理想质粒载体的构建原理：
天然质粒：本身分子质量大、选择标记少、选择程度复杂 人工：低分子量、高拷贝、多选择标记
1、选择合适的出发质粒 2、获得构建质粒克隆载体的元件 3、组装合适的选择标记基因 4、选用合适的启动子 5、提高外源DNA的容量 6、灭活某些编码基因 人工染色体：
YAC：酵母人工染色体 BAC：细菌人工染色体
MAC：哺乳动物人工染色体 TAC：可转化人工染色体
第五章
1、获取目的基因方法的选择策略（见书本151） 2、cDNA文库的构建过程见书本 3、基因组文库的构建过程
（1）生物基因组DNA的提取和片段化 （2）载体的选择和制备 （3）DNA片段和载体的连接 （4）重组体转化宿主细胞 （5）初库的扩增
4、酵母双杂交系统分离目的基因：
5、mRNA差别显示技术：
第六章
DNA重组技术的基本过程：
第七章 1 世界三大核酸序列数据库：GenBank（美国）；EMBL(欧洲)；DDBJ(日本)
2 蛋白质序列数据库：SWISS－PROT(欧洲)；PIR(美国)
第八章 植物转基因的主要方法
? 农杆菌介导的基因转移 ? 以原生质体或细胞（组织）作为受体的直接基因转移，如： 聚乙二醇法（PEG） 电击（EP ，electroporation） 脂质体（Lip， Lome） 磷酸钙－DNA共沉淀（Ca－P） 微注射（Mi ，Microinjection）
基因枪法（particle bombardment，简称PB） 超声波法（Ulstrasonication） ? 种质系统的基因转移，如利用子房注射 、种胚以及花粉管通道等导入外源基因
Ti质粒：是根癌农杆菌染色体外的遗传物质，为双链共价闭合环状DNA分子，其分子量为95～156
×106D，约有200kb。迄今已从多种植物中分离出不同种类的根癌农杆菌。
Ti质粒的基因位点及其功能区域
T－DNA区：T-DNA是农杆菌侵染植物细胞时，从Ti质粒上切割下来转移到植物细胞的一段DNA，
故称为转移DNA。该DNA片段上的基因与肿瘤的形成有关。
Vir区：该区段上的基因能激活T-DNA转移，使农杆菌表现出毒性，故称之为毒性区。T-DNA
区与Vir区在质粒DNA上彼此相邻，合起来约占Ti质粒DNA的三分之一。
Con区：该区段上存在着与细菌间接合转移相关基因（tra），调控Ti质粒在农杆菌之间的转移。
冠瘿碱能激活tra基因，诱导Ti质粒转移，因此称之为接合转移编码区。
Ori区：该区段基因调控Ti质粒的自我复制起始。 植物基因转化受体系统的建立程序 ? 外植体的选择制备 ? 高频再生系统的建立
外植体的选择、最佳培养基的确定 ? 抗菌素的敏感性试验
既有效抑制细菌生长，又不影响植物的正常生长。 ? 农杆菌的敏感性试验等 选择侵染敏感的农杆菌种类