(5)正己烷（色谱纯） （6）无水硫酸钠
（7）脂肪酸标准(SIGMA)：脂肪酸混合标准
3、气相色谱条件 进样器温度：270℃
检测器温度：270℃。 四、方法 1、甲酯化 硫酸甲醇催化法:
(1) 取25mg纯化的栝楼籽油至特福纶试管（具塞玻璃试管）中，先后加入
1mL甲苯和2mL1N硫酸甲醇溶液，往特福纶试管充氮气盖好盖子，充分振摇，臵于水浴中甲酯化。甲酯化的条件为：80oC条件下反应1h。甲酯化反应结束后冷却到室温。
(2) 加入1mL生理盐水和2mL正己烷，充分振荡，1500rpm的速度离心10min，
重复操作一遍。
(3) 取上层液于一装有2mL蒸馏水的干净试管（尖头）中，振摇，静臵。取
上层液于一加有无水硫酸钠的试管中，再度摇匀，然后将液体小心转移到一干净的具塞试管中。
碱催化法:
(1) 取25mg纯化的栝楼籽油至特福纶试管（具塞玻璃试管）中，先后加入
1mL甲苯和2mL 0.5mol/L甲醇钠溶液，往特福纶试管充氮气盖好盖子，充分振摇，臵于水浴中甲酯化，在 50C温度下反应1h，中间轻摇数次。甲酯化反应结束后冷却到室温。
(2) 加入1mL饱和盐水和2mL正己烷，充分振荡，1500rpm的速度离心10 min。
重复操作一遍。
(3) 取上层液于一装有2mL蒸馏水的干净试管（尖头）中，振摇，静臵。取
上层液于一加有无水硫酸钠的试管中，再度摇匀，然后将液体小心转移
o
到一干净的具塞试管中。
2、色谱分析：
脂肪酸甲酯采用带有火焰离子检测器的GC-6890气相色谱仪进行（岛津公司，日本)，数据采集和接收采用N2010色谱工作数据系统进行（中国智达信息技术公司）。脂肪酸的分离采用DB-23毛细管柱进行(60m×0.25mm i.d., 0.25μm膜厚度, 安捷伦科技有限公司, 美国)。色谱条DB-23件为：柱箱温度初始温度为100oC，100oC保持3min，以20oC/min 的速率上升到190oC，190oC保持10min，然后以5oC/min的速率程序上升到215oC，215oC保持6min，最后以10oC/min的速率升温到230oC，230oC保持5min。载气为氮气，进样采用分流方式，进样口温度和检测器温度均保持在270oC。脂肪酸通过与标准脂肪酸混合物比较鉴定。
3、结果计算
在有微处理机的情况下，用归一化计算法则可自动打印出峰面积和各种脂肪酸占总脂肪酸的百分比。归一化计算法不能直接计算脂肪酸的总重量及各种脂肪酸的实际含量。
五、思考题：
（1）脂肪酸分析前为什么要进行衍生化（甲酯化）？
气相色谱法基础简介
气相色谱法（GC）是英国生物化学家 Martin A T P等人在研究液液分配色谱的基础上，于1952年创立的一种极有效的分离方法，它可分析和分离复杂的多组分混合物。目前由于使用了高效能的色谱柱，高灵敏度的检测器及微处理机，使得气相色谱法成为一种分析速度快、灵敏度高、应用范围广的分析方法。如气相色谱与质谱（GC－MS）联用、气相色谱与Fourier红外光谱(GC－FTIR）联用、气相色谱与原子发射光谱（GC－AES）联用等。
气相色谱也有一定的局限：在没有纯标样条件下，对样品中未知物的定性和定量较为困难，往往需要与红外光谱、质谱等结构分析仪器联用；沸点高、热稳定性差、腐蚀性和反应活性较强的物质，气相色谱分析比较困难。
商品化的制备气相色谱仪有填充柱、毛细管柱和制备气相色谱仪等三种。需要说明的是，先进的气相色谱仪往往兼具填充柱、毛细管柱，分析、制备等多种功能。
本实验使用的是毛细管柱气相色谱仪。 1. 气路系统
1载气瓶， 2 空气瓶， 3 氢气瓶， 4 减压阀， 5 净化管， 6 稳压阀， 7 负压稳压阀， 8 针型阀， 9 压力表， 10 FID，11 干燥管， 12 分流器， 13 毛细管柱， 14 净化室， 15 稳流阀。 2.进样系统 3. 分离系统 4. 温控系统 5、检测器
检测器是气相色谱仪的重要部件，其作用是将色谱柱分离后各组分在载气中浓度或量的变化转换成易于测量的电信号，然后记录并显示出来。其信号及大小为被测组分定性定量的依据。
火焰离子化检测器是以氢气和空气燃烧的火焰作为能源，利用含碳有机物在火焰中燃烧产生离子，在外加的电场作用下，使离子形成离子流，根据离子流产生的电信号强度，检测被色谱柱分离出的组分。
19.3.4. 氢火焰离子化检测器(FID) 气相色谱注意事项 a. 先通载气，后通电；先关电，后关载气。当连续使用或做精细分析时,?晚上最好不关载气，可适当调低入口压强至0.1MPa，保证系统内的正压状态。当TCD?高温运行结束后, 应关热导控制器和温度控制器半小时后才能关载气，以保护传感器元件不被高温氧化；
b. 当第一次使用气瓶减压阀时，请将减压阀原出口接头取下，用附件箱中的接头(CF8.470.080)替代。用Φ3×0.5软管连接减压阀、净化管及仪器，减压阀和净化管接头连接处必须保证不漏气； c. 开气源时，气瓶开关阀应开足，减压阀开关旋至最松，查看减压阀的压力表应压力足够，然后逐渐调减压阀，仪器正常运行时, 使减压阀低压测压强输出为：载气在0.5～0.6MPa之间； 氢气、空气在0.3～0.4之间。若压力过大会损坏仪器内部阀件，甚至引起净化管炸裂；若压强过小，稳压阀不能正常工作，须调至规定范围内； d. 仪器的载气稳压阀出厂时已校至0.4Mpa，一般情况下用户不要自己调整，以免流量表不准确，若调动，载气流量需重新校正；
e. 接入检测器的色谱柱必须事先经过严格老化，其老化温度低于固定相的最高使用温度，高于分析样品时的温度，老化时间应长于36h，并通以适当的流量,?以避免分析时固定相流失引起检测器污染和基线漂移。若用柱箱老化色谱柱，柱出口不能接在检测器上，应使其出气排出仪器外；
f. 用氢气作燃烧气的检测器工作温度应不低于120℃，并且应达到该温度才可点火，
否则会因燃烧后生成的水汽积水，严重影响检测器的使用寿命和性能，关机时也应先关辅助气，待氢气、空气压强降至零，火熄灭后方可降温；
g. 稳流阀使用中不宜将流量调得过小(接近零)，以免损环其阀针，刻度旋钮调节时不要太快，并认准每次是一种旋向(顺或反时针)，以保证流量的重复性；
h. 通电使用中不能拆接任何电气部件，若需维修，必须关电后再操作，并且应搞清楚毛病后再进，轻易不要随便拆换元器件，以免扩大故障范围；
i. 汽化室用进样密封片，在注射10～20次后，应及时更换，以免漏气。进样垫使用前应先在苯或酒精中浸泡清洗半小时，然后在220℃下烘干备用；
j. 仪器工作间及气源室所有管线必须确保不漏气，而且通风良好，以免气体泄漏时发生爆炸。
主机常见故障及排除方法
故 障 现 象 按下电源开关，无显示，风扇叶不转 原 因 1. 1.电源插头、插座不好 2. 2.总保险管坏(220V、10A) 1. 1.电机轴被缠住 2. 2.电机引线压断 3. 3.电机损坏 1. 1.过温保护电路动作 2. 2.某一铂电阻断路或短路 3. 3.实际温度高于保护温度值(320℃) 1. 1.工作温度超过保护温度 1. 1.重新设置 排 除 方 法 1. 1.检修插头、插座 2. 2.打开后盖，换保险管 1. 1.去除缠丝 2. 2.接通连线 3. 3.更换电机 1. 1.检查保护电路 2. 2.更换铂电阻 3. 3.降低温度后再开机 按下总电源开关，有显示，但风扇叶不转 按下总电源开关，有显示，风扇转，但听不到交流接触器吸合的“叭”声，或吸合又断，升温不加热 升温未到预定值即停止加热，实时温度值下降 1. 1.过温熔丝断 柱箱设置正确，但不加温 2. 2.温控主板或固态继电器坏 1. 1.该路加热器损坏 温度设置正确，但某一路启动后不加热 2. 2.该路加温电子部件损坏 1. 1.更换熔丝 2. 2.查出损坏元件更换或交厂家修理 1. 1.更换加热器 2. 2.检查温控主板和固态继电器板，更换坏元件 1. 1.电源不稳定，220V电源各路温度控制不稳定 线接头处有松动 2. 2.交流接触器触头太脏，接触不可靠 1. 1.流量改变 柱头压力表指示值突然变化 2. 2.进样垫漏气 3. 3.柱担体板结 1. 1.检查线路，排除故障 2. 2.检修交流接触器或更换 1. 1.检查气源，载气管路，载气路阀件，压力表等 2. 2.更换进样垫 3. 3.更换色谱柱 1. 1.气瓶开关阀或接头某处氢气或空气压力表指示值突然变化 漏气 2. 2. 气阻变化 3. 3. 接头处漏气 1. 1.查出漏气处作相应处理，换气瓶或重接接头 2. 2.检查气阻,排除故障 3. 3.重新连接