：以氰化高铁血红蛋白的标准液校正仪器，含0.05,0.10,0.15, 0.20g/dl血红蛋白的标准液在标准仪器条件下，波长540nm各浓度光密度值恒定。血红蛋白含量与光密度符合下述公式： Hb（g/dl)＝OD×36.77
仪器允许的准确度和精密度误差允许范围见表4。在各浓度标准液的光密度值在下表许可范围内，仪器附合要求，样品检验结果可靠。使用上述公式计算血红蛋白的含量。若光密度读数超出表内误差允许范围，则公式中的常数（36.77）需要校正，校正公式为：
常数K＝（∑光密度真值/∑光密度读数）×36.77
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例如：某台分光光度计测定标准液，四种浓度的光密度读数分别为0. 13, 0. 255、0. 380和0.515，代入公式，光密度之和为1.280,光密度真值和为1.360。 常数＝(1.360/1.280）×36.77＝39.11
则此台分光光度计测样品时，其光密度读数乘39.11为血红蛋白值。
表4 721分光光度计波长540nm、光径1.Ocm标准液
允许误差
OD真相 0.136 0.272 0.408 0.544 1.360
相应Hb真值
5.0 10.0 15.0 20.0 50.0
误差许可范围 OD 0.133～0.139 0.267～0.277 0.400～0.416 0.533～0.544 1.333～1.387
Hb 4.9～5.1 9.8～10.2 14.7～15.3 19.6～20.4 49.0～51.0
8.5.2 血样含白细胞特别高或存在变性蛋白血症或高γ球蛋白时可与试剂发生沉淀，出现混浊。遇此情况加入1N的NaOH半滴或通过微孔滤膜过滤。因此在测定前一定认真观察溶液是否透明或混浊。此为导致结果增高的重要原因。此外配血红蛋白液，pH如低于7.0,也容易引起混浊，当所用蒸馏水不纯时，也易出现此现象。
8.5.3 取血的误差：取血时将吸管内残存的水吹净并注意血色素吸管内不应有气泡，血色素管头外壁一定要擦干。血色素吸管用前应洗干净，否则易出现挂壁（一些血粘附在吸管壁上）。
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严格检查所用标准及试剂不应有混浊现象，所有试剂均不应冷冻结冰。
8.5.4 操作性能量限考核
手工操作对未知样品的测定必须同时满足精密度和准确度要求方认为结果可靠，见表5。将同一样本每次从采血操作开始多次，重复将采到多份同一样本的样品进行测定，按下列公式计算均值（x）、标准差（s）、变异系数（CV）
x??x/n s???x2???x?2/n/?n?1 CV?s/x?100%
????计算结果应达到表5所列标准。
表5 手工操作性能误差允许范围表
准确度x?s
精密度（CV）
良好性能界限 S＝?0.45g/dl CV＜3.5%
可接受性能界限
???0.75g/dl
5.0%
表三的技术规范
学校卫生情况年报表之三（学生疾病发生情况），包括学生因病缺课、因病休退学及死亡原因的登记填报，是了解和掌握危害大、中、小学生健康、影响学生生活的疾病发生情况及死亡情况的重要方法，考虑到填报工作中的实际情况，该报表的填报因病缺课部分仅在部分监测点校中进行，因病休退学及死亡原因调查在全部所属辖区内进行，具体学校抽样方法见前抽样方法有关章节。
1 上报程序
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