作用温度：16℃ for：1.粘性末端形成的氢键在低温下更稳定； 2. 连接反应时间长，低温下酶不容易失活
5、CaCl2法转化的原理、蓝白斑筛选的原理 【CaCl2法转化的原理】
0.1mol/L CaCl2是一种低渗溶液,在0℃冷冻处理大肠杆菌细胞时,细胞膨胀成球形，DNA可吸附在其表面。在短暂的热冲击下，细胞可吸收外源DNA。摄入了外源DNA的细胞在丰富培养基内复制并增殖，表达外源基因。带有选择标记基因的外源载体在受体细胞内表达时，受体细胞表现标记基因的表型，使转化子与非转化子在选择培养基上区分开来。
【蓝白斑筛选的原理】
现在使用的许多载体都带有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框；宿主细胞编码β-半乳糖苷酶C端部分序列。这样，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶（ β-半乳糖苷酶）活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这种现象称为α-互补。 由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。
四、综合分析题
质粒DNA提取结果检测及分析（实例分析提取质粒DNA的质量及纯度，及电泳异常情况及其可能原因及改进措施）。