作者：可钰，袁冬冬，徐永刚，刘宏民
【摘要】 目的测定冬凌草各部位及不同产地冬凌草叶中总二萜的含量。方法采用紫外分光光度法测定冬凌草提取物中总二萜的含量。结果建立了测定冬凌草中总二萜含量的方法，并对冬凌草不同部位及不同产地冬凌草叶中总二萜含量进行了测定，叶中含量最高，不同产地叶的含量也有差异。结论该方法简便、稳定、可靠，可用于冬凌草提取物中总二萜含量的测定。
【关键词】 冬凌草; 总二萜; 紫外分光光度法
Abstract：Objective To determine the total diterpenoids of different parts of Rabdosia rubescens and its leaves from different localities. MethodsThe content of total diterpenoids was determined by ultraviolet spectrophotometry. ResultsBy determining the total diterpenoids of Rabdosia rubescens, the content was different in different parts and high in the leaves. ConclusionThis method is simple, stable and reliable, and can be used to determine the total diterpenoids of Rabdosia rubescens.
Key words： Rabdosia rubescens; Total diterpenoids; Ultraviolet spectrophotometry
冬凌草Rabdosia rubescens (Hemsl.) Hara，又名冰凌草，为唇形科香茶菜属多年生草本植物，以地上部分入药，广泛分布于黄河流域及其以南地区，主产于河南太行山区,味甘苦，性微寒，具清热解毒，消炎止痛、健胃活血及抗肿瘤之功效[1]。冬凌草中的活性成分主要是二萜类[2～6]，而冬凌草中的二萜类骨架主要有对映-贝壳杉烷型、对映-6，7-螺断-贝壳杉烷型和对映松香烷型二萜化合物，它们都是具有抗癌活性的化合物[7]，有相似的分子结构式和发色团，所以二萜类化合物在同一波长处具有相似的紫外吸收特征和相同的吸收系数，而且最大吸收波长都在238 nm左右。因此以冬凌草甲素为对照品，采用紫外分光光度法测定冬凌草提取物的总二萜含量[8]，该法简便、稳定、可靠，可作为冬凌草总二萜含量的控制方法。
1 仪器和材料
1.1 仪器Jasco V550紫外/可见分光光度计;梅特勒AL104型分析天平。
1.2 材料和试剂冬凌草的不同部位(S1-种子，S2-花，S3-茎，S4-叶)，不同产地冬凌草叶由本课题组采摘，分别为S5-济源大峪乡叶，S6-山西绛县叶，S7-济源下冶乡叶;冬凌草甲素对照品由本实验室制备，纯度符合要求;95%乙醇(分析纯)。
2 方法与结果
2.1 冬凌草不同部位和不同产地冬凌草叶提取物的制备取经50℃真空干燥后S1～S7各2 g，精密称定，分别置于50 ml的锥形瓶中，加入15倍量的95%乙醇，密封，在50 ℃下浸泡3 h，浸泡两次，合并浸泡液，残渣再以10 ml相应的溶剂洗涤3次，合并滤液滤过，准确计量其体积，密封冷藏，待测。
2.2 标准品溶液的制备精密称取冬凌草甲素标准品6 mg，用95%乙醇溶解，定容至50 ml，即得对照品储备液;分别量取0.5，1，2，3，4 ml置于10 ml容量瓶中用95%乙醇定容至刻度，得浓度分别为6，12，24，36，48 μg·ml-1的系列冬凌草甲素标准液。
2.3 测定波长的选择取浓度为36 μg·ml-1冬凌草甲素标准品溶液，以95%乙醇为空白溶媒，在200～400 nm范围内扫描。见图1，确定其最大吸收波长为238 nm。
图1 冬凌草甲素标准品溶液200～400 nm扫描图
2.4 标准曲线的绘制取上述系列浓度标准品溶液，以95%乙醇为空白，在238 nm处测定吸光度A。以测定的吸收度(A)对溶液浓度(C)进行回归，得线性方程A=0.016 7C+0.010 7，线性相关系数r=0.999 8。测定浓度6～48 μg·ml-1范围内吸光度和浓度呈良好线性关系。