钇－铝－石榴红(Nd:YAG)1064 纳米的激光器在近红区使用。
仪器校正
拉曼仪器的校准包括三个要素：初始波长（X 轴）,激光波长以及强度（Y 轴）。 仪器供应商应该提供一种由用户可以执行的，对仪器相关参数校准的方
法，
除另有规定外，使用者应根据仪器所提供的校准方法制定具体的 SOP，并严格按 照 SOP 对上述参数进行验证。
特别需要注意到，激光波长变化可影响仪器的波长精度和光度（强度）精度。 即使是最稳定的激光器在使用过程中，其输出波长也会有轻微变化。所以，激光 波长必须被校正以确保拉曼位移的准确性。可以使用仪器公司提供的拉曼位移标 准参考物质进行定期校正。某些仪器可以用一种拉曼内标物与初级光路分离，外 在校准装置通过散射辐射准确地重现这一光路。
推荐使用外部参考标准对仪器进行校正。 方法验证 对拉曼方法进行验证是必须的，至少应考察准确度，精密度等主要指标，然
而，这些指标受诸多可变因素的影响，其中荧光可能是影响方法适用性的主要变 量。样品中荧光杂质的存在完全随样品而异。所以，方法必须能适应不同样品体 系，必须足以将杂质的影响降到最小。
检测器的线性必须适应可能的信号水平范围。荧光可能使信号基线比验证时 高，这时必须设法将荧光减弱或者使验证的方法适应较高的荧光水平。这一要求 对方法的精密度，检测限（LOD）和定量限（LOQ）同样适用，因为基线噪声 的增加会对这些数值产生影响。
由于荧光使基线漂移可能同样会影响定量，所以使用时，同样需要在不同的 光漂白作用水平进行可接受的定量验证。
必须确定激光是否对样品造成影响。在不同激光功率和暴露时间的条件下， 对样品目视检查和仔细审视测得的拉曼光谱测量可以确定样品是否改变（而不是 光漂白作用）。观察到依据是谱带的位置、峰强和谱带宽度是否改变或者背景强 度是否有明显的变化。
影响方法精密度的因素还包括样品的位置。样品的形态对于固体或液体都是
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非常重要的因素，在校正模型中必须严密控制或说明。样品的制备方法或样品试 架的形状可能影响测量灵敏度，而且，该灵敏度会随着仪器的激发光和采集光学 设置的不同而不同。
测定法 获得拉曼光谱可以采用下述任一物质态：结晶态、无定型、液体、气体或等
离子体。 液体能够在玻璃管或石英管中直接测量。无定型和微晶固体也可充填
入玻璃
管或石英管中直接测定。为了获得较大的拉曼散射光强度，通常使照射在样品上 的入射光与所检测的拉曼散射光之间的夹角为 0o，90o 和 180o。样品池的放置可 有多种方式。
除另有规定外，一般用作鉴别的样品不必制样，用作晶型、异构体限度检查 或含量测定时，供试品的制备和具体测定方法可按正文中各品种项下有关规定操 作。
某些特殊样品技术可被应用于表面增强拉曼光谱和显微拉曼光谱测量。 为防止样品分解常采用的一种办法是旋转技术，利用特殊的装置使激光光束 的焦点和样品的表面做相对运动，从而避免了样品的局部过热现象。样品旋转技 术除能防止样品分解外，还能提高分析的灵敏度。
常采用内标法定量，在激光照射下，加入的内标也产生拉曼光谱，选择其一 条拉曼谱带作为标准，将样品的拉曼谱带强度与内标谱带的强度进行比较(通常 比较谱带的面积或高度)。由于内标和样品完全处于相同的实验条件下，一些影 响因素可以相互抵消。
所选择的内标应满足以下要求：
① 化学性质比较稳定，不与样品中被测成分或其它成分发生化学反应，② 内标拉曼谱带和待测物的拉曼谱带互不干扰，③ 内标应比较纯，不含有被测成 分或其他干扰成分。对于非水溶液，常用的内标为四氯化碳(459cm-1)；而对于水 溶液，常用的内标是硝酸根离子(1050cm-1)和高氯酸根离子。对于固体样品，有 时选择样品中某一拉曼谱带作为自身对照内标谱带。
具有多晶现象的固体药品，由于晶型的不同，可能导致所收集供试品的光谱
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图与对照品光谱图或与标准光谱集所收载的光谱图不一致，遇此情况，应按该品 种项下规定的方法进行预处理后再绘制比对。 光谱的形状与所用的仪器型号和
性能、激发波长、样品测定状态、及吸水程
度等因素相关。因此，进行光谱比对时，应考虑各种因素可能造成的影响。
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