下α、β亚基分离最终暴露出α亚基两聚体中的巯基活性中心(XⅢα.A )，这种活化的因子XⅢ既可以使相邻的纤维蛋白共价交联形成不溶性的纤维蛋白多聚体，又可使α2一纤溶酶抑制物(α2-PI)、纤粘蛋白(Fn)和胶原等与纤维蛋白交联，从而形成稳固的纤维蛋白凝块，不但可增加对纤溶酶的抵抗性，还有利于伤口的愈合。
2．因子XⅢ筛选试验，有时也叫因子XⅢ定性试验，如出现2 4小时内凝块完全溶解或部分溶解则提示存在因子XⅢ先天性或获得性缺乏，后者主要表现在肝脏病变、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、淋巴瘤、转移性肝癌、恶性贫血、弥散性血管内凝血和原发性纤溶亢进等。对于部分凝块溶解的病例，或需进一步分析因子XⅢ四聚体缺陷作疾病分类的，可以测定α亚基和β亚基的抗原含量。在手术后伤口差，或自身免疫性疾病时，也可直接测定因子xⅢ各亚基的抗原含量，对于免疫机能的评价是有益的。
3．因子XⅢ缺乏引起的出血是很特殊的，通常情况下不被注意，用止血血栓一般试验，如APTT、ACT、PT、TT以及因子活性测定都不能诊断，当手术后，或普通伤口发生愈合缓慢、不断渗血，而上述试验又表现正常时，要考虑因子XⅢ。此时单做因子X III筛选试验也可确定其是否存在缺陷。需注意的是，试验中使用氯化钙必须新鲜配制，这是消除假阴性的关键。 血浆组织因子 plasma tissue factor 参考范围：
30～220цg／L(ELISA法) 临床评价：
1．组织因子(TF)又称组织凝血活酶(tissue thromboplastin)，也可称作凝血因子Ⅲ。其分
～
子量为37000，基因长度为12.4kb，定位于1号染色体(1 pter12)，虽然在组织中广泛存在却是唯一的一个不存在正常人血浆中的凝血因子。组织因子参与凝血因子Ⅶ的激活进而激活因子X，这是早已肯定的，但直到2 O世纪的80年代中期，随着Broze，Morris—sey等人分离出组织因子，才较全面地了解了这个凝血因子。目前不但知道TF是一种跨膜结构的糖蛋白，更清楚了TF一Ⅶ(Ⅶa)复合物可以激活因子Ⅸ。因此，人们不能不考虑到体内凝血途径是否就启动而言，主要就是组织因子在起作用，在凝血酶形成后，才有凝血因子Ⅺ的激活。鉴于对TF的这种认识，再加上生理情况下血浆中并无TF的存在，所以对TF血浆水平的检测可作为一种凝血标志物。
2．血浆TF水平用ELISA法检测，国内还缺乏较权威的正常参考范围，如果升高可考虑全身炎症反应，如内毒素作用、严重创伤、休克、ARDS或各种原因引起的DIC；体内某些活性物质增高，如肿瘤坏死因子、白介素-1、白介素-6大量分泌时，TF水平也会同步升高，且往往呈平行表达，在疾病好转或治疗有效时，水平下降。
3．组织因子往往与因子Ⅶ和Apo形成复合物，检测出来的往往是总量而非游离TF。在怀疑广泛血管内皮损伤引起的DIC时，T'F检测是最敏感和可靠的，且高水平的TF往往提示DIC预后不佳。目前有很多实体肿瘤和白血病已被认为可发生急性血栓形成或DIC，对这些患者血浆TF检测水平升高时，因及时介入抗凝治疗，尤其在恶性肿瘤的围手术期。 血浆抗凝血酶Ⅲ
plasma antithrombin Ill，AT—III 参考范围：
AT-Ⅲ抗原量：2 6 0～3 2 0mg／L(火箭电泳) AT-Ⅲ活性：9 2％～108％(发色底物法) 临床评价：
1．抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)过去也曾叫作肝素辅因子I，是目前已明确的体内最重要的生理
性抗凝物质，占机体抗凝活性的40％～50％左右。其血浆浓度为1 5 0mg／I。，主要在肝脏合成，分子量为58000，基因长度1 4kb，定位于1号染色体(1 P23)。AT-Ⅲ属丝氨酸蛋白酶，内皮细胞和巨核细胞也能合成少量AT-Ⅲ，且对抗凝活性贡献颇大。AT-Ⅲ通常以1：1的方式与凝血因子结合，尤其是凝血酶、X a和Ⅸa和Ⅺa等，这种活力(灭活)在肝素的存在下可更好地修正AT-Ⅲ与上述蛋白酶的结合位点，使抗凝活性提高2000倍。最新研究还证实AT-Ⅲ与肝素结合后，可抑制Ⅶa／TF复合物，且无需组织因子途径抑制物C TFPI的存在。
2．凝血酶Ⅲ的检测目的在于评估受检者是否存在高凝状态的可能，对有家族性血栓形成的人群进行流行病学调查，对青少年型的血栓性疾病和深静脉血栓等进行病因检查，也用于因肺梗死等致死病因的调查。另一方面对抗凝替代治疗的患者，AT-Ⅲ检测可作为一个实验室监护指标。一般说来，AT-Ⅲ水平(活性)升高的机会不多，个别血友病甲、乙患者和口服抗凝剂的病人血浆AT-Ⅲ水平可能升高。而AT-Ⅲ水平下降者中可能是先天性AT-Ⅲ缺乏症，这类病人AT-Ⅲ水平仅为正常人的50％以下，在手术，创伤，感染，妊娠等诱因存在时，可发生反复的静脉血栓。另一类为获得性AT-Ⅲ缺乏，主要见于肝脏疾病的合成障碍；肾病综合征时的过多丢失；血栓性疾病、心肌梗死、DIC、口服避孕药时的消耗过多等。这时的AT-Ⅲ水平持续下降，往往提示预后极差。
3．抗凝血酶Ⅲ含量主要依据其结构特性，用抗原量来检测，从目前已报道的11种AT-Ⅲ氨基酸突变而致的结构和功能改变来看，先天性的AT-Ⅲ缺陷或有高度怀疑家族性AT-Ⅲ缺乏时，一定要坚持AT-Ⅲ活性和抗原含量同时检测，以利于对AT-Ⅲ缺乏的分类。目前常用的临床分型可将AT-Ⅲ缺乏分三型，其中A型为抗原含量与活性同步下降，可认为是交叉反应物质阴性(CRM-)；B型和C型分别是抗原含量正常而肝素结合活性或凝血酶结合活性的降低，此种可认为是CRM+。另外，DIC的实验室诊断中可选用AT-Ⅲ检测指标，其水平的下降是有诊断价值的。同样在急性白血病时，AT-Ⅲ水平的下降更可看作是DIC发生的危险信号。在抗凝治疗中，如出现肝素治疗抵抗现象或抗凝血酶替代治疗时，都应首选AT-Ⅲ检测来作为确定或监护试验。
4．无论是抗原含量测定，还是活性测定，都不能用肝素抗凝血浆。发色底物测定不论是否自动血凝仪都必须同时作正常对照，不然标本条件将难以控制，无法与先前的正常参考范围比较。 蛋白C和蛋白S
protein C and protein S，PC and PS 参考范围：
抗原含量 PC 3～4mg／L
总PS 4～5mg／L(ELISA)
活 性 PC 70％～1 40％
总PS 7 0％～1 4 0％(发色底物) 临床评价：
1．蛋白C(PC)和蛋白S(PS)均属蛋白C系统，是本世纪7 O年代中期发现的一种由肝脏合成，依赖维生素K而无凝血活性的蛋白质。PC血浆浓度为2～6mg／L。分子量是62000，
～
基因长度为l l kb，定位于2号染色体(2q 1421)；PS血浆浓度8～2 5mg／L，分子量为48000，基因长度为80kb，定位于3号染色体(3q11.2)，目前已知除肝细胞外，内皮细胞表面和血小板α颗粒内也存在PS。
蛋白C的抗凝血作用需凝血酶、胰蛋白酶、蝰蛇毒来激活．而体内最重要的激活途径来自血管内皮表面的凝血酶与凝血酶调节蛋白(1I a-TM)复合物，蛋白C可以被恰当地切下重链N端的一个1 2个氨基酸的小肽，称作蛋白C活化肽(PCP)，从而形成的活化蛋白
C(APC)，具有水解凝血因子V a和Ⅷa的作用，在钙离子和磷脂的参与下，血浆浓度达到3mg／L。的APC可以在3分钟内灭活80％的V a和Ⅶa。此外APC还能阻截X a与血小板的结合，促进内皮细胞释放组织纤溶酶原激活物(tPA)、灭活纤溶酶原激活物抑制物(PAI)，从而进一步巩固其生理性抗凝功能。
蛋白S的抗凝作用主要以辅助APC活性来实现，正常情况下，血浆总PS(TPS)中有40%以游离PS(FPS)形式存在，它们可以与以APC 1：1的形式结合，从而使APC与磷脂的亲和力增大10倍；另一方面，60％的PS则采取与补体C4b结合的形式存在，它可以阻断补体激活系统，在凝血启动理论中可找到它的间接抗凝机制。蛋白S，蛋白C或是补体系统，都是急性相蛋白，因此在很多情况下，这三者的量会发生改变，会影响机体正常抗凝作用的发挥。
2．蛋白C活性和抗原含量降低主要表现在先天性蛋白C缺陷，或者因DIC、ARDS、肝功能不全、手术后和口服双香豆素类抗凝剂所致。蛋白S的水平下降往往伴随着血栓形成，口服抗凝剂使用和肝功能障碍。虽然蛋白C和蛋白S先天性缺陷的发生率较高1/250新生儿)，但出现血栓性病变的并不太多。有人统计仅为其中的10％，而且只有PS和PC的同时缺陷才有更多的血栓形成的机会，甚至有人认为这种缺陷引起血栓的概率还低于活化蛋白C抵抗(后述)和蛋白C抗体的产生。相反，蛋白C和蛋白S活性或抗原含量的增多，主要涉及冠心病、糖尿病、肾病综合征、妊娠后期以及炎症和其他疾病的急性期。但无论如何，并无蛋白C、蛋白S增高而出现临床出血症的病例报道。
3．蛋白C和蛋白S缺乏很明确的可归人易栓症，但对于某些获得性的缺陷能否认为存在高凝状态是很值得研究的。这其中，蛋白C和蛋白S的活性测定至关重要，其意义超过单纯抗原含量测定。而检测时正常参考值的建立非常关键。由于PC和PS活性波动很大，每个实验必须自建参考范围，且正常混合血浆的制备要规范，建议使用100人以上的混浆，且保证各年龄段和性别的均衡。资料(数据)处理必须严格与同时测定的正常血浆对照，下降50％～60％已是十分有意义的缺陷的证据了。另外，ELISA方法测定的蛋白S主要是总PS(TPS)，为防止PS的比例失调或炎症反应和口服抗凝剂治疗，一定要用火箭电泳方法检测结合PS(C4bPS)的量，有可能的话应同时检测维生素K依赖的凝血因子活性，了解是否单纯蛋白S缺乏，对蛋白C也是如此。
4．目前认为要确定蛋白C或者蛋白S缺乏，应该同时检测活化蛋白C抵抗(APCR)、AT-Ⅲ测定和蛋白C抗体检测。后者早在80年代中期已开展，简单的筛选方法可用受检者提取分离的IgG与正常人血浆混合孵育2～6小时，然后测定混合血浆的蛋白C活性，如下降3 0％～5 0％即可考虑蛋白C抗体存在的可能。另外，对怀疑蛋白C激活障碍的蛋白C缺陷，可考虑加做活化蛋白C肽(PCP)检测，血浆PCP水平的增高是蛋白C活化的最客观的指标。
血浆肝素辅因子Ⅱ
plasma heparin cofactor lI，HC Ⅱ 参考范围：
85％～115％(发色底物法) 临床评价：
1．肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)是一种依赖肝素的糖蛋白，其抗凝作用表现在能以1：1的方式与凝血酶结合而使其失活。但与AT-Ⅲ不同的是，普通肝素对HCⅡ作用不大，在硫酸皮肤素存在时，其活性可增加1000倍以上。HC Ⅱ的血浆浓度为7 0mg／L，分子量为66000，基因长度1 6kb，定位于2 2号染色体(2 2q11)。
2．肝素辅因子Ⅱ的缺乏可认为是易栓症的一个原因。但先天性缺乏很少见，占易栓症的1％左右。但重症肝炎、DIC时却明显表现出HC Ⅱ的降低，且与AT-Ⅲ的下降呈平行相关，可作为肝脏损害程度和DIC预后的一个指标。在东方人中，易栓症的检测以AT-Ⅲ、
HCⅡ 、蛋白C系统同时检查为好，其中有6％左右的患者可表现出上述抗凝物质的合并缺陷。这对流行病学研究和抗凝替代治疗都是极有价值的。 血浆组织因子途径抑制物
plasma tissue factor pathway inhibitor，TFPI 参考范围：
70～130цg／L(ELISA法) 临床评价：
1．组织因子途径抑制物(TFPI) 先前还有很多名称，如抗凝血活酶、外源凝血途径抑制物、抗凝血因子Ⅶ等等，其血浆浓度在5 4～1 4 2цg／L。分子量为34000和40000，基因长度为85kb，定位于2号染色体(2P31-31.1)。TFPI在众多的丝氨酸蛋白酶抗凝物中，属于Kunitz家族，在TFPI中有三个明显的Kunitz结构区，可以借助此与因子VlI a和因子X a结合，形成X a—TFPI-VII a—TF三级结构的抑制复合物，这种抗凝活性越来越被人们重视，其生理抗凝作用可占机体抗凝活性的四分之一强。
2．组织因子途径抑制物的增高可发生在7 0岁以上的老年人，后期妊娠妇女和败血症及血管内皮广泛受损时。血浆水平下降主要是消耗所致，如大手术后，DIC时等。需注意的是用ELISA法测定的T'FPI其中包括与脂蛋白结合的TFPI，如脂蛋白降低，则TFPI较易受机体的清除而致TFPI水平下降；另外，使用肝素不但可提高TFPI与X a和Vll a结合的能力，也可促使TFPI从内皮表面脱落，进入血液而使血浆水平明显增高。
3．TFPI的先天性缺乏是罕见的，并且到目前为止没有报道因TFPI水平下降而致血栓形成的病例。而另一方面，用TFPI与TF／VII a混合后的物质再输入动物确不易发生DIC，这个现象表明TFPI在抑制凝血活性方面是有价值的，对临床的进一步研究是值得的。 血浆凝血因子抑制物检测 plasma{actor inhibitor assays 参考范围：
小于0．5 Bet。hesda u／ml(Bethesda法) 临床评价：
1．血浆凝血因子抑制物是一种抗体，目前认为主要有两种途径可以产生。较多的是因为使用血制品，如高浓度的因子Ⅷ用于血友病甲患者，或出血患者和其他因子缺陷的病人使用的血制品甚至是使用重组凝血因子，都有或能因免疫反应而产生各类凝血因子抑制物。这种免疫反应，少见的情形还发生在妊娠妇女，母亲的血因胚盘出血而进入胎儿，引起免疫反应，产生抗体。而大多的凝血因子抑制物都属于IgG-抗体，因此也能反过来影响母体本身。从发病机制上看，应用血制品或重组因子的次数、量与产生抗体(抑制物)间没有平行关系，有人仅一次使用便产生，而有些终身未产生。以血友病甲患者的统计数字看，大约5％～10% 的患者可产生因子Ⅷ抗体，且绝大多数发生在因子Ⅷ水平低正常人3％的患者。 另一种少见的凝血因子抑制物产生与自发性或自身免疫、药物免疫和肿瘤免疫有关。一般认为7 0岁以上老年人，因基因突变的机会增大和基因调控失常的或能增大而发生自身免疫、药物免疫和肿瘤病变的可能增大，其中有些人可因此而产生相应的凝血因子抗体，这种抗体可认为是自身抗体中的一种。
2．Bethesda法检测凝血因子抑制物的原理都是相同的，即以正常人血浆与受检者血浆按不同相关因子促凝活性相当于正常人的百分比率。如果是未经稀释的受检血浆与正常人血浆1：1混合，其后测出的活性相当于正常人的50％，则为1个Bethesda单位。根据受检者抗体浓度的高低也可以预先稀释后混合，则计算结果时要乘以稀释倍数；如正常人与受检者血浆非1：1混合，则要按各自比例算出单位。可以认为Bethesda方法是检测各种凝血因子抑制物的最迅速的筛选试验。但必须指出存在假阴性和假阳性，要求每例患者最少测二次以
上(不是指同一标本重复一次)，如果怀疑因子Ⅷ抑制物的，一定要加做狼疮样抗凝物检测。对接近正常值的标本，可进行弱抑制物检测，其实质就是提高受检血浆在混合血浆中的份额，一般可提高到4：1～9：1。 活化蛋白C抵抗试验
resistance to activated protein C test，APCR 参考范围：
rAPCR—r>1.8～2.2(APTT法) 临床评价：
1．活化蛋白C抵抗现象是荷兰人B Dahlb?ck 1993年首先发现的，一名1 9岁便开始反复多次发生静脉血栓的患者，在其血浆标本中加人纯化的APC但不出现期望中的APTT延长，而患者的PC、PS、AT-Ⅲ均在正常水平。到1994年证明了这种APCR现象是由于凝血因子V a第5 06精氨酸突变，被谷氨酸替代，而APC无法切割F V a，直接导致了APC对V a灭活化解作用的消失。这种现象至此被称为因子V的Leiden突变。随后大量的流行病学研究和对因子V a的逐点分析证实，APCR现象在正常人群中存在的概率至少为2％～3％(欧洲)，在血栓患者中的比率高达155％，在有家族史的病例中则更上升到30％左右，但FV Leiden突变的有百分比就要小得多，就是最高的斯坎的那维亚地区也不过5%左右。在中国的上海地区已做过类似研究，结果除发现1%左右的APCR现象外，一例FV Leiden突变也未发现。据胡翊群等人的观点是存在人种的差异，对东方人种的日本、韩国、台湾地区而言，也许更重要的在于蛋白C抗体或因子Ⅷa位点的改变。
2．以APTT方法检测中国上海地区人群的APCR比率，大于2.2的可视为不存在APC抵抗现象，介于1.8与2.2之间的可认为可疑，小于1.8的则肯定存在APC抵抗。这种情况可能表现在家族性或年幼起病的血栓性病变，深静脉血栓形成，也可能显示动脉血栓形成的机会要高于无APC抵抗的人群。总之，作为血栓危险性研究是有价值的。在APC抵抗的基础上检测FV Leiden突变或蛋白C抗体或Ⅷa的外显子的检测都是可行的。 凝血酶时间
thrombin time，(TT) 参考范围：
1 6秒～1 8杪 临床评价：
1．凝血酶时间(TT) 也有用TCT(thrombin clotting time)，本试验是为了解受检血浆中是否含有足够量的纤维蛋白原，且纤维蛋白原的结构应该符合人体的正常生理凝血要求。同时，因本试验的观察点或终点判断是以交联的纤维蛋白形成为目标，因此'纤维蛋白单体间的共价交联必须没有外来的干扰。一般TT试验所用的凝血酶来源于牛或猪，不同型号的凝血酶活性相差很多，因此试验前需用缓冲液调正，到可使正常参考血浆凝固时间在1 6～1 8秒之间，最好不超过2 0秒。
2．凝血酶时间延长(超过正常对照3秒以上) 可认为是无(低)纤维蛋白原血症，包括DIC、原发性纤维蛋白(原)溶解症、肝脏病变和L-天冬氨酸酶治疗时；抗凝治疗，包括肝素、水蛭素类，肝素类抗凝剂和异种凝血酶抗体等；某些异常和高纤维蛋白原血症时出现的高磷和高唾液酸可导致TT延长，同样情形还表现在肝硬化、肝肿瘤时；循环中的异常抗凝物质增多，包括过多的纤维蛋白(原)降解产物(FDP)对凝血酶的抑制作用；过高的纤维蛋白原可造成对纤维蛋白单体交联的抑制，也是TT 延长的原因。
3．凝血酶时间的延长，可以同时或加做凝血酶原时间测定，后者不受循环抗凝物质的影响，但对异常结构的纤维蛋白或低纤维蛋白原则同样会延长凝固时间；怀疑有肝素、类肝素物质(药物)使用的，可做甲苯胺蓝纠正试验，凝固时间被恢复正常的(或缩短5秒以上)，