【摘要】 目的 建立清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量测定方法。方法 采用HPLC法,色谱柱为UltimateXB-C18 (5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.1),流速为1 mL/min,柱温为40 ℃,检测波长为192 nm。结果 猪去氧胆酸在0.201 35～1.006 75 mg/mL范围内线性关系良好,r＝0.999 6,平均加样回收率为98.25%,RSD＝1.26%。结论 方法准确、可靠,重复性好,可用于清开灵注射液的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法；清开灵注射液；猪去氧胆酸
Abstract：Objective To establish a method for content determination of hyodeoxycholic acid in Qingkailing Injection. Methods An UltimateXB-C18 column (5 μm, 250 mm×4.6 mm) was used with a mobile phase of acetonitril-water-phosphoric acid (35∶65∶0.1). The flow rate was 1 mL/min. The temperature of the column was 40 ℃. The detection wavelength was 192 nm. Results There was a good linear relationship between the concentration of hyodeoxycholic acid and absorption area value in range of 0.201 35～1.006 75 mg/mL, r＝0.999 6. The average recovery was 98.25% with RSD＝1.26%. Conclusion This method was accurate, credible and repeatable which can be used to control the quality of Qingkailing Injection.
Key words：HPLC；Qingkailing Injection；hyodeoxycholic acid
清开灵为安宫牛黄丸改良的复方注射液,具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍之功,用于热病神昏、中风偏瘫、神志不清,亦可用于急慢性肝炎、乙型肝炎、上呼吸道感染、肺炎、高烧以及脑血栓形成、脑出血见上述证候者。其原方中牛黄具有镇静开窍的作用,主要成分为胆酸和猪去氧胆酸,二者具有与牛黄相似的药效活性[1]。清开灵注射液已收录于2005版《中华人民共和国药典》(一部),其中含量测定包含了胆酸的测定方法[2]。由于胆酸和猪去氧胆酸均为清开灵注射液的活性成分,且结构相似,故而研究了同时测定胆酸和猪去氧胆酸的含量的方法,结果较好。
1 仪器与试药
Waters 2695高效液相色谱仪。胆酸对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号10078-0013),猪去氧胆酸对照品(Sigma,纯度98%)；清开灵注射液(市售样品3批, 10 mL/支,吉林省集安益盛药业股份有限公司生产)。乙腈为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
参考2005版《中华人民共和国药典》(一部)清开灵注射液中胆酸含量测定的色谱条件[2]。经比较色谱峰分离情况以及分离度,确定的色谱条件为色谱柱UltimateXB-C18 (5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.1),流速为1 mL/min,柱温为40 ℃,检测波长为192 nm。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取猪去氧胆酸对照品适量,加60%乙腈制成每1 mL含2.013 5 mg的溶液,作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
精密量取本品10 mL,加稀盐酸0.5 mL,用醋酸乙酯提取4次(20、20、15、15 mL),合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加60%乙腈适量使溶解,并转移至25 mL量瓶中,用60%乙腈稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。
2.2.3 阴性溶液的制备
取缺胆酸、猪去氧胆酸的阴性制剂,按供试液溶液制备方法制备,即得。
2.3 专属性试验