(1)准备两张干净的载玻片 (2)用70%的酒精消毒指腹
(3)用消毒过的针刺破指腹或耳垂的皮肤,用载片的一端与血液接触,取另一张载片,斜置血滴左缘,角度以45°为宜,将沾有血液的载片向前推进,速度要一致,否则血膜形成波浪形,厚薄不均。
(4)待干后,选较薄的均匀的血膜用蜡笔在它的四周划线,作为堤防。 (5)滴入菜氏染液,盖满血膜即可,静放一分钟,然后,用等量的蒸馏水或缓冲液稀释染液,染2-3分钟,如液面浮现一层金黄色金属物质,表示染液起了染色作用,否则染色失败。
(6)用蒸馏水冲去过剩的染料,血膜呈粉红色,晾干即可镜检。如要保留,可滴树胶封固。
染色结果:红血球细胞质染粉红色,淋巴细胞质天兰色。细胞核兰紫色,嗜碱性颗粒兰紫色,嗜酸性颗粒粉红色,嗜中性颗粒细小淡紫色。
2、人血涂片的观察
先用高倍镜再用油镜观察,辨识血液中的三种有形成分——红细胞、白细胞和血小板
(1)红细胞:小而圆、染粉红色的无核细胞。 (2)白细胞:
①粒细胞:细胞质中有特殊染色颗粒,根据颗粒对染料选择性的不同可分为: 中性粒细胞:是白细胞中数量最多的,体积稍大于红细胞,细胞质染粉红色,胞质中充满细小的兰紫色的颗粒,核紫色,形状变化很大,常分叶,二叶到五叶之间。
嗜酸性粒细胞:数量少,只占白细胞总数的2 –4%,较中性大,胞质中充满红色的大小一致的粗大圆形颗粒。细胞核淡紫色,分成1-3叶 ,一般为两叶。
嗜碱性粒细胞:数量极少,只占白细胞总数的1%以下,细胞质淡紫色,颗粒大小不一,染成紫色或深蓝色,分布不均,细胞核形状不定,圆形或分叶,染色浅。
②淋巴细胞与单核细胞——是无颗粒的白细胞。正常血液中一般看不到大淋巴细胞,主要是小淋巴细胞和一定数量的中淋巴细胞。
小淋巴细胞:稍大于红细胞,核大,细胞质极少只有一薄层,核的一侧有缺痕,核染深蓝色,胞质染成淡兰色,胞质内有时含有染成深红色的嗜天青颗粒。
中淋巴细胞:二倍于红细胞,核圆形或卵圆形,染成深蓝色,细胞质较小淋巴细胞稍多。
单核细胞:细胞体积较大,胞质较多,呈灰蓝色,有时含有细小的嗜天青颗粒 ,胞核圆形、肾形或马蹄形。
(3)血小板:形状不规则的染淡蓝色的原生质小体。内有紫色颗粒聚集,经常成堆分布在红细胞之间。
三、思考题
1、 血液中有哪些有形成分? 2、如何区分三种白细胞? 四、绘图 人血的有形成分
实验六 肌肉组织
一、目的要求:
1、掌握肌肉组织的特点,并能区分三种不同的肌肉。 2、了解肌肉组织与结缔组织的关系。
二、实验内容及方法步骤: 1、平滑肌——肠横切片,H.E染色
肉眼观察小肠壁,可见肠壁外染成红色的部分为肌层,衬在小肠内面的紫红色的带状组织是粘膜,二者之间的粉红色部分是粘膜下层。低倍镜观察肌层,可见基层分为二层,内层为环形肌,外层为纵形肌。转换高倍镜观察纵形肌层的细胞,细胞的断面是大小不等的圆形,相互交织存在。观察外层的环形肌层,可见细胞呈长梭形,纵形平行排列,细胞的两端尖细,而中央部分粗大,有染成兰紫色的椭圆形的细胞核。
2、骨骼肌——骨骼肌纵切片,铁矾苏木精染色
先用中倍镜选择染色较均匀的部分进行观察,横纹肌纤维呈长圆柱形,具有明暗相间的横纹,肌纤维表面有肌膜,肌膜内有多个染为蓝黑色的卵圆形核,位于纤维的周围。
用高倍镜观察肌原纤维及其横纹结构,每条肌原纤维都有明带和暗带,明带染色浅,暗带染色深。选择较清楚的部分在油镜下观察,在暗带中央区的透明线为H线,明带中央的暗线是Z线,Z线与Z线之间即所谓一个肌节。
骨骼肌横切,铁矾苏木精染色
在高倍镜下观察横切的肌纤维是圆形,卵圆形或多角形,细胞核靠近肌膜,每一肌纤维的外面都包有极薄的疏松结缔组织,称肌内膜,很多肌纤维又被肌束膜包围形成肌束。
3、心肌——心脏切片,铁矾苏木精染色
低倍镜观察,由于心肌纤维走向不同,因而在切片上可以看到各种不同的切面,选择典型的纵切面,置视野中央。转换高倍镜可见心肌纤维有分支,细胞核卵圆形,染成兰黑色,位于细胞的中央,肌纤维的横纹呈兰黑色,但不如骨骼肌明显,闰盘呈深兰黑色,较骨骼肌明显。
三、思考题:
1、骨骼肌纤维如何形成一块肌肉? 2、联系机能说明肌肉组织有何共同特点? 四、绘图:
1、高倍镜下绘制骨骼肌的纤维结构。
2、高倍镜下绘制心肌纤维的结构。
实验七
一、目的要求: 1、掌握神经元的结构。
神经组织
2、识别神经胶质细胞。 二、实验内容及方法步骤: 1、神经元——脊髓切片,H.E切片
肉眼观察组织呈椭圆形,左右对称,中央呈蝶形,染深红色,为脊髓的灰质。灰质周围部分染色浅,称为白质。低倍镜观察脊髓灰质,可见在灰质内有散在的染成紫红色、形态较大而有突起结构的细胞,即神经细胞。有些神经细胞内有圆形的细胞核,有的没有。选择一典型的神经细胞,置视野中央,转换高倍镜观察,可见胞体较大,呈三角形,胞质染成紫红色,内含许多大小不一的深紫色颗粒,此为尼氏小体。此外,尚能见到一个至数个突起的断面,但树突和轴突不易区别,胞质内有大而圆的胞核,位于胞体的中央,染色质较少,呈泡状,核仁较明显,圆形,染红色。
观察脊髓横断面切片,苯胺兰染色,可见胞质中染兰蓝色块状物,此为尼氏小体,其形态大小不一,树突内含尼氏体,而轴突于接近胞体处消失。
观察脊髓横断面镀银切片。可见神经细胞的胞质内含有染成棕色有等的纤丝,纤丝在胞体内交织成网,而在树突和轴突中则平行排列,此即为神经元纤维。
2、神经——神经切片,H.E染色
低倍镜观察,可见神经组织中有大小不等,疏密不定的圆形或不正形的团块,此即神经纤维束。神经纤维束内的少量结缔组织,即神经内膜,围绕在神经束外面的薄层结缔组织为神经束膜,位于神经外围的结缔组织称为神经纤维。转换高倍镜观察,可见到不正圆形的结构,此为神经外膜,神经纤维中央有一红色小点,此为轴索。在轴索外周,神经内膜的空隙即为髓鞘。
3、神经末梢
低倍镜观察环层小体,环层小体呈椭圆形。染深蓝色,中央有一棒状物,此即内轴,内轴周围有很多呈同心圆排列的被囊。每层由结缔组织胶原神经纤维及一层扁平形核、染成深蓝色结缔组织细胞组成。小体的一段有染色较深的带状物与内轴相连,此即感觉神经入口处。
低倍镜观察运动终板切片,可见横纹肌染为红色,平行排列成束,其中有染紫色的传出神经纤维。转换高倍镜仔细观察,有髓神经纤维近肌组织时再次分支,伸向肌纤维,形成末短粗大爪形的分支,与肌纤维共同形成运动终板。