金银花叶制作绿茶工艺及主要功能性成分含量研究
摘要：金银花叶片有着与金银花同样的功效，以封丘金银花叶片为原料，按绿茶制作工艺，探讨金银花叶制作绿茶方法；温度作为影响绿茶品质的重要因素，设计不同温度条件下制作的金银花绿茶，用紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法分别测定金银花叶及绿茶的总黄酮和绿原酸含量，结果表明：金银花叶制作绿茶后总黄酮和绿原酸含量相当可观；结合金银花叶绿茶的感官评价，建立金银花叶绿茶制作工艺及理论数据；综合开发利用金银花，提高其经济价值。
关键词：金银花叶 绿茶 工艺 绿原酸 黄酮
金银花（学名：Lonicera japonica）为忍冬科植物，具有清热解毒[1-2]、抗菌消炎之功效，是最常用的中药之一。金银花和叶都含绿原酸、黄酮类等有效成分，具有较为广泛的抗菌消炎作用，金银花叶中绿原酸含量稍低于花的含量，但叶中的总黄酮含量高于花的含量，表明金银花叶片跟花有着同样的功效［3］。文献报道，金银花叶粗提取物的抑菌效果与花粗提取物相同或高于花［4］。近年来，金银花价格低迷，金银花产量低，不易采摘，费时费力，且无法机械化生产，农民种金银花积极性下降，甚至有些农民开始毁掉自己亲手种的金银花。因此综合开发利用金银花，提高其经济价值，增加农民收入成为当务之急。经过多次去金银花基地考察，发现金银花叶产量大，资源非常丰富，金银花每年需要3-4整形修剪，产生了大量的废弃叶片；通过制茶工艺，制作出金银花叶为原料的绿茶，测其制茶后的功能性成分含量，结合外观，颜色，口感等感官评价，找到最佳金银花叶片制茶工艺，提高叶片利用率，增加农民经济收入，提高种植金银花的积极性。提高其经济价值，获得社会效益。 材料与方法 1.1材料与处理
2015年9月20日在新乡市封丘县陈固镇金银花种植基地，采集第三次整形修剪后的金银花叶片。鲜叶采集后应及时摊放，厚度5 cm左右,每隔2 小时翻1次,摊放时间7小时左右,至叶质变软,叶色由绿变暗绿,鲜叶减重率为10%左右时为宜。摊放后,叶质萎软,韧
性加大,杀青过程中茶汁不易外溢,又有利于鲜叶中原始香气成分裂解,产生更多的芳香物质,从而提高成茶品质［5］。 1.2仪器与试剂
茶叶滚筒杀青机（浙江上洋机械有限公司）；茶叶揉捻机6CR-35（雷锋茶叶机械厂）；雷锋牌茶叶烘干机(雷锋茶叶机械厂)；紫外可见分光光度计TU-1810；北京普析通用有限公司；安捷伦公司高效液相色谱仪agilent1200;高速万能粉碎机FE-100,北京永光明医疗仪器厂；电子天平FA-2004，上海越平科学仪器有限公司。芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；绿原酸标准品（中国药品生物制品检定所）；亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，无水乙醇都是分析纯；自制高纯水。 1.3 金银花叶绿茶制作工艺
1.3.1杀青：通过高温破坏和钝化鲜叶中的氧化酶活性，抑制鲜叶中的一系列酶的氧化，蒸发鲜叶部分水分，使叶片变柔软，保持颜色翠绿，又便于揉捻成型。滚筒杀青机预热三分钟；分别把杀青机调至260℃、300℃、340℃经行杀青，根据叶片变化、颜色确定最佳杀青时间。
1.3.2回潮：杀青后的叶片放入整理箱加盖回潮80 min，使杀青后的叶片水分重新均匀分布。使茶叶质软、好成形、折而不碎，保证美观的条索。达到手握成团无脆声，稍有弹性，叶质较柔软，折梗不断。
1.3.3揉捻：利用机械力使杀青叶在揉桶内受到推、压、扭、和摩擦等多种力的相互作用形成紧结的条索。揉捻还使叶片细胞组织破碎，促使部分多酚类物质氧化，减少炒青金银花叶茶的苦涩味，增加浓醇味。将叶片加入揉捻机，揉捻5 min加叶片，叶片加满后，揉捻20 min加压，揉捻50 min。成条率90%以上。
1.3.4摊凉：茶叶揉捻后均匀摊开，促使叶内水分分布均匀，为烘干打下基础。
1.3.5烘干：干燥是绿的最后一道工序,也是决定品质的最后一关,干燥采用烘干机烘干。 目的 (1)利用高温停止酶促氧化作用;(2)蒸发水分,紧缩茶条,使茶叶充分干燥,防止非酶促氧化,利于品质的相对固定,便于贮藏;(3)散失青臭气,进一步提高和发展茶香。分别用3个温度经行烘干，看品质口感及成分
80℃烘干→50 min→摊凉包装 110℃烘干→40 min→摊凉包装 140℃烘干→30 min→摊凉包装
摊叶厚度1cm～ 2cm,烘干时间不超过60 min。叶含水量控制在4%～ 6%,茶叶折梗即断,手捻茶条成粉末,茶香明显即可。 1.4利用绿原酸、总黄酮含量和感官评价三个指标评价茶叶 1.4.1总黄酮含量测定
1.4.1.1金银花叶溶液的制备: 室温阴干的金银花叶片与80℃、
110℃、140℃条件下烘干的金银花叶绿茶，分别编号样品1, 样品2, 样品3, 样品4；粉粹成细粉,各精密称定1.00g,分别置25ml塞锥形瓶中,加入60%乙醇溶液25mL浸泡12小时 ,超声处理(60℃,功率250 W,频率35kHz)1 h,放冷,滤过定容到100ml容量瓶中，摇匀,作为金银花供试品溶液。
1.4.1.2紫外-可见分光光度法测定金银花及其叶中总黄酮的含量 1.4.1．3对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品0.020g,加无水乙醇置水浴上微热使其溶解,放冷,加无水乙醇至100ml容量瓶中,摇匀配制成0.20mg/ml的对照品溶液备用。
1.4.1.4标准曲线的制备:精密量取对照品溶液2.00,4.00，
6.00,8.00,10.00mL分别置50 mL量瓶中,各加高纯水10.0mL；加5%亚硝酸钠溶液2.00mL,混匀,放置6 min；加10%硝酸铝溶液2.00mL,摇匀,放置6 min；加4%氢氧化钠试液20 mL;再加水至刻度,摇匀,放置15min。空白对照直接加蒸馏水10ml，其余试剂同上至刻度。在510 nm的波长处测定吸光度,以测定的吸光度(A)为纵坐标,浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线，得出回归方程为Y=0.0119x-0.001,R2=0.9999。
0.50.40.30.20.1y = 0.011x -0.001R2 = 0.999吸光度00-0.151015202530354045浓度 图1 黄酮标准曲线和线性关系
1.4.2高效液相色谱法测定绿原酸含量
1.4.2.1 色谱条件与系统适用性确定: 采用乙腈- 0.5%乙酸溶液-水(2∶1:7)为流动相；检测波长为327 nm；色谱柱:美国Agilent公司的ZORBAX SB-C18；流速0.8ml/min,进样量10ul；柱温20℃。1.4.2.2对照品溶液的制备:精密称取绿原酸标准品0.005g，加70%甲醇定容于50ml棕色量瓶中,制成每1 mL含100μg的对照品储备液(10℃以下保存)。
1.4.2.3绘制标准曲线及测定:取绿原酸对照品溶液(100μg mL)0、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00、2.40mL,置10 mL棕色量瓶中,加70%甲醇适量,按上述色谱条件经0.22u有机滤膜分别注入进样瓶进样10μL,测定峰面积。以峰面积为纵坐标,绿原酸量(μg)为横坐标,绘制标准曲线。得出回归方程Y=30593x-38.049，R2=0.9971。分别吸取1、2、3、4供试品溶液各2mL,经0.22u有机滤膜分别注入进样瓶测定。
800700600500400300y = 30.59x -38.04R2 = 0.997峰面200积1000051015浓度202530 图2绿原酸标准曲线和线性关系
2结果与分析
2.1样品总黄酮含量结果
样品1（干叶） 样品2（80℃） 样品3（110℃） 样品4（140℃）
样品重量（g） 1g 1g 1g 1g
A 0.462 0.393 0.362 0.221
含量(%) 0.39% 0.33% 0.30% 0.19%
表1 样品总黄酮含量
2.2样品绿原酸含量结果 样品质量 样品1 1g 样品2 1g 样品3 1g 样品4 1g
保留时间（min） 峰面积
6.460 693.521 6.455 686.450 6.473 609.975 6.478 586.238
表2样品绿原酸含量
含量（%） 1.44% 1.42% 1.27% 1.22%