水杨酸法测定黄酮对羟自由基清除能力的实验
一、实验原理
利用 Fenton 反应产生羟自由基：H2O2+Fe2+ =·OH+H2O+Fe3+在反应体系中加入水杨酸，Fenton 反应生成的羟自由基与水杨酸反应，生成于 510 nm 处有特殊吸收的 2,3- 二羟基苯甲酸，反应式如下：如果向反应体系中加入具有清除羟自由基功能的被测物，就会减少生成的羟自由基，从而使有色化合物的生成量相应减少。采用固定反应时间法， 在 510 nm 处测量含被测物反应液的吸光度，并与空白液比较，以测定被测物对羟自由基的清除作用。
其清除率计算公式为：羟自由基清除率(%)=A0－(Ax－Ax0) /A0·100
其中 A0 为空白对照的吸光值， Ax 为加样品的吸光值， Ax0 为不加显色剂 H2O2
二、实验步骤
各溶液的加入量按照表 1 所示，在比色管中依次先加入 9 mmol / L FeSO4， 9 mmol / L 乙醇 - 水杨酸，接着加入适量去离子水，最后加入 8.8 mmol / LH2O2 后摇匀，37℃水浴加热 15 min 后取出，测其吸光度 A0。A0 测定时，参比溶液为不加双氧水的体系。 按上述方法，加入表 1 所示的各溶液，来测定吸光度 Ax、Ax0。Ax 和 Ax0 测定时，参比溶液为去离子水。
三、试剂配制
9 mmol / L 乙醇 - 水杨酸配法：称 1.243 g 水杨酸，乙醇溶解，定容至 100 mL，然后稀释 10 倍；9 mmol / L 硫酸亚铁配法：称 2.502gFeSO4·7H2O，去离子水溶解，定容至 100 mL，然后稀释10倍。8.8 mmol/L H2O2 配法：称 9.926 g 30 % H2O2，去离子水定容至 100 mL，然后稀释 100 倍。
四、实验结果
样品体积/ml Ao Ax Axo 清除率（％） 1 0.876 0.846 0.096 14.38 2 0.900 0.765 0.154 32.11 3 0.903 0.718 0.241 47.18 5 0.885 0.683 0.326 59.66 7 0.846 0.661 0.507 81.80 9 0.870 0.433 0.341 89.425 10 0.800 0.481 0.400 89.50 羟自由基清除率（水杨酸法）公式为：清除率I％=（Ao+Axo-Ax）/Ao x100％ 样品（干花豆）为0.1313g/60ml水
Vc体积/ml Ao Ax Aox 清除率% 1 0.877 0.784 0.024 13.34 2 0.897 0.781 0.022 15.30 3 0.897 0.747 0.020 18.90 5 0.899 0.672 0.018 27.33 7 0.900 0.547 0.016 41.00 9 0.887 0.489 0.014 46.45 11 0.887 0.371 0.016 60.00 13 0.900 0.331 0.014 64.26 样品：0.0250gVC加500ml娃哈哈纯净水。