6—10/3—10/2—10个循环的荧光信号观察分析Ct值,如果没有Ct值<16.0的样本,则将基线改定为6—15/3—15/2—15个循环的荧光信号进行结果分析;如有Ct值<16.0的样本,则应将该样本剔除此次结果分析,同时仍将基线改定为6—15/3—15/2—15个循环的荧光信号进行结果分析。)
4.使用Roche LightCycler荧光PCR检测仪进行结果分析时,读取F1通道的检测结果。阈值设定原则以刚好超过正常阴性对照品扩增曲线无规则的噪音线的最高点,且Ct值不出现任何数值为准(一般基线定在0.001—0.05范围内,也可根据仪器本身的实际情况加以调整)。
5.其它类荧光PCR仪的结果分析方法参照以上基线及阈值设定原则以及仪器的使用说明书和实际情况而适当调整。 本试剂盒质控标准
1.阴性对照的Ct值均应等于40.0(PE5700/7700/7000)或0.0(BIO-RAD iCycler))或无数值(ROCHE LightCycler)。
2.强阳性对照的Ct值应<25.0。
3.临界阳性对照的Ct值应<35.0,且临界阳性对照的Ct值应大于强阳性对照的Ct值。否则,此次实验
视为无效。 结果判断
1.检测样本Ct值为40(PE-7700/PE-5700/PE-7000)、0(BIO-RAD iCycler)和无数值(Roche LightCycler)时,报告为阴性。
2.检测样本Ct值≤37.0时,报告为阳性。 3.检测样本Ct值大于37.0的样本建议复检。复检结果Ct值<40
【iCycler上Ct者均报告为阳性,否则报告为阴性。
值=0及试剂盒使用注意事项
LightCycler上Ct1.本试剂盒仅用于体外检测。 值=无数值均不 2.使用前请仔细阅读本说明书。
属此范围】 3.实验请严格分区操作:第一区:PCR前准备区—
准备扩增所需试剂;第二区:样本处理区—待测样本和对照品处理;第三区:检测区—PCR扩增检测。 4.各区物品均为专用,不得交叉使用,避免污染,实验后即请清洁工作台。
5.试剂盒内各试剂使用前,充分融化后请稍事离心。 6.在-20℃保存的样本裂解产物,应在加样前置室温解冻,作短暂离心后使用。
7.分装有反应液的反应管应扣盖或装入密实袋内再
【图
片:37729.BMP】
转移至样本区。
8.加样时应使样品完全落入反应液中,不应有样品粘附于管壁上,加样后应尽快盖紧管盖。
9.扩增完毕立即取出反应管,密封在专用塑料袋内,丢弃于指定地点。
10.反应液分装时应尽量避免产生气泡,上机前注意检查各反应管是否盖紧,以免荧光物质泄露污染仪器。 11.实验中用过的吸头请直接打入盛有1%次氯酸钠的废物缸内,与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。 12.工作台及各物品定期用1%次氯酸钠、75%酒精或紫外灯进行消毒。
13.建议使用离心管和吸头一览表 ※ ※ 14.各区域内必备物品一览表 ※