Shimadzu UV?3101 PC 光谱仪（日本岛津公司）；光照箱，自制, 35 cm×30 cm ×25 cm，光源为纯稀土节能灯，灯功率45 W,欧姆龙（亚洲）公司；HH?S8数显恒温水浴锅（江苏春兰实验仪器厂），低温超速离心机（BECKMANJ?20XPI， 美国 BECKMAN 公司）。
1.2 方法
1.2.1 超氧阴离子自由基的产生及清除活性测定
采用光照核黄素［5-7］的方法,用0.05 mol·L-1、pH=7.4的PBS缓冲液为溶剂,配制3.5×10-6 mol·L-1核黄素，0.01 mol·L-1蛋氨酸， 4.5 ×10-5 mol·L-1氯化硝基四氮唑兰(NBT)。分别取上述3种溶液各2.0 mL,加入各种浓度的卟啉?荧光素(样品)溶液1.0 mL，空白管以1.0 mL缓冲液代替样品溶液。置于光照箱中光照30 min，取出后以缓冲溶液为参比，于590 nm处测定溶液的吸光度。清除率按下式计算：A0为空白管的吸光度，A样为样品管的吸光度。
1.2.2 羟自由基的产生及清除活性测定［4,8］
采用亚铁离子催化过氧化氢产生羟自由基( Fenton反应)，该反应产生的羟自由基可使番红花红褪色，针对这一特点来研究卟啉?荧光素对羟自由基的清除能力。取0.15 mol·L-1、pH 7.4 的磷酸缓冲溶液1.0 mL, 40 μg·mL-1番红花红1.0 mL, 0.195 mmol·L-1 EDTA?Fe (Ⅱ) (新鲜配制) 1.0 mL, 不同浓度的卟啉?荧光素 (样品) 0.5 mL，3% H2O2 1.0 mL (新鲜配制),混合后在37 ℃水浴中反应30 min, 在520 nm 处测定吸光度，以A样表示。空白组以0.5 mL蒸馏水代替样品，测定吸光度A0，对照组以1.5 mL蒸馏水代替H2O2 和样品，测定吸光度A，用3.5 mL蒸馏水代替番红花红、EDTA?Fe (Ⅱ) 、H2O2 、样品，用1.0 mL磷酸盐缓冲溶液调零。按下式计算清除率:
清除率(％)=A样-A0A-A0×100%
1.2.3 对脂质过氧化抑制活性的测定［4-8］
取0.12 mL卵磷脂溶液( 300 mg 卵磷脂溶解于30 mL 10 mmol·L-1 、pH 7.4 的PBS 中, 冰浴震荡), 加入pH7.4的PBS 缓冲液1.0 mL, 取不同浓度的卟啉?荧光素样品溶液0.5 mL, 2.5 mmol·L-1 EDTA?Fe ( Ⅱ) 1.0mL，混匀后于37 ℃水浴中反应40 min, 再加入28% (W∶V ) 的TCA 2.0 mL, 1% (W∶V) 的TBA 1.0 mL，混匀后置于100 ℃沸水浴中加热10 min，冷却后在532 nm处测定吸光度A样，用PBS缓冲液调零，空白管用PBS缓冲液代替样品，测吸光度A0 。按下式计算抑制率:
抑制率(％)=A0-A样A0×100%
1.2.4 ·OH 引发DNA损伤抑制TBA法测定［4,10］
取pH7.1的Tris?HCl 缓冲溶液1.0 mL, 4.0 mg·mL-1DNA 0.2 mL, 不同浓度的卟啉?荧光素溶液0.20 mL, 25 mmol·L-1 EDTA?Fe (Ⅱ) 1.0 mL, 3% H2O2 1.0 mL(新鲜配制)，在37 ℃水浴中恒温1.5 h后，取出加入28% (W∶V) 的TCA 2.0 mL，1% (W∶V ) 的TBA 1.0 mL，混匀后置于100 ℃沸水中加热10 min，冷却后于波长532 nm处测吸光度，即A样。空白管以0.15 mL 蒸馏水代替样品测A0，用相应缓冲溶液作参比。抑制率按下式计算：
2 结果与讨论
2.1 对超氧阴离子自由基的清除作用
为更好地考察卟啉?荧光素对光照核黄素产生超氧阴离子自由基的清除效果，本研究以芦丁作为对照实验，分别测定了卟啉?荧光素和芦丁的清除作用。卟啉?荧光素与芦丁对光照核黄素产生超氧阴离子的清除作用见图1。 卟啉?荧光素IC50=20 μg·mL-1，当质量浓度为100 μg·mL-1时，清除率可达61.33%；芦丁IC50=50 μg·mL-1，当质量浓度为100 μg·mL-1时，清除率可达77.62%，与文献报道结果一致［4,5,7］。由图1可见，卟啉?荧光素对超氧阴离子自由基具有较好的清除作用，与芦丁对超氧阴离子自由基的清除效果相当。