2）、 微量元素母液的配制 MS培养基中的微量元素可由MnSO44H2O、ZnSO47H2O、H3BO3、KI、NaMoO42H2O CuSO45H2O、CoCl26H2O几种无机盐来供应，它们也可配在同一母液中。配制步骤同大量元素。（具体配制如下表） 母液种类 微量元素 MnSO44H2O ZnSO47H2O H3BO3 KI NaMoO42H2O CuSO45H2O CoCl26H2O 3）、 有机成分母液的配制 MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机成分母液应分别单独配制，配制步骤同上（具体配制见下表） 母液种类 有机成分 甘氨酸 盐酸硫胺素 盐酸吡哆素 烟酸 肌醇 4）、 铁盐母液的配制 铁盐母液宜单独配制，其配法如下： 称取1390mg硫酸亚铁和1865 mg乙二胺四乙酸二钠分别蓉于蒸馏水中，将二者混合后煮沸
成分 规定用量/mg·L1—扩大倍数 母液定容体积/L 称取量/mg 配1LMS培养基吸取量/ml 200 1 4460 1720 1240 166 50 5 5 5 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 成分 规定用量/mg·L1—扩大倍数 母液定容体积/L 称取量/mg 配1LMS培养基吸取量/ml 200 0.1 40 2 10 10 2000 5 2.0 0.1 0.5 0.5 100 数分钟，调节 pH 值至5.8左右，定容至250 ml,装入试剂瓶中备用。 用时每配1L培养基取该液5ml。（具体配制见下表） 母液种类 铁盐 Na2EDTA FeSO4·7H2O 成分 规定用量/mg·L1—扩大倍数 母液定容体积/L 称取量/mg 配1LMS培养基吸取量/ml 200 0.25 1865 1390 5 37.3 27.8 5）、 植物生长调节物质母液的配制 对于植物生长调节物质，配制成母液时，通常用mg·ml1ppm(即百万分之的浓度，指一百－万份重量的溶液中，所含溶质的份数)较为方便，一般配制成0.5 mg·ml于计算也可避免冷藏时形成结晶。 母液种类 生长调节物质 2,4—D/NAA 赤霉素 6—BA 50 10 10 100 成分 称量/mg 母液定容体积 －1母液，这样的浓度便母液浓度/ppm 6）、 其它常用试剂的配制 盐酸 （1mol·L-1） 氢氧化钠 （1mol·L-1） 酒精（75%）用95%的酒精或无水酒精来配制 配制好的各种母液应分别贴上标签，写明母液名称、配制倍数、配制日期、配制者。母液最好在2～4℃的冰箱中保存。尤其对生长调节物质与有机类物质要求较严。储存时间不宜过长，如发现有霉菌和沉淀结晶产生，就不能再使用。 （8）注意事项： 1、所有的组织培养实验操作都必须在无菌条件下进行，所以我们必须时时注意实验材料的无菌和消毒，实验用具必须经过严格的灭菌，在灭菌的时候要特别注意必需等到烧热的实验仪器冷却后在接触材料，否则会把材料“烫伤”，所有的转移材料的操作必需在无菌操作台上进行。 2、培养基消毒灭菌时间不宜过长，也不可超过灭菌锅规定的压力范围；否则，培养基中的蔗糖、有机物质，特别是维生素类物质就会分解，导致培养基变质、变色，甚至难以凝固。当灭菌完成后，应切断电源或热源，待灭菌锅内气压接近“0”时，方可打开放气阀，拧开灭菌锅盖
取出培养基。切勿为急于取出培养基而打开放气阀放气，否则锅内气压下降太快会引起减压沸腾，导致灭菌锅内各容器中的培养基溢出，造成浪费或污染，甚至烫伤工作人员。 3、配制培养基时，要按照规定的用量认真计算并严格取出相应的母液来进行配制，配制玩培养液后要调定其PH值在规定范围。需要加琼脂的培养基在溶解琼脂时一定要充分煮沸，使培养液中看不到任何悬浮物完全透明为止。培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并用细绳以统一标准的方法扎紧瓶口，放入灭菌锅内灭菌。 5．实验数据处理方法 1.、通过记录和照片的方式进行实验结果的及实验现象的记录。 2、通过教材上的实验数据进行分析。 6．参考文献： 1、李浚明、朱登云编译 植物组织培养教程第三版 中国农业大学出版社 2005，9 2、尹文兵、李丽娟等 胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究 山西师范大学学报 2004年 第18卷 第02期 3、王连清主编 植物组织培养 北京 中国农业出版社 2002 4、王玉英 MS培养基的配制方法 《生命世界》 1983年05期
二．实验报告 1． 实验现象与结果 ⑴胡萝卜愈伤组织的诱导结果： 经过诱导，4瓶都出现污染状况，做继代培养用小组的实验材料。 ⑵继代培养的结果： 如上图所示，继代培养得到的三瓶均无污染，三瓶中的愈伤组织增殖情况均良好，其中2、3瓶特别好，愈伤组织呈现结构疏松的特点。 污染情况：无污染。 长势情况：长势良好。 颜色情况：部分颜色有点暗淡，少部分为金黄色，颜色发亮。 2．对实验现象、实验结果的分析及其结论 1、诱导得到的5瓶愈伤组织，5 瓶都受到了污染，从理论上讲在整个操从理论上讲在整个操作过程中，对5瓶的操作几乎完全一样，究其原因可能是操作中由于某种未知原因引入了细菌。而在生长过程中，培养基的是没有被污染的，胡萝卜组织却发生了腐烂，变黄的状况，可能是在实验操作过程中，胡萝卜在消毒液中浸泡时间过长或者在操作过程中受到杂菌的污染导致整个培养基变黑，变质。 2、继代培养后得到的3瓶增殖情况均良好，长满了整个培养瓶，做细胞悬浮培养的时候轻轻一压就得到了单个的碎片，证明愈伤组织的结构很疏松，而且颜色大部分为金黄色，发亮。 2． 实验总结 本次实验过程主要包括MS基本培养基母液和常用试剂的配制、胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制、胡萝卜愈伤组织的诱导、胡萝卜愈伤组织的增殖四个阶段，实验的关键是操作过程中不能引入杂菌污染。 在配制MS基本培养基母液和常用试剂时，先要经过计算得出溶剂的体积，在老师的讲解下，我学会了各种母液和试剂的配制。尤其是试验中的细节：在大量元素母液的配制过程中药品CaCl2要在最后加入，避免它与其它物质反应生成沉淀，且在配置过程中，沉淀的药品不能使用。 在诱导产生愈伤组织的过程中，最关键的就是不能引入杂菌以及防止烫坏材料，为了确保实验成功，我在操作过程中，严格按照无菌操作的要求，保持胆大心细和耐心等待的态度，不放过每一个细节，最终得到了非常好的愈伤组织。这就为后面的继代培养奠定了基础。在继代培养操作中，由于前面得到了很好的愈伤组织，所以得到了很好的继代培养材料，最终继代培养的结果也非常好。 在整个实验过程中，我有2次“守锅”经历，这也使得我完全掌握了高压灭菌锅的使用方法。还有老师那严谨的实验态度和执教风格也给了我一些启迪，我们对实验过程中的细节要处理得当，否则实验会功亏一篑。
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