皿测定光密度。测定时用无菌生理盐水作空白对照。
各种操作条件必须与制作标准曲线时的条件相同，否则，测得的值所换算出的含菌数不准确。
③根据所测得的光密度值，从标准曲线查得每毫升的含菌数。 （4） 活性污泥生物相观察
直接观察。取曝气池的混合液置于100mL量筒内，直观活性污泥在量筒中呈现的絮绒体外观及沉降性能（30min沉降后的污泥体积）。
显微观察。取活性污泥曝气池混合液一小滴，放在洁净的载玻片中央，盖上盖玻片，即制成活性污泥压片标本。在加盖玻片时，要先使盖玻片的一边接触水滴，然后轻轻加下，否则易形成气泡，影响观察。低倍镜观察。观察生物相的全貌，要注意污泥絮粒的大小，污泥结构的松紧程度，菌胶团和丝状菌的比例及其生长状况，并加以记录和作出必要的描述。观察微型动物的种类、活动状况。
四、 实验结果
（1）微生物显微计数 实验结果记录表 计算次数 左上 第一次 第二次 第三次 平均值 22 12 24 19 右上 18 21 19 19 左下 35 13 26 25 右下 32 13 31 24 中间 28 15 19 21 各中格中细胞数 活性污泥生物相观察（观察到的几种微生物） 名称名称
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名称名称
名称 名称
名称 名称
五、 结论
1、代入公式可以算出微生物的数量
酵母菌细胞数?=80小格内酵母菌细胞80数?400?10000?稀释倍数819?19?25?24?2180?400?10000?30?1.62?10
根据观察到的活性污泥性状和其中观察到的微生物相可以得出结论：活性污泥的污泥絮粒大、边缘清淅、结构紧密,呈封闭状、具有良好的吸附和沉降性能。絮粒以菌胶团细菌为骨架,穿插生长一些丝状菌,但丝状菌数量远少于菌胶团细
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菌,未见游离细菌、微型动物以固着类纤毛虫为主,如钟虫、聚缩虫、水熊虫、单缩虫等;偶尔还可看到少量的游动纤毛虫等,轮虫生长活跃。这是运行正常的污水处理设施的活性污泥生物相,表明污泥沉降及凝聚性能较好,它在二沉池能很快和彻底地进行泥水分离,处理出水效果好。在形成这种生物相结构时,应加强运行管理,以继续保持这种运行条件。
六、思考题
1、要是平板菌落计数结果准确，需要注意哪些方面？
答：(1)用平板培养计数法细菌时，计数时选择倒平板的稀释度很重要，待测菌稀释度的选择应根据样品而定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。
(2)用吸管稀释菌液时，放菌液过程中吸管尖不要碰到液面，以免稀释不准确，结果误差较大。
(3)细菌易吸附到玻璃器皿表面，菌液加入培养皿后，应尽快倒入融化并冷至45℃～50℃的培养基，立即摇匀，以免细菌不易分散，菌落连在一起，影响计数。
2、根据试验体会，说明血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？
答：主要有死细胞和活细胞甚至一些杂质也一起计数了，仪器有误差，主要来自计数室体积不准确，显微镜目镜和物镜都有微生物，操作过程并不是无菌操作，稀释过程不规范，在计数过程中菌体在移动等。
血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含菌数，简便快捷。但是在计数时包括死活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。这样得出结果往往偏高，因此适用于对形态个体较大的菌体或孢子进行计数。
理论上血球计数板中400个小格总体积为0.1ul,实际上误差较大。盖片的放置方法应采用推拉而非“盖压”；血球计数板的盖片厚度不能过厚；
纠正仪器误差（1）所用器材均应清洁干燥，计数板、血盖片、微量吸管及刻度吸管的规格应符合要求或经过校正。①计数板的鉴定：要求计数室的台面光滑、透明，划线清晰，计数室划线面积准确。②血盖片应具有一定的重量，平整、
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光滑、无裂痕，厚薄均匀一致（2）芽殖酵母稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒。（3）严格操作，从消毒、培养、稀释、充池到计数都应规范，尤其应注意的是样品稀释及充池时既要作到充分混匀。必须一次性充满计数室，防止产生气泡，充入菌悬液的量以不超过计数室台面与盖玻片之间的矩形边缘为宜。
3、试述血球计数板的计数原理。为什么用两种不同规格的计数板计数同一样品，结果还是一样的？
答：将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板和载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.1mm3），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目换算成单位体积内的微生物总数目。
有原理可见，是根据计数数到的菌体数算出浓度然后推算出菌体的数量，与计数板的规格无关。
4、根据实验观察情况，试对活性污泥的质量及运行情况作初步评价。
答：根据观察到的活性污泥性状和其中观察到的微生物相可以得出结论：活性污泥的污泥絮粒大、边缘清淅、结构紧密,呈封闭状、具有良好的吸附和沉降性能。絮粒以菌胶团细菌为骨架,穿插生长一些丝状菌,但丝状菌数量远少于菌胶团细菌,未见游离细菌、微型动物以固着类纤毛虫为主,如钟虫、聚缩虫、水熊虫、单缩虫等;偶尔还可看到少量的游动纤毛虫等,轮虫生长活跃。这是运行正常的污水处理设施的活性污泥生物相,表明污泥沉降及凝聚性能较好,它在二沉池能很快和彻底地进行泥水分离,处理出水效果好。在形成这种生物相结构时,应加强运行管理,以继续保持这种运行条件。
总结：这是最后一次微生物实验，在此首先感谢老师带给我们的知识，感谢老师的教导。
通过这个学期实验学到的应该是一种学习方法，从实验中掌握知识。平时都是先学了理论知识，背的滚瓜烂熟了，然后实验步骤已经设计好了，来一个照样画葫芦，很少有从实验中学到书本没有知识，在实验中巩固已有的理论知识。这种学习方法也提高了我们的动手能力，特别是然我们有了思考的时间，对我们实验的认识有了彻底的改变。这个是什么都换不来的。
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做每一件事都是有它的方法的。哲学上也说要有正确的方法论指导实践。只有用正确的方法才可以有效快速的解决问题。在实验课知道了微生物实验的操作要求非常高，要求无菌操作，这就要求要学会标准的操作方法，以严肃认真的态度实验，并且在容易污染的地方小心操作。
微生物实验到此就完满结束了，虽然所做的实验并不是很多，但学到的东西不少，新鲜的教学方式，实验并不是一点点按已知的步骤一步一步做，而是要看自己能力去完成，对比起来这样才更像实验，教学效果比起大一大二的那些所谓实验要好很多。
再次感谢老师教会我们的不但是学习和实验知识，还有做人的道理。
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