2.2.2 样品含量测定 龙须藤洗净，晾干，置恒温干燥箱中于75 ℃下干燥8 h，取出粉碎，过筛(20目)，所得粉末干燥保存备用。按下述试验条件回流提取后，将粗提取液过滤，浓缩，放置冷却后定容于100 mL量瓶中。精密吸取样品溶液1.0 mL置10 mL量瓶中，再精密吸取溶液1.0 mL，按“2.2.1”项下方法，自“加水至6.0 mL”起依法测定吸光度，代入回归方程计算出样品溶液中总黄酮的提取率（总黄酮提取率＝总黄酮质量/龙须藤质量×100％）。
2.3 大孔树脂的筛选
选择4种极性、孔径、比表面等参数不同的大孔树脂(DA?101、AB?8、HP?20和H?103)，分别用静态吸附法和静态解吸法测定其吸附与解吸性能，以确定实验用树脂。
2.3.1 大孔树脂预处理 称取上述4种树脂适量，用乙醇浸泡树脂24 h后，分别上柱进行预处理，用体积分数95％乙醇流动清洗，检查流出的乙醇液至乙醇液与水1∶5混合不呈白色混浊为止，然后以大量蒸馏水冲洗，至水洗液无醇味为止。
2.3.2 静态吸附实验 称取4种处理好的大孔树脂(DA?101，AB?8，HP?20，H?103)2 g，分别加入龙须藤黄酮提取液10 mL置25 mL三角瓶中，每间隔10 min振荡1次，持续4 h后，静置24 h，使达到饱和吸附，过滤，测定滤液中黄酮含量，按［吸附率=(初始浓度-吸附后浓度)／初始浓度×100％］计算吸附率，结果见表1。
2.3.3 静态解吸实验 将静态吸附后的树脂过滤抽干，各加入体积分数50％乙醇20 mL，每间隔10 min振摇1次，持续4 h后，静置24 h。测定洗脱液中龙须藤黄酮的含量，按［解吸率=(洗脱液浓度×洗脱液体积)/(初始浓度-吸附后浓度)×吸附液体积×100％］计算解吸率，结果见表1。
表1 树脂对龙须藤黄酮的吸附率和解吸率（略）
Table 1 Static and dynamic adsorption/desorption of total flavonoids
比较各种树脂的吸附率和解吸率，综合分析，以AB?8型大孔树脂对龙须藤黄酮的吸附分离效果较佳，故选择AB?8大孔树脂作为实验用树脂。
2.4 大孔树脂纯化工艺研究
2.4.1 正交试验［5］ 采用AB?8型大孔树脂对龙须藤黄酮提取液进行分离纯化，对树脂分离纯化过程中的主要因素如大孔树脂用量、洗脱剂(乙醇)浓度、乙醇用量等进行考察，因素水平表见表2，正交试验结果见表3。
2.4.2 结果分析 以总黄酮质量分数为考察指标进行直观分析和方差分析，结果见表3和表4。可见各因素影响程度大小为C>B>A，其中C因素(树脂用量)有显著影响，A2B3C3为各因素的最佳水平，确定A2B3C3为较优树脂纯化工艺条件，即采用AB?8型大孔树脂，树脂用量为4倍生药量，洗脱剂采用体积分数50％乙醇，洗脱剂用量为16倍生药量。
2.4.3 验证试验 取龙须藤黄酮提取液，按照A2B3C3条件重复3次，结果3批样品中黄酮平均质量分数为5.25％，从提取液中的转移率为83.67％，表明该工艺条件合理，能较大程度地分离富集龙须藤黄酮。
表2 因素水平表（略）
Table 2 Factors and Levels
表3 正交试验结果（略）
Table 3 Result of orthogonal experiment
表4 方差分析结果（略）
Table 4 Variance analysis results
3 讨论
大孔树脂是一种多孔性高分子材料，具有多孔性和较大的比表面积，主要通过物理作用从溶液中有选择性地吸附有机物质，从而达到分离纯化的目的。AB?8为聚苯乙烯型非极性吸附树脂，表面有一定的酯基，亲水性得到改善，但吸附机理仍为疏水性吸附。该树脂的比表面积和孔径较大，适合于吸附具有一定疏水性的中药成分，吸附量较大，洗脱容易，吸附动力学性能良好。对热、有机溶剂和一般使用条件下的酸、碱稳定，使用寿命较长。对蛋白、糖类、无机酸、碱、盐、小分子亲水性有机物均不吸附，因而可将一般中药成分与这些物质分离。