意。
５、其他纯化方法：凡是用化学反应来除去活性作用点或用物理复盖以达到纯化担体表面性质的方法都可以使用。
（十六）常用的担体目数为多少？
常用的4－6毫米内径的色谱柱：对于较长色谱柱，选用担体目数一般为40－80目；对于较短色谱柱选用担体目数一般为80－100目(每英寸内的筛孔数目为目)。
（十七）常用的担体怎样选择？
各种担体，名目繁多。在常用硅藻土担体中:红色担体（如6201、201），可用于非极性或弱极性物质的分离。白色担体（如101）可用于极性物质或碱性物质。釉化红色担体（如301）可用于中等极性物质。硅烷化白色担体可用于强极性氢键型物质如废水测定。分离酸性物质，如酚类，要用酸洗处理的担体。分离碱性物质，如乙醇胺，要用碱洗处理的担体。微量分析要用硅烷化的担体。有些特殊的情况下要用特殊的担体，如氟担体分离异氰酸酯类。但是在普通的常量分析中，对担体可以不必过份讲究，甚至如耐火砖粉粒，玻璃珠砂和海沙也可以使用。
（十八）何谓固体固定相？大体可分为几类？
指直接装填到色谱柱中作为固定相的具有活性的多孔性固体物质。固体固定相大体可分为三类：第一类是吸附剂。如：分子筛、硅胶、活性炭、氧化铝等；第二类是高分子聚合物。如国内的GDX型高分子多孔微球，国外Ｐorapak系列等；三类是化学键合固定相。在气相色谱中，通常是将固定液涂敷在载体表面上。采用化学键合固定相分析极性或非极性物质通常都能够得到对称峰，柱效很高，固定相的热稳定性也有所改善。
（十九）什么是固定液？对固定液有哪些要求？
一般是一种高沸点的有机物的液膜，通过对不同组份的不同分子间的作用，使组份在色谱柱中得到分离。对气相色谱用的固定液，一般有如下几点要求：１、在操作温度下蒸气压低，热稳定性好，与被分析物理或载气不产生不可逆反应；２、在操作温度下呈液态，而且粘度愈低愈好。物质在高粘度的固定液中传质速度慢，柱效率因而降低。这决定固定液的最低使用温度；３、能牢固地附着在载体上，并形成均匀和结构稳定的薄层；４、被分离的物质必须在其中有一定的溶解度，不然就会很快地被载气带走而不能在两相之间进行分配；５、对沸点相近而类型不同的物质有分离能力，即保留一种类型化合物的能力大于另一种类型。这种分离能力即是固定液的选择性。
（二十）固定液的选择原则有哪些？
根据被分离组分和固定液分子间的相互作用关系，固定液的选择一般根据所谓的“相似性原则”，即固定液的性质与被分离组分之间的某些相似性，如官能团、化学键、极性、某些化学性质等，性质相似时，两种分子间的作用力就强，被分离组分在固定液中的溶解度就大，分配系数大，因而保留时间就长；反之溶解度小，分配系数小，因而能很快流出色谱柱。下面就不同情况进行讨论：a、分离极性化合物，采用极性固定液。这时样品各组分与固定液分子间作用力主要是定向力和诱导力，各组分出峰次序按极性顺序，极性小的先出峰，极性越大，出峰越慢；b、分离非极性化合物，应用非极性固定液，样品各组分与固定液分子间作用力是色散力，没有特殊选择性，这时各组分按沸点顺序出峰，沸点低的先出峰。对于沸点相近的异构物的分离，效率很低；c、分离非极性和极性化合物的混合物时，可用极性固定液，这时非极性组分先馏出，固定液极性越强，非极性组分越易流出；d、 对于能形成氢键的样品。如醇、酚、胺和水的分离，一般选择极性或氢键型的固定液，这时依组分和固定液分子间形成氢键能力大小进行分离。“相似相容性原则”是选择固定液的一般原则，有时利用现有的固定液不能达到满意的分离结果时，往往采用“混合固定液”，应用两种或两种以上性质各不相同的，按适合比例混合的固定液，使分离有比较满意的选择性，又不致使分析时间延长。然而，在实际工作中选择固定液往往是参考资料或文献介绍的实例来选用固定液的。
（二十一）混合固定液的处理方法有几种？
混合固定液的处理方法有三种：１、分别涂渍于担体后再混合；２、将固定液混合后再涂渍，注意这时所用的固定液都应溶解在同一个溶剂里；３、分别涂渍，分别填装入按比例长短的色谱柱，最后再将它们串接起来。上述三种处理方法，结果基本相同，但对于特殊的分离，有些也会有差异。
（二十二）常用的固定液涂量为多少合适？
由于固定液含量对分离效率的影响很大。所以它与担体的重量比例，低比例为5％，一般用15％－25％。液体比例再大，则被分析的样品在比较厚的液膜上有扩散现象，有损于分离；液体比例太低时，则由于液膜太薄，担体表面上残余的吸附能力会显示出来，使色谱峰拖尾。由于低比例能促进平衡的建立，可以用较高的载气流速，所以用低的液体比例，再加上少量样品，能缩短分析时间。对硅藻土担体固定液含量可大些15－30％；由于氟担体表面积较小，所以最多只能10％；至于玻璃微球由于表面积特小，固定液含量便只能保持在0.25％左右。
（二十三）配柱时常用的固定液溶剂有哪些？选用溶剂的原则是什么？
常用的溶剂有：甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、正丁醇、正己烷、石油醚、苯、甲苯和氯仿等等。选用的原则是：１、溶解性好，２、不与固定液起化学反应，３、沸点低，４、毒性小。
（二十四）配柱时在担体上涂渍固定液采用的常规方法是什么？
一般配常用的色谱柱，大都采用“常规”涂渍法，其简要操作为：取所需量的固定液，用适量（能浸过担体）的溶剂溶解，将担体缓缓倒入其中，随到随搅，而后用红外灯照射（或用水浴蒸发）以赶走溶剂，则固定液就附着于担体上了。
（二十五）色谱柱的常用填充方法有哪些？
固定相填充的好坏，将直接影响柱效率.通常多用泵抽填充法，即把色谱柱的一端塞上玻璃棉，接真空泵，另一端接一漏斗，在抽吸下加入固定相，边装边敲打色谱柱，至固定相不再进入为止。装好后，塞上玻璃棉。装柱要求要填充得均匀，紧密，切忌有空隙。
紫外分光光度法
一、基本概念
1分光光度法：测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内对光的吸收度，对物质进行定性、定量分析的方法称为分光光度法。
2紫外光：波长在200～400nm范围内的光称为紫外光。 3可见光：波长在400～760nm范围内的光称为可见光。
4紫外-可见吸收光谱：物质吸收紫外线和可见光区的电磁波而产生的吸收光谱称为紫外-可见吸收光谱。
5紫外-可见分光光度法（UV）：利用紫外-可见吸收光谱进行定性和定量分析的方法，称为紫外-可见分光光度法。紫外-可见分光光度法可用于药物的鉴别、检查和含量测定，是药品检验中应用非常广泛的一类仪器分析方法。《中国药典》附录收载有紫外分光光度法。
二、基本原理及组成 1．基本原理
（1）紫外-可见光谱的性质：分子的价电子吸收了光的能量，由低能量的基态转变为高能量的激发态的过程称为跃迁。被测物分子的价电子吸收紫外光或可见光，从低能级跃迁到高能级，产生吸收光谱。
（2）紫外-可见分光光度法的分析步骤：供试品制成溶液，放入比色皿中，置于紫外-可见分光光度计，绘得吸收图谱。
（3）定性依据：被测物的结构不同，其电子跃迁方式不同，则产生不同的吸收光谱。根据
图谱中的峰位（即最大吸收波长λmax）、谷位（即最小吸收波长λmin）、最大吸收波长处的吸收系数（即E1 mλmax）、有无肩峰、特定波长处的吸收度比值等，可以对被测物进行定性。
（4）定量依据--Lambert-Beer定律：A=-lgT=-lg(I/I0)=ECL
式中，A为供试液的吸收度；T为透光率；E为被测物的吸收系数；C为供试液浓度；L为液层厚度；I0为入射光强度；I为透射光强度。
（5）吸收系数：是物质的特性常数。分为百分吸收系数E1 m和摩尔吸收系数ε。
2．基本组成
（1）基本组成：光源→单色器→吸收池→检测器→数据记录和处理。 （2）光源：紫外光区通常采用氢灯或氘灯，可见光区采用钨灯或卤钨灯。
（3）单色器：由色散元件（棱镜或光栅）和狭缝（过宽，光强小，检测灵敏度降低）组成。 （4）吸收池（比色皿）：紫外光测定用石英吸收池；可见光测定用玻璃吸收池。 （5）检测器：常用光电池、光电管、光电倍增管、光二极管阵列检测器。
三、754紫外可见分光光度计操作方法
（一）用途：能在紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定量的分析。 （二）波长范围：200nm-800nm。 （三）操作要点：
1、插上电源，打开开关，打开试样室盖，按“A/T/C/F”键，选择“T%”状态，选择测量所需波长，预热30分钟。
2、开始测量时要先调节仪器的零点，方法为：
保持在“T%”状态，当关上试样室盖时，屏幕应显示“100.0”，如否，按“OA/100%”键；打开试样室盖，屏幕应显示“000.0”，如否，按“0%”键，重复2-3次，仪器本身的零点即调好，可以开始测量。
3、用参比液润洗一个比色皿，装样到比色皿的3/4处（必须确保光路通过被测样品中心），用吸水纸吸干比色皿外部所沾的液体，将比色皿的光面对准光路放入比色皿架，用同样的方法将所测样品装到其余的比色皿中并放入比色皿架中。
4、将装有参比液的比色皿拉入光路，关上试样室盖，按“A/T/C/F”键，调到“Abs”， 按“OA/100%”键，屏幕显示“0.000”，将其余测试样品一一拉入光路，记下测量数值即可（不可用力拉动拉杆）。
5、测量完毕后，将比色皿清洗干净（最好用乙醇清洗），擦干，放回盒子，关上开关，拔下电源，罩上仪器罩，并打扫卫生，才可离开。 6、本操作要点只针对测量吸光度而言。
（四）注意事项：
1、仪器使用前需开机预热30分钟 2、开关试样室盖时动作要轻缓
3、不要在仪器上方倾倒测试样品，以免样品污染仪器表面，损坏仪器 4、一定要将比色皿外部所沾样品擦干净，才能放进比色皿架进行测定
（五）仪器的校正和检定 1目的：保证测定结果的准确性。
2规定：定期对仪器进行全面校正检定外，还应于测定前对波长进行校正（采用汞灯或氘灯的特征谱线）；吸收度的准确性采用重铬酸钾的硫酸溶液来检定；杂散光则采用碘化钠和亚硝酸钠溶液进行检查。
（六）吸收度的测定方法
1对溶剂的要求。充分溶解样品、不与样品作用、挥发性小、在测定波长处无干扰（透明）。以空气为空白，溶剂吸收度在220～240nm范围内不得超过0.40，在241～250nm范围内不得超过0.20，在251～300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上不得超过0.05。 2空白对照试验。用溶剂调节仪器，使吸收度为0或透光率为100%，然后测定样品池的吸收，此时的吸收即为供试品的吸收。
3测定波长确证。采用1cm的石英吸收池，核对供试品吸收峰的位置，应在规定吸收峰波长±2nm以 以内。
4供试品溶液的浓度。使用吸收度在0.3～0.7范围内所对应的供试品溶液的浓度。 5仪器的狭缝宽度。过大，光纯度变差，则A降低；应以减少狭缝宽度，A不再增加为准。
（七）应用
1鉴别。同一物质的UV谱应该相同，但是，相同的UV光谱不一定代表同一物质。为了提高UV光谱的专属性，《中国药典》采用下列方式：①对比光谱的特征参数：λmax、λmin、E1 m、A、肩峰、吸收谷。②对比吸收度比值的一致性。③对比吸收光谱的一致性。 2杂质检查。利用药物和杂质的吸收光谱有明显差别进行检查。若药物无吸收，杂质有吸收，可通过控制其吸收度不得超过规定值控制杂质限量；若药物有吸收，杂质吸收很弱或没有吸收，也可以通过控制其吸收度控制杂质限量。
3含量测定。
(1) 对照品比较法。在相同的条件下分别测定供试液（CX）和对照液（CR）的吸收度AX 和AR，按下式计算含量：CX=（AX/AR）CR
(2) 吸收系数法。在规定波长处测定供试液的吸收度，依被测组分的吸收系数计算含量。 使用吸收系数法测定时，对仪器须进行严格的校正和检定，如波长的准确度、狭缝宽度等必须符合要求，以保证吸收度测定的准确性。
(3) 计算分光光度法。将测得的吸收度进行适当的数学处理，求得待测组分的含量。例如， 双波长分光光度法、导数光谱法等。主要用于消除样品中干扰组分的干扰。 (4) 工作曲线法。配制系列的标准溶液，绘制工作曲线，从中查得供试液含量。