酸溶蛋白（肽）含量的测定
（据QB/T 2653-2004制定）
一、原理
大分子蛋白质和肽链较长的多肽用三氯醋酸溶液进行沉淀，并将其中的短链小肽用酸溶解出来，其中包括小肽和部分α-氨基酸。然后经离心、过滤、消化、蒸馏，测定其蛋白质含量即酸溶蛋白。
二、试剂及仪器
100ml烧杯、10ml和25ml移液管、半微量粗蛋白质测定试剂和装置、40目标准筛、15％三氯醋酸溶液（TCA溶液）、4500 转/ 分钟的离心机、定性滤纸等。
三、试验方法
（1）准确称取样品4.0000g样品，加入15%TCA溶液20ml，混合均匀，静置5分钟。用定性滤纸过滤，取滤液约5ml，4500转/分钟离心10分钟，取上清液4ml注入干燥的消化管中，加入硫酸铜0.2g，硫酸钠3g，再加浓硫酸10ml，消化方法及蒸馏方法与蛋白的测定方法相同。
（2）计算公式： 肽绝对含量（X1）??V1?V0??CHCL?0.0140?6.25?5?N?100%
mX1——样品中肽含量（%） CHCL——标准盐酸摩尔/当量浓度
V1——样品消耗盐酸体积 V0——试剂空白消耗盐酸体积 m——样品重量（精确到0.0001）
N——为微量法测定粗蛋白时的稀释倍数，若全量法测定则为1 肽相对含量（%）?X1?100% X0——样品中的粗蛋白含量 X0
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不 良 寡 糖 定 性 检 测（薄层层析法）
一、原理
薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。一般层析操作包括薄板活化、点样、展层、显色和结果分析等步骤。
二、试剂配制（注意：须在通风橱中进行）
1、展层剂
正丁醇：异丙醇：乙酸：蒸馏水=14：10：4（8）：8 (如有拖尾现象，可适当加大乙酸的量) 展层剂混匀后倒入展层缸。 2、显色剂
苯胺1ml，二苯胺1g，浓磷酸5ml，丙酮50ml
先将二苯胺溶于丙酮中，最后加浓磷酸。因为二苯胺不溶于水。 显色剂避光保存，有毒，小心操作。
三、操作步骤
1、样品处理：称取5g试样溶于40mL蒸馏水，于70℃水浴1h。 2、离心（8000rpm，20min）取上清，放入4℃冰箱保存。 3、硅胶板的活化：将硅胶板置于烘箱中，110℃活化1h备用。 4、点样，用水苏糖、棉籽糖和蔗糖做标准（5mg/mL）。
配制方法：称取5mg的水苏糖或棉籽糖、蔗糖，加入1mL蒸馏水。
在硅胶板底部留两厘米，用铅笔划一直线，隔开间距画上点样孔，用毛细管点样，干了再点第二次，干透后展层。（注意：点样时若发现上清已变浑浊，则必须重新离心。）
6、展层：将点好样的薄层板放入预先饱和的展层装置内，让点样一端浸入展层剂中，其深度约0.5cm（切记：样品点不能浸入展层剂中）。当展层剂上升到离硅胶板的顶端0.5-1.0cm时，停止展层，迅速吹干。
7、显色：将显色剂喷雾，95℃烘箱显色6min。 8、拍照：关闭闪光灯，微距拍摄。
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挥 发 性 盐 基 氮 检 测
(GB/T 5009.45—2003)
一、原理：
由于酶和细菌的作用，样品腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性物质。此类物质具有挥发性，在碱性溶液蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。
二、试剂和仪器设备：
1．盐酸溶液（0.01mol/L）：取测蛋白用的0.1mol/L盐酸溶液100.0mL于1000mL溶量瓶中，加水定容至刻度。
2．氧化镁混悬液（10g/L）：称取1.0克氧化镁，加100mL水，振摇成混悬液。 3．指示剂：甲基红乙醇指示剂（2g/L），次甲基蓝指示剂(1g/L)。 4．硼酸吸收液（20g/L），可用蛋白测定用的硼酸吸收液 5．半微量定氮仪
三、分析步骤：
称取10克试样（准确至0.0001g）于碘量瓶中，加100.0mL水，放入振荡器中振荡30分钟，再倒入离心机中离心5-10分钟。取上清液倒入锥形瓶中。上清液置冰箱中备用。
蒸馏滴定：将盛有20mL吸收液及5-6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取10.0mL上述离心清液于蒸馏器反应室内，加10mL氧化镁混悬液，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸气，进行蒸馏5分钟即停止，吸收液用盐酸标液滴定，至终点蓝紫色，同时做试剂空白试验。
四、计算：
（V－V0）×14×C×10
X（mg/100g ）＝
m
式中：
X—试样中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克(mg/100g) V—测定用样液消耗盐酸溶液体积，单位为毫升（mL）： V0—试剂空白消耗盐酸溶液体积，单位为毫升（mL）： C—盐酸标准溶液的实际浓度，单位为摩尔每升（mol/L）：
14—与1.00mL盐酸标准滴定溶液﹛C(HCl)=1.000mol/L﹜相当的氮的质量，单位为毫克（mg） m—试样质量，单位为克（g）。
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×100
计算结果保留三位有效数字。
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蛋 白 溶 解 度 检 测
(GB/T19541—2004)
一、方法原理
氢氧化钾蛋白溶解度可以反映大豆粕加热过度的情况，不同加热程度的大豆粕，氢氧化钾蛋白溶解度不同。先测定大豆粕样品在规定的条件下，可溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量；再测定同一大豆粕样品中总的粕蛋白质含量，计算出氢氧化钾蛋白质溶解度。
二、试剂
1．0.2%氢氧化钾溶液，相当于0.04N，pH=12.5(2.44gKOH配成1L) 2． 凯氏定氮所需的标准试剂
三、仪器
1. 高速粉碎机，粉碎时间1分钟。 2. 样品筛：孔径0.25mm 3. 磁力搅拌器
4. 离心机:转速为2700r/min以上
四、试样的选取和制备
取具有代表性的大豆粕样品，用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过0.25 mm孔径的样品筛，充分混匀，装于密封容器中备用。
五、操作步骤
称取大豆粕试样1.0克，精确到0.1mg，置于250mL高型烧杯中，加入50.00mL 0.2% KOH溶液，在磁力搅拌器上搅拌20分钟，将溶液转移至离心管中，以2700转的速度离心10分钟后，小心移取上清液10.00mL，放入消化管中,用测定粗蛋白的方法进行测定，将该结果除以粗蛋白结果即为蛋白溶解度。
六、计算
氢氧化钾蛋白质溶解度X,数值以质量分数表示，按下式计算
W1
X=
W2
式中： W1——大豆粕试样溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量；% W2——大豆粕试样总的粗蛋白质含量（以平均结果来计算）；% 计算结果表示到小数点后一位。
×100
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