XX制药有限公司
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微生物限度方法适用性试验报告
文件编号：XXX
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微生物限度方法适用性试验报告
起草人_____________ 审核人_____________ 批准人_____________
部门____________ 部门____________ 日期__________ _
___________ ___________ 日期日期
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1、概述
本公司主要产品之一，本产品已进行批量生产并已进行工艺验证,微生物检验相对稳定，由于《中华人民共和国药典》2015年版对微生物限度检查方法改变，其产品的微生物检验方法和培养基发生改变，可能影响检验结果的准确性。为确保检测方法的准确性及适应性，测定方法的可靠性进行验证，根据样品特性制定检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。 2、验证依据：《中华人民共和国药典》2015版 四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、1107非无菌药品微生物限度标准。 3、验证目的
建立该产品的微生物限度检查方法，并对其有效性进行评价，确保试验方法的完整性，保证检验结果的可靠性。 4 、验证小组成员及职责 人 员 姓 名 组 长 副组长 成 员 职 位 质量部 经理 质量部 QC主任 职责 质量负责人负责验证报告的审核、批准。 1.负责对确认记录、数据进行复核，确认报告的总结。 2.负责对验证及检验记录、数据、结果进行分析和汇总。 1、负责验证报告的起草 检验人员 2、负责检验数据的收集、记录的填写 5、主要验证用仪器仪表的校验 仪器名称 立式压力蒸汽灭菌器 生化培养箱 超净工作台 结果：
确认人： 日期：
规格型号 检定情况 检定部门
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6、验证用菌种及培养基
菌种名称 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 培养基、缓冲液名称 胰酪大豆胨琼脂培养基 胰酪大豆胨液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 麦康凯液体培养基 麦康凯琼脂培养基 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 复核人
编号 （批号） 批号 来 源 配制批号 日 期 购进日期 传代日期 有效期至 传代 次数
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7、试验菌悬液制备
7.1 需氧菌总数计数方法适用性试验、霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验菌株培养 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌于胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30-35℃培养3天；接种白色念珠菌、黑曲霉于胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30-35℃培养5天，用于需氧菌总数计数方法适用性试验。
接种白色念珠菌、黑曲霉于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于20-25℃培养5天，用于霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加人3～5ml含0.05% (m l/m l)聚山梨酯8 0的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2?8℃ ,在验证过的贮存期内使用。 7.2 大肠埃希菌检查方法适用性实验菌株培养
将大肠埃细菌接种于胰酪大豆胨琼脂培养基上，30-35℃培养18-24小时，取培养物适量，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8℃，可在24小时内使用。
8、供试液的制备
取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，制成1：10的供试液。
8.1需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数计数方法适用性试验
8.1.1试验组 取上述1:10供试液1ml和不大于100cfu试验菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉），分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。
取上述1:10供试液1ml和不大于100cfu试验菌（白色念珠菌、黑曲霉），分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。
胰酪大豆胨琼脂培养基用于需氧菌总数计数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于霉菌和酵