30s，瞬时离心，65°C孵育15min进行衍生化。衍生后的溶液再次瞬时离心，在氮气保护下5(TC吹干。加入100 μ L复溶液复溶,润旋30s, 13200r/min离心2min,进样5 μ L进行LC-MS/MS分析。 [0042] 质谱条件:
[0043] 离子源:电喷雾离子源(ESI)，正离子方式检测；离子喷射电压:5500V;温度:5800C ;源内气体I (GSl，N2)压力:55ps1.;气体2(GS2，N2)压力:60ps1.;气帘气体(N2)压力:20ps1.;扫描方式为多重反应监测(MRM);碰撞气(N2)压力=Medium ;解簇电压(DP)为:35V ;碰撞能量(CE)为:30eV ;30种氨基酸用于定量分析的离子对见表I,同位素标记的氨基酸内标及用于定量分析的离子对见表2。[0044] 表130种氨基酸及用于定量分析的离子对 [0045]
[0046] 色谱条件:
[0047]色谱柱:C18 柱(150 X 4.6mm，5 μ m 粒径);
[0048] 流动相:含0.1 %流动相调节液A和0.01 %流动相调节液B的乙腈-含0.1 %流 动相调节液A和0.01 %流动相调节液B的水溶液，梯度洗脱；
[0049]柱温:50°C ;进样量:5 μ L0 [0050] 测定法:
[0051] 取处理好的质控样本和待测样本溶液各5μ L注入液质联用仪，记录色谱图。 [0052] 质控要求:
[0053] 每I分析批样本随行2个质控样本(质控样本A和质控样本B)。质控样本测定结果偏差应小于20%。如质控样本测定结果不符合上述要求，则该分析批样本测试结果作废，重新检测。 [0054] 表2氨基酸内标及用于定量分析的离子对 [0055]
[0058] 5、结果计算:
[0059]回收率的计算:计算质控样本A和质控样本B对应的精氨酸和苯丙氨酸的浓度。质控样本回收率的计算公式为:回收率(％)=测定浓度/标示浓度X100，回收率(％)应在100±20%范围内。
[0060] 样本结果计算:提取30种氨基酸对应的样本和内标的MRM离子流图，进行积分处理。每5μ L进样中，含有12.5pmol从日常工作液中带入的精氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、天门冬氨酸、瓜氨酸、谷氨酸、缬氨酸、酪氨酸、丙氨酸、鸟氨酸同位素内标衍生物，62.5pmol甘氨酸同位素内标衍生物，没有同位素内标的18种氨基酸采用色谱峰比较邻近的同位素来进行定量，以校正系数K(特定校正系数，与使用的内标有关和加入体积有关)进行校准。
[0061] 氨基酸浓度=样本氨基酸峰面积X内标氨基酸浓度XK/内标氨基酸峰面积 被以下专利引用
引用专利
申请日期 公开日
申请人
专利名
天津市敬业精一种4α-羟基-L-脯氨酸
2014年12015年7
CN103940936B * 细化工有限公及其中痕量L-脯氨酸的
月20日 月1日
司 检测方法 湖北新生源生
2014年92014年12一种hplc检测胱氨酸中
CN104181251A * 物工程股份有
月1日 月3日 酪氨酸含量的方法
限公司 2014年92014年12一种同时测定三种芳香
CN104198643A * 上海海洋大学
月21日 月10日 族氨基酸含量的方法 CN104215707A * 2014年92014年12福建中医药大栝楼桂枝汤的质量检测
引用专利 申请日期 公开日 月2日 月17日 学
申请人
方法
专利名
* 由审查员引用 分类
国际分类号 G01N30/02, G01N27/62
法律事件
日期
代
码
事件
说明
2013年6月
C06 Publication
19日
2013年7月
C10 Request of examination as to substance
24日
2015年2月Deemed withdrawal of patent application after
C02
18日 publication (patent law 2001) Google 首页 - 站点地图 - 美国专利商标局 (USPTO) 专利信息批量下载 - 隐私权政策 - 服务条款 - 关于 Google 专利 - 发送反馈