实验八、生化需氧量测定
仪 器
恒温培养箱（20?1℃），5～20升细口玻璃瓶，曝气装置，虹吸管，1000ml量筒，玻璃搅拌棒，溶解氧瓶。 试 剂
1. 磷酸盐缓冲溶液：称取8.5gKH2PO4，21.75gK2HPO4，33.4gNa2HPO4·7H2O
及1.7gNH4Cl溶于1000mL去离子水中，稀释至1000mL，此溶液的pH值为7.2不用再调整。
2. 硫酸镁溶液：称取22.5gMgSO4·7H2O溶于去离子水中，稀释至1000mL。 3. 氯化钙溶液：称取27.5g无水CaCl2溶于去离子水中，稀释至1000mL。 4. 氯化铁溶液：称取0.25gFeCl3·6H2O溶于去离子水中稀释至1000mL。 5. 葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖和谷氨酸在105烘1h后，各称取150mg
溶于去离子水中，移入1000mL容量瓶中并稀释至标线。 6. 测定溶解氧的全套试剂。
7. 稀释水：多数污水因有机物含量高，溶解氧含量低，进行BOD5测定时要进
行稀释，用稀释水将污水进行稀释培养。稀释水的制备如下：在20L细口玻璃瓶中装入一定量的去离子水，用蒸空泵或无油空气压缩机曝气2～8h以上。取稀释水测定其中的溶解氧的含量，达到8～9mg/L时停止曝气。在20℃温度下放置一段时间，以便使溶解氧在水中含量成为稳定状态。使用前在每升稀释水中加入磷酸盐缓冲溶液、MgSO4溶液、CaCl2溶液、FeCl3溶液各1mL。用玻璃搅拌棒混合均匀后，用溶解氧瓶分别取满两瓶稀释水供测定和培养用。
8. 接种液：可用生活污水于20℃放置24～36h后的上清液为接种液。对某些特
殊工业废水最好用专门驯化过的菌种为接种液，这种驯化的微生物种群最好从接受该种废水的水体中取得。
9. 接种稀释水：当测定难降解有机物BOD5时需要用接种稀释水进行稀释。在
每升稀释水中加入1～3mL接种液,并搅拌均匀。用溶解氧瓶装满两瓶接种稀释水，供测定和培养用。 步 骤
1. 水样预处理：在测定前，水样pH值过高、过低，含有少量游离氯、过饱和
溶解氧及有毒物质等，需经预处理后，再进行测定。
2. 不经稀释水样的测定：溶解氧含量高、有机物含量较少的地面水，可以不经
稀释，直接用虹吸管将混合均匀的水样虹吸入两个溶解氧瓶中（在虹吸过程中不能损失或带入溶解氧），水样注满溶解氧瓶并溢出少许，加塞。其中一瓶立刻测定溶解氧，另一瓶加满水封后，放入培养箱，在20?1℃培养5天，培养过程中注意添加水封，从开始放入培养箱算起，经过五昼夜后，取出测定剩余的溶解氧。
3. 经稀释水样的测定：在生化需氧量的测定中，为了得到定量的结果，当水样
中溶解氧减少时，必须防止空气中的氧气溶入。并且由于氧在水中的溶解度有限，对于有机物浓度高的水样须作稀释，以保证在整个测定期间水中含有溶解氧。
（1）确定稀释比：稀释比的确定在BOD5测定中是十分重要的因素，如果稀释比选择不适，不在合适的范围内，培养五天后水样中剩余的溶解氧太多或太少都不能得到可靠的结果。最佳稀释比应该是稀释水样培养五天后的溶解氧减少量在40～70%之间。因此，一般要求稀释水样培养五天后的溶解氧至少还有1mg/L，而培养期间溶解氧损失至少应该在2mg/L以上。对于普通的污水和废水，先测出高锰酸盐指数，然后按这数值的2～4倍估计水样的BOD5值的可能范围，根据表实—7的数值查得适宜的稀释比，以这个稀释比为中心，选取3～4个稀释比对水样进行稀释。
表实—7 BOD5与试验稀释比
BOD5范围（mg/L） 20000～70000 10000～35000 4000～14000 2000～7000 1000～3500 400～1400 200～700
稀释比（%）
0.01 0.02 0.05 0.1 0.2 0.5 1.0
BOD5范围（mg/L）
100～350 40～140 20～70 10～35 4～14 0～7
稀释比（%）
2.0 5.0 10 20 50 100
如果缺乏上面估计方法的条件，根据经验：浓的工业废水用0.01～1.0%，未经处理或已沉淀的城市污水用1～5%，经生化处理后的出水用5～25%，污染的河水用25～100%。
（2）水样的稀释：水样稀释可采用直接稀释法或量筒稀释法。
1）直接稀释法：就是在溶解氧瓶中直接稀释。首先要知道溶解氧瓶的容积。将瓶灌满水后，盖塞，倒去水封，用量筒测定每一个瓶中水的体积，贴上标签。每一个溶解氧瓶的塞子和瓶配套使用，不得弄错。用虹吸管先装入1/3瓶稀释水（或接种稀释水），然后加入根据瓶的容积和稀释比计算出的水样量，再用稀释水（或接种稀释水）将瓶刚好装满，不留气
泡，盖塞后又不溢出为好，然后加满水封。同一稀释比配制两瓶。用同样的方法将3～4个稀释比的稀释水样配制好，盖塞，加满水封。 2）量筒稀释法：用虹吸法沿量筒壁先加入1/3稀释水（或接种稀释水）在量筒中，然后按选定的稀释比，加入所需的一定量混合均匀的水样，再用稀释水（或接种稀释水）加至1000mL刻度，小心搅拌均匀，用虹吸法分装在两个溶解氧瓶中。用同样方法配制3～4个不同稀释比的稀释水样，盖塞，加满水封。稀释水样配制好后，每一稀释比的两瓶稀释水样，联同前面取好的两瓶稀释水（或接种稀释水），一瓶留下立刻测定其当天的溶解氧，另一瓶放入培养箱，在20?1℃下培养五天。培养过程中要经常观察温度，加满水封，五天后取出测定溶解氧。
4. 葡萄糖-谷氨酸标准溶液的测定：为检验稀释水和接种液的性质及测定人员
的操作技术，可配制稀释比为2%的葡萄糖-谷氨酸标准溶液的稀释水样。按经稀释水样的测定步骤进行（用接种稀释水进行稀释）。测得BOD5值应在180～230mg/L之间，否则，应检查稀释水、接种液的质量或操作技术是否存在问题。 计 算
BOD5（mg/L）=
(c1?c2)?(B1?B2)f
P式中，c1—稀释试样培养前的溶解氧，mg/L；c2—稀释试样培养五天后的溶解氧，mg/L；B1—稀释水（或接种稀释水）培养前的溶解氧，mg/L；B2—稀释水（或接种稀释水）培养五天后的溶解氧，mg/L；f—稀释水用量在稀释试样中所占的百分数，以小数表示；P—水样用量在稀释试样中所占百分数，以小数表示。
实验九、水中氨氮的测定
一、电极法
本方法可用于测定饮用水、地面水、生活污水及工业废水中的氨氮含量,色度和浊度对测定没有影响,水样不必进行蒸馏.标准溶液和水样的温度应相同,含有溶解物质的总浓度也要大至相同. 试 剂
? 氨氮标溶液:浓度为1M(以氮计).
? 离子强化剂(ISA):5M NaOH+0.05M EDTA二钠盐+10%甲醇 仪 器 ? 离子活度计 ? 氨电极 ? 电磁搅拌器 测 定
测定水样时请详细阅读仪器说明. 二、滴定法 试 剂
1. 混合指示剂：称取200mg甲基红溶于100ml95%乙醇溶液中，另取100mg亚甲
蓝溶于50ml95%乙醇溶液中。取两份甲基红溶液与1份亚甲蓝溶液混合后，此混合指示剂一月配制一次。
2. 硫酸标准溶液1/2H2SO4=0.020mol/L：取1+9H2SO4溶液5.6ml于1000ml容
量瓶中，稀释至标线，混匀。准确浓度按下述步骤进行标定：称取约0.5g（称准至0.0001g）无水Na2CO3基准试剂（使用前在180℃烘干2h），溶于新煮沸并放冷的水中，转移至500ml容量瓶中，稀释至标线。移取25.00mlNa2CO3溶液于150ml锥形瓶中，加25ml水，加1滴0.05%甲基红指示剂，用H2SO4溶液滴定至淡桔红色为止。记录用量，平行滴定三次，用下式计算H2SO4溶液的浓度：
c （1/2H2SO4，mol/L） =W?1000?25.00
V?52.995500式中，W—碳酸钠的重量，g；V—硫酸溶液的体积，ml。 步 骤 1. 水样的测定
蒸馏预处理时以H3BO3溶液为吸收液的全部蒸馏液中加入2滴混合指示剂，用已标定过的H2SO4标准溶液滴定至绿色转变成淡紫色为止，记录用量。
2. 空白试验
取经蒸馏预处理过的空白试样，用H3BO3溶液为吸收液的全部蒸馏液，同水样测定步骤相同进行滴定。
计 算 氨氮（N，mg/L）=
(V1?V0)?c?14?1000
V式中，V1—滴定水样时消耗硫酸溶液的体积，ml；V0—滴定空白试验消耗硫酸溶液体积，ml；c—硫酸溶液浓度，mol/L；V—水样体积，ml；14—氨氮（N）摩尔质量。