忌使用暴力。
⑤ 安放卡槽：用与取出的步骤相反顺序的操作安放卡槽。 2． 添加样品，缓冲液及冲洗液：
① 为了减少样品及缓冲液的挥发，在插入加液管前可在加样管固定器的小孔内加入少量的ddH2O。
② 已添加好的加液管，在插入转盘上的固定槽前先离心2min,加液时注意加样枪头紧贴管壁，防止气泡的产生。
③ 为了减少虹吸作用，需要保持入口处和出口处的running buffer 量一致，对于500ul 体积的加液管，推荐加入500ul的剂量；对1.5ml体积的加液管，推荐1.3ml的剂量。
④ 推荐加入样品的最小剂量为50ul,检测需要的最小剂量为15ul。
⑤ 在出口处的waste管中加入50ul的ddH2O，可以防止检测端的毛细管被冲洗液的残留污染。
（二）电泳仪的操作
1．插上电源，检查电泳仪的连接情况，检查制冷区小槽内水量是否充足，打开电脑，打开电泳仪的开关（两扇门都需要关闭），在电脑桌面点开BioFocus的图标，进入到BioFocus的控制界面。
2．设置程序：
① 点击Reagents键，在已有的Reagents Data Base中查看是否含有需要使用的配液，有可点击该配液查看，或使用edit键进行修改；没有则点击add进行编辑添加。添加之后注意命名名称的唯一性。
② 点击Cartridges键，对卡槽的相关参数进行查看，修改。如Cartridges Data Base 中没有和试验要求匹配的配置参数则点击Add进行添加。注意需要激活相应的或者设置的卡槽。
③ 点击Configurations→Define:添加需要的信息:configuration ID; Configuration description; select the cartridge→Continue :Regent 双击左下角regent data base 中需要选择的regent; 双击屏幕右边你需要放置该regent的Inlet Carousel Position→Sample :命名，同样的方式从左下角的Reagents 中添加到右侧相应的位置上→点击empty ,然后点击需要删除的Regent;点击clear ,清除所有设置的Regent 摆放次序→OK。
注：在以上几步中，记得同时设置好中止的清洗程序，及Shutdown程序， ddH2O清洗5分钟，氮气吹干。
④ 点击Methods:选择设置好的程序→Define :填写Method ID, Description→Inlet Regent ，选择电泳中需要的Running buffer →Outlet Regent , 选择电泳中需要的Running buffer→Voltage Mode 填写需要的电压，电流， 正负极，设定电泳时毛细管需要的温度，以及电泳时间→Add:添加在电泳前后需要灌注的洗液等，填写灌注的时间→Injection : 选择电压或者气压的进液方式；前者需选择恒压或者恒流，以及进液时间的长短；后者需选择压力*时间的进液常数→Detector :Detector Parameters : 设置波长，时间，通道，AU范围；Display parameters:设置波长，AU范围，偏移;Options:设置Rise Time, Turn off lamp at run end；Designation: 该设者存储的位置→OK
⑤ 点击Auto Seqs :选择需要的程序→Define 查看，编辑需要调整的程序，如States显示Conflict 则需要对相应的设置进行调整，知道状态显示Pending →Pending， Ready →OK→Start
（三） 停止，存储，查看文件
① 等待所有的程序完成后（包括运行程序及情节程序），要停止运行的程序，则可点击屏幕左上角的Stop键→选择需要中止运行的某一步(Abort Current Run Only)，某一组(Abort Current Run Group)或所有编辑的程序(Abort Automation Sequence)→OK→存储在指定盘上（Yes），自定义盘（NO）→需要取出加液管及转盘(YES),不需要（NO）
注：在所有的对话框消失之前，以及转盘没有回到初始位置之前，不能打开电泳仪的门。 （四）操作要点：
1. 将毛细管电泳仪放置于有空调的房间，保持室温恒定。同时，操作中控制毛细管及仪器恒温。
2. 缓冲液加压一段时间后，淌度和电渗流会变化，要经常更换。 3. 缓冲液要用0.45mm微孔滤膜过滤后使用。
4. 对未涂渍的毛细管柱每天使用前先用0.1mol/L氢氧化钠溶液、水及运行缓冲液各冲洗10min平衡后使用。更换缓冲液时，要用水冲洗3min后，再用缓冲液冲洗10min平衡后进样。
5. 样品宜溶于稀释5~10倍的运行缓冲液中，以获得好的峰形。
6. 为提高定量准确性，宜加入一内标。在保证峰形的前提下，样品宜用高浓度，进样时间应大于5psi×sec。
7. 摸索实验条件时，可先用一短柱，用磷酸盐、硼砂或Tris在不同的pH值条件下试验，当选定缓冲液种类时，可先改变pH值获得最佳分离，再改变浓度以获得较好的峰形及柱效。
为使分析高效、快速，电压一般可用18~20kv。
8.每次作完实验后，用水冲洗5min，可将毛细管两端置于水中保存，也可用氮气吹干后保存。
气相色谱分析法
一、气相色谱的主要组成和其工作原理
气相色谱是对气体物质或可以在一定温度下转化为气体的物质进行检测分析。由于物质的物性不同，其试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同， 虽然载气流速相同，各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定时间的流动后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。
主要组成：气相色谱种类很多，性能也各有差别。主要包括两个系统。即气路系统和电路系统。气路系统主要有压力表、净化器、稳压阀、稳流阀、转子流量计、六通进样阀、进样器、色谱柱、检测器等；电子系统包括各用电部件的稳压电源、温控装置、放大线路、自动进样和收集装置、数据处理机和记录仪等电子器件。 按照功能单元分有：
（1）载气系统。包括气源、气体净化、气体流速控制和测量。 （2）进样系统。包括进样器、汽化室――将液体样品瞬间汽化为蒸气。 （3）色谱柱和柱温。包括恒温控制装置――将多组分样品分离为单个。 （4）检测系统。包括检测器，控温装置。
（5）记录系统。包括放大器、记录仪、有的仪器还有数据处理装置，为便于准确快速检测，GC-MS 和GC-FTIR 也是常用的联合检测组成。
二、气相色谱柱的安装
色谱柱的正确安装才能保证发挥其最佳的性能和延长使用寿命。
正确的安装请参考以下步骤： 步骤1. 检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等检查气体过滤器和进样垫，保证辅助气和检测器的用气畅通有效。如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物，需要将进样口的衬管清洗或更换。 步骤2. 将螺母和密封垫装在色谱柱上，并将色谱柱两端要小心切平 步骤3. 将色谱柱连接于进样口上色谱柱在进样口中插入深度根据所使用的GC仪器不同而定。正确合适的插入能最大可能地保证试验结果的重现性。通常来说，
色谱柱的入口应保持在进样口的中下部，当进样针穿过隔垫完全插入进样口后如果针尖与色谱柱入口相差1-2cm，这就是较为理想的状态。（具体的插入程度和方法参见所使用GC的随机手册）避免用力弯曲挤压毛细管柱，并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与毛细柱接触摩擦，以防柱身断裂受损。将色谱柱正确插入进样口后，用手把连接螺母拧上，拧紧后（用手拧不动了）用扳手再多拧1/4-1/2圈，保证安装的密封程度。因为不紧密的安装，不仅会引起装置的泄漏，而且有可能对色谱柱造成永久损坏。 步骤4. 接通载气当色谱柱与进样口接好后，通载气, 调节柱前压以得到合适的载气流速。 柱前压设置为Psi 15m 25m 30m 50m 100m 0.20mm 10-15 20-30 18-30 40-60 80-120 0.25mm 8-12 13-22 15-25 28-45 55-90 0.32mm 5-10 8-15 10-20 16-30 32-60 0.53mm 1-2 2-3 2-4 4-8 6-14 (以上仅为建议的起始设置，具体数值要依据实际的载气流速。)将色谱柱的出口端插入装有己烷的样品瓶中，正常情况下，我们可以看见瓶中稳定持续的气泡。如果没有气泡，就要重新检查一下载气装置和流量控制器等是否正确设置，并检查一下整个气路有无泄漏。等所有问题解决后，将色谱柱出口从瓶中取出，保证柱端口无溶剂残留，再进行下一步的安装。 步骤5. 将色谱柱连接于检测器上其安装和所需注意的事项与色谱柱与进样口连接大致相同。如果在应用中系统所使用的是ECD或NPD等，那么在老化色谱柱时，应该将柱子与检测器断开，这样检测器可能会更快达到稳定。 步骤6. 确定载气流量，再对色谱柱的安装进行检查注意：如果不通入载气就对色谱柱进行加热，会快速且永久性的损坏色谱柱。 步骤7. 色谱柱的老化色谱柱安装和系统检漏工作完成后，就可以对色谱柱进行老化了。 对色谱柱升至一恒定温度，通常为其温度上限。特殊情况下，可加热至高于最高使用温度10-20℃左右，但是一定不能超过色谱柱的温度上限，那样极易损坏色谱柱。当到达老化温度后，记录并观察基线。初始阶段基线应持续上升，在到达老化温度后5-10分钟开始下降，并且会持续30-90分钟。当到达一个固定的值后就会稳定下来。如果在2-3小时后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能系统装置有泄漏或者污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降到40℃以下，尽快的检查系统并解决相关的问题。如果还是继续的老化，不仅对色谱柱有损坏而且始终得不到正常稳定的基线。 一般来说，涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间长，而弱极性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。而PLOT色谱柱的老化方法有各不相同。PLOT柱的老化步骤:HLZ Pora 系列 250℃， 8小时以上Molesieve(分子筛) 300℃ 12小时Alumina(氧化铝) 200℃ 8小时以上由于水在氧化铝和分子筛PLOT柱中的不可逆吸附，使得这两种色谱柱容易发生保留行为漂移。 当柱子分离过含有高水分样品后，需要将色谱柱重新老化，以除去固定相中吸附的水分。 步骤8. 设置确认载气流速对于毛细管色谱柱，载气
的种类首选高纯度氮气或氢气。载气的纯度最好大于99.995%，而其中的含氧量越少越好。如果您使用的是毛细管色谱柱，那么依照载气的平均线速度（cm/sec）,而不是利用载气流量（ml/min）来对载气做出评价。因为柱效的计算采用的是载气的平均线速度。推荐平均线速度值：氮气：10-12cm/sec 氢气：20-25cm/sec载气杂质过滤器在载气的管线中加入气体过滤装置不仅可以延长色谱柱寿命，而且很大程度的降低了背景噪音。建议最好安装一个高容量脱氧管和一个载气净化器。使用ECD系统时，最好能在其辅助气路中也安装一个脱氧管。 步骤9. 柱流失检测在色谱柱老化过程结束后，利用程序升温作一次空白试验（不进样）。一般是以10℃/min从50℃升至最高使用温度，达到最高使用温度后保持10min。这样我们就会的到一张流失图。这些数值可能对今后作对比试验和实验问题的解决有帮助。在空白试验的色谱图中，不应该有色谱峰出现。如果出现了色谱峰，通常可能是从进样口带来的污染物。如果在正常的使用状态下，色谱柱的性能开始下降，基线的信号值会增高。另外，如果在很低的温度下，基线信号值明显的大于初始值，那么有可能是色谱柱和 GC系统有污染。其他：色谱柱的保存用进样垫将色谱柱的两端封住，并放回原包装。在安装时要将色谱柱的两端截去一部分，保证没有进样垫的碎屑残留于柱中。注意：当空气中氢气的含量在4-10%时，就有爆炸的危险。所以一定要保证实验室有良好的通风系统。
三、气相色谱仪操作规程
1、色谱室应选在无腐蚀气体源的环境中，室内温度+5～35℃范围内，环境湿度≤85%相对湿度，室内应保持空气流通。
2、仪器室电源不应与大功率耗电量设备共用一条线路，接地和接零严格分开，三相进户单相三线制供电。
3、色谱气源必须采用高纯气体，严禁采用任何塑料管道输气，进入仪器前要加具变色分子筛的净化系统，对载气还应串接脱氧管，不同种可燃气体不能放置同一气源室内。 4、任何采用钢瓶供气之气源，使用之最低气压不得<1MP、必须及时更换，换瓶时逆时针方向松开减压器支头螺丝，顺时针关闭瓶头阀，拆下钢瓶减压器，换上同种满瓶气开启瓶头阀，顺时针旋进支头螺丝至所需压力。必须特别提醒，在每次打开钢瓶瓶头阀时，首先必须检查支头螺丝是否松开（逆时针旋转为松开）。只有在确认支头螺丝是松开的状态下方能打开瓶头阀，否则钢瓶减压器在打开瓶头阀时，高压打在低压调节器上，一次即可把减压器击坏。凡遇以上情况作责任事故处理。
5、使用TCD检测器时，应先开载气，并确认整个系统无泄漏情况下再把汽化室，柱室，检测室温度升至所需值，然后开启桥路电流，关机时则先关桥路电流，再降温至60℃，最后关