对照品溶液。照层色谱法（中国药典20xx年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板，分别以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水（8：2：2：3）和正丁醇-冰醋酸-水（5：2：3）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，与瓜氨酸对照品、缺天花粉阴性对照样品对照，阴性样品、样品、瓜氨酸对 照品在相同位置均有相同颜色斑点，本品中天花粉尚未找到具特异性的薄层鉴别方法。 【检查】依照《中国药典》20xx年版一部附录(ⅠD)的有关规定对三批中试产品检查（重量差异、崩解时限、微生物限度），均符合药典有关规定。
重金属 依《中国药典》20xx年版一部(附录Ⅸ E第二法)检查，三批中试产品重金属均低于百万分之五，暂不设定重金属检查项。
砷盐检查 依《中国药典》20xx年版一部(附录Ⅸ F第二法)检查,三批中试产品砷盐均低于百万分之二，暂不设定砷盐检查项。
【含量测定】采用高效液相色谱法（中国药典20xx年版一部附录VI D）测定。 1.葛根的含量测定
原标准收载了葛根的含量测定方法，经验证，原方法样品制备合理，且峰形对称，分离度好，阴性无干扰，故采用原标准收载的方法作为含量测定方法。 葛根素 中国药品生物制品检定所 752-200108 仪器与试剂
高效液相色谱仪 xx xxxx 型高压恒流泵 xxxxx紫外可见波长检测器 xxx色谱数据工作站
色谱柱 xxkromasil C18 5um 4.6×250mm
柱号 13156020898
色谱甲醇 天津四友 磷酸、三乙胺为分析纯 标准曲线:
精密称取葛根素对照品适量,加甲醇制成每1ml含100μg的溶液,作为对照品溶液。 以100μg/ml的对照品溶液为母液，分别配制成50μg/ml、25μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml的对照品溶液 。
分别精密吸取上述各对照品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,计算，即得。 回归曲线为Y(峰面积)=26.050X(浓度)+26.995 r=0.99987
线性范围为2.5～100μg/ml,标准曲线近似过圆点,采用外标一点法定量。 供试品溶液制备方法的选择
1. 取本品适量，研细，取1g，精密称定，加甲醇40ml，回流30分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.取本品适量，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。
经试验方法②较方法①重现性好且方法简单，故采用此方法制备供试品。 精密度 同一样品连续进样测定5次，相对标准偏差为1.81%,小于3.0%。
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稳定性 同一样品,制备后在30分钟、1小时、6小时、12小时、24小时后分别测定，相对标准偏差为2.10%，小于5.0%,样品放置24小时内稳定。
重现性 同一样品，取5份，各约1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。取上述供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。相对标准偏差为1.85%，小于5.0%。 加样回收率 取已知含量的样品5份(约1g),精密称定，分别置50ml量瓶中,各精密加入每1ml含0.1mg的葛根素对照品溶液3ml，蒸干，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。取上述供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪，测定,平均回收率为99.94%。
样品测定 对三批中试产品,采用原标准的含量测定方法测定，其结果如下。 【含量测定】 葛根 照高效液相色谱法(中国药典20xx年版一部附录Ⅵ D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇—磷酸盐(1：4)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按葛根素峰计算应不低于7000。
对照品溶液的制备 取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含10μg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各lOμl，注入液相色谱仪，测定，即得。 原剂型标准十味降糖颗粒每袋6g，规定每袋含葛根以葛根素(C21H2009)计，不得少于2.0mg。新标准十味降糖丸（浓缩丸）每袋6g，根据原剂型标准规定及三批中试含量测定数据确定每1g含葛根以葛根素(C21H2009)计，不得少于0.35mg。 2.格列本脲的含量测定
原标准收载了格列本脲的含量测定方法，经试验，原方法峰形分离不好，格列本脲峰没有回到基线，调整流动相为甲醇—磷酸盐(12：8)，结果峰形对称，分离度好，格列本脲峰能回到基线，阴性样品无干扰，故采用修定过的方法作为含量测定方法。 仪器与试剂
高效液相色谱仪 xx xxx型高压恒流泵 xxxx紫外可见波长检测器 xxxx色谱数据工作站 色谱柱 xxxx
填料：Hypersil ODS2 5um 尺寸： 4.6×200mm 柱号：E1523753 批号：5/120/7095 色谱甲醇 天津四友 磷酸、三乙胺为分析纯 标准曲线:
精密称取在105℃烘干至恒重的格列本脲对照品适量,加甲醇制成每1ml含308μg的溶液,作为对照品溶液。
以308μg/ml的对照品溶液为母液，分别配制 154μg/ml、77μg/ml、38.5μg/ml、15.4μg/ml、7.7μg/ml的对照品溶液。
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分别精密吸取上述各对照品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,计算，即得。 回归曲线为 Y(峰面积)＝17.0366X(浓度)＋3.1799 r＝0.99979
线性范围为7.7～154μg/ml，标准曲线近似过圆点,采用外标一点法定量。 供试品溶液制备方法的选择
1．取本品，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。
2. 取本品，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，用加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。
同一样品按上述两种方法，每种方法制备三个供试品，分别取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，经比较三种方法测定得的含量基本一致，第一种方法重现性好，操作简单，故选用第一种供试品溶液制备方法。
精密度 同一样品连续进样测定5次，相对标准偏差为1.07%，小于3.0%。
稳定性 同一样品，制备后在30分钟、1小时、4小时、12小时、24小时后分别测定，相对标准偏差为1.51%，小于5.0%，表明样品放置24小时内稳定。
重现性 同一样品，取5份，各约1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。取上述供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。相对标准偏差为1.63%，小于5.0%。
加样回收率 取已知含量的样品5份(约1g)，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，各精密加入每1ml含38.5μg的格列本脲对照品溶液5.0ml，蒸干，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。取上述供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，平均回收率为99.81%。
样品测定 对三批中试产品，采用新制订的含量测定方法测定，其结果如下。
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典20xx年版一部附录Ⅵ D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：甲醇—磷酸盐(12：8)为流动相；检测波长为300nm。理论板数按格列本脲峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备 取格列本脲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。
测定法 分别精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
原剂型标准十味降糖颗粒每袋6g，每袋相当于格列本脲1.5mg，规定每袋格列本脲应为1.2mg～1.8mg，新标准十味降糖丸（浓缩丸）每袋6g，每袋相当于格列本脲1.5mg，根据原剂型标准规定及三批中试含量测定数据确定本品每1g含格列本脲应为0.2mg～0.3mg。
【功能主治】 益气养阴，生津止渴。用于非胰岛素依赖型糖尿病中气阴两虚证者，表现为倦怠乏力，自汗盗汗，气短懒言，口渴喜饮，五心烦热，心悸失眠，溲赤便秘，舌红少津，舌体胖大，苔薄或花剥，脉弦细或细数。与原剂型标准一致。
【用法用量】 口服，一次1袋，一日3次。与原剂型标准一致。 【不良反应】 个别患者可见低血糖反应。与原剂型标准一致。
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【禁忌】 妊娠妇女、糖尿性昏迷患者禁用。与原剂型标准一致。
【注意事项】 (1)本品含西药成分格列本脲，如合并使用其它化学药物应在医生指导下使用； （2）定期复查血糖；
（3）肝、肾功能不全者慎用。 与原剂型标准一致。 【规格】 每袋装6g
【贮藏】 密封。与原剂型标准一致。
【有效期】 暂定二年。
三、稳定性试验研究
依据《中药新药质量稳定性研究的技术要求》，将拟上市复合膜包装的十味降糖丸（浓缩丸）用十味降糖丸（浓缩丸）质量标准（草案）及《中华人民共和国药典》20xx年版一部和《中华人民共和国药典》20xx年版一部附录ⅩⅢ C微生物限度检查法对三批中试产品进行试验。经对拟上市复合膜包装的十味降糖丸（浓缩丸）置常温下放置考查六个月；又经对拟上市复合膜包装的十味降糖丸（浓缩丸）置温度40±2℃、相对湿度75%±5%的条件下放置6个月(相当于常温下二年)，按稳定性重点考察项目（性状、鉴别、水分、装量差异、溶散时限、含量测定、微生物限度检查等）检测。实验结果都表明该品种放置过程中质量稳定，包装材料对质量无影响。
四、临床研究资料综述
十味降糖丸（浓缩丸）与十味降糖颗粒工艺无本质区别，根据《药品注册管理办法》规定免报下列资料：药理毒理研究资料综述、主要药效学试验资料及文献资料、急性毒性试验资料及文献资料、长期毒性试验资料及文献资料;依赖性试验资料及文献资料、临床研究资料综述、临床研究计划与研究方案、临床研究者手册、知情同意书样稿、伦理委员会批准件、临床研究报告。
主要参考文献
《中国药典》20xx年版一部 国家药典委员会 《中国药典》20xx年版二部 国家药典委员会 《中国药典》20xx年版一部 国家药典委员会 《中国药典》20xx年版二部 国家药典委员会 《现代实用中药鉴别技术》人民卫生出版社 《中成药中的药材薄层色谱鉴别》人民卫生出版社
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