微生物学
微生物 (microorganism, microbe) 一词，是对所有形体微小、单细胞或个体结构较为简单的多细胞，甚至无细胞结构的低等生物的总称，或简单地说是对细小的、人们肉眼看不见的、只有借助于显微镜才能看见的生物的总称。但近年来发现有的细菌是肉眼可见的。
微生物特点：个体微小、结构简单、繁殖迅速、分布广泛、种类繁多、易变异 微生物的分离、纯化及培养技术
分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。 为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不一定保证是一种菌。
常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法 稀释涂布平板法 稀释混合平板法 平板划线法 稀释涂布平板法 ：
1、倒平板： 牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I号培养基，查氏培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培养基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。
2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中，在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中，以此类推，制成不同稀释度。 3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。
4、培养：高氏I号和查氏倒置培养于28℃培养箱中培养3-5days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37℃培养1-2days。
5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。 平板划线法：
1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。 2、划线方法 稀释混合平板法 ： 1、先加菌
2、倒平板时注意培养基温度
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3、混合均匀
耗氧、厌氧、兼性微生物的分离方法 培养四大微生物培养基种类及条件控制 微生物培养技术 1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种
4、将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培养箱中培养 5、将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保存。 几种常用的保藏方法： 1、传代培养法
保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基（用于厌氧细菌）培养好后，置4C?冰箱中存放，定期进行传代培养、再存放。
可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石蜡来进一步延长保存期。 2、载体法
使生长合适的微生物吸附在一定的载体上进行干燥。
常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、磁珠和滤纸片等。 3、悬液法
将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。 溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。 4、冷冻法
使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。包括低温法和液氮法。 此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。注意控制降温速率及保护剂的使用。 5、真空干燥法
这类方法包括冷冻真空干燥法和L－干燥法。
冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。
L-干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在10－20C?范围内进行真空干燥。
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消毒：杀死物体上或者环境汇总的病原微生物，并不一定能杀死细菌的孢子或者非病原微生物的方法
灭菌：杀死物体上所有微生物的方法。比消毒要求高，包括灭菌细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。
防腐：防止或者抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌不一定死亡。
抑菌：抑制体内或者体外细菌生长繁殖的方法。常用的抑菌剂为各种抗生素。
灭菌方法
利用物理因素（温度、辐射、超声波、渗透压、过虑、干燥等）杀灭或控制微生物生长的方法，最重要的因素是温度。 热力灭菌法
干热灭菌法 ：脱水干燥和大分子变性 焚烧--最彻底的灭菌方法,如废弃物、尸体 烧灼--直接用火焰灭菌方法，如接种环、试管口
干烤－加热160-170℃ 1-2小时，如玻璃器皿、金属工具等 红外线－利用热效应，如医疗器械
湿热灭菌法：有水的参与，同一温度下灭菌效果优于干热灭菌 水蒸汽的穿透力比干热空气强
微生物细胞极易吸收水分子，使蛋白质变性和凝固
高温水蒸气接触灭菌物品后凝固成水并放出潜能，使灭菌温度迅速提高，加速微生物死亡
煮沸法：水煮5min(繁殖体)~2小时(芽胞)，难以杀死芽胞，消毒食具、刀剪、注射器等
巴氏消毒法：低温维持（ 61.1-62.8 ℃30min）或高温瞬时（71.7 ℃15-30s），消毒食品
流动蒸汽灭菌法：水蒸汽15~30min(繁殖体) 间歇灭菌法：反复多次流通蒸汽间歇加热灭菌
高压蒸汽灭菌法：最有效的灭菌方法 103.4kPa(1.05kg/cm2)，121 ℃ 15~20min 影响因素
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微生物因素：耐热性芽孢>孢子>繁殖体 温度与作用时间：致死温度、致死时间 pH值的影响：中性条件微生物的抗热性最强 介质的性质：水 辐射杀菌法
非电离辐射：日光、紫外线、微波等
紫外：波长240~300nm的紫外线具有杀菌作用，其中波长265nm紫外线杀菌力最强
紫外线使DNA相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，干扰DNA的复制与转录 光复合作用（photoreactivation）、光复合酶（photoreactivating enzyme） 杀菌能力强，穿透力较弱，用于空气消毒、物品的表面消毒
电离辐射：α、β、γ和X射线等，包括高速电子、 α、β、γ 和X射线，产生游离基，干扰DNA合成，破坏细胞膜
消毒不耐热的塑料制品，消毒食品不破坏其营养成分 微波
波长1－1000mm的电磁波，可穿透玻璃、陶瓷和塑料等物质，但不能穿透金属表面
微波主要靠其热效应杀菌。主要用于食品、非金属器械、检验室用品，无菌室和病室中食品用具、药杯及其他用品的消毒 滤过除菌法
用物理阻留的方法除去液体或空气中的细菌，以达到除菌目的
适于不耐热也不能以化学方法处理的液体或气体，如血清、毒素、抗生素以及空气等
滤菌器（filter）：贝克菲滤器、蔡氏滤器、玻璃或陶瓷滤器、膜滤器 过滤效果与滤器孔径大小、滤器与细菌间的电荷吸引、滤速等有关 （病毒、支原体、有些L型细菌可通过滤器） 超声波杀菌法
是一种机械的作用因素，每秒超过2万赫兹振动的声波即为超声波。
空穴效应：通过超声波在水中产生压力改变（1000个大气压）造成微生物空腔
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化，真空状态的空穴造成细胞内外压力差，使细菌细胞裂解而死亡。 现主要用于细胞、细菌的粉碎，制备抗原。 干燥与低温抑菌法 低温灭菌法
低温可使细菌的新陈代谢减慢 不能灭菌，只能抑制微生物生长 用于防腐或保藏菌种 干燥灭菌法 常用于保存食物
冷冻真空干燥法(lyophilization）:在低温状态下真空抽去水分
冷冻真空干燥法是目前保存菌种的最好方法，可保存微生物存活数年～数十年
渗透压灭菌法
高渗：细胞脱水、质壁分离 低渗：细胞膨胀、破裂
主要利用高渗防腐，如盐腌、糖腌法 化学消毒灭菌法
利用化学因素（消毒剂disinfectant、防腐剂antiseptic）杀灭或控制微生物生长的方法
同一化学药品低浓度为消毒剂，高浓度为防腐剂 一般用于体表、器械、食具和环境消毒 影响微生物灭菌因素
微生物种类、微生物的物理状态、微生物的数量、消毒剂的性质、浓度和作用方式、时间、温度、酸碱度、有机物、微生物培养基 按组成成分分类
（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于
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