2.2 对Fenton反应产生·OH的清除作用
以芦丁为对照，卟啉?荧光素对Fenton反应产生·OH的清除作用见图2，卟啉?荧光素IC50=0.50 μg·mL-1,质量浓度≥3.5 μg·mL-1时，清除率达最大，其最大清除率为63.5 %；而芦丁IC50=2.5 μg·mL-1，与卟啉?荧光素相同浓度下的最大清除率为65.6%，这说明卟啉?荧光素和芦丁一样对·OH自由基具有良好的清除作用。
2.3 对脂质过氧化的抑制作用
在532 nm下测定卟啉?荧光素对卵磷脂脂质过氧化的抑制作用，结果见图3，由图可知，卟啉?荧光素的IC50=0.05 mg·mL-1，样品浓度和抑制率呈正相关。当卟啉?荧光素的质量浓度为3.0 mg·mL-1时, 其抑制率高达60.5%，由此可见，卟啉?荧光素对卵磷脂脂质过氧化也表现出较好的抑制作用。
2.4 对·OH引发DNA损伤的抑制作用
硫代巴比妥酸(TBA)可与丙二醛(MDA)类似物反应，生成粉红色物质，该物质在532 nm处有最大光吸收，采用TBA反应可定量检测脱氧核糖或DNA上脱氧核糖环受·OH攻击，氧化断裂产生的丙二醛类似物［4,6,8］。卟啉?荧光素二元化合物对·OH引发DNA损伤的抑制作用结果见图4，加入卟啉?荧光素化合物后，DNA的氧化损伤被抑制，抑制率随卟啉?荧光素浓度的增加而增加。卟啉?荧光素IC50=1.5 μg·mL-1，当卟啉?荧光素的质量浓度为4.0 μg·mL-1时，其抑制率高达68.6%；芦丁IC50=2.0 μg·mL-1，当质量浓度为4.0 μg·mL-1时，抑制率为85.2%，说明卟啉?荧光素化合物能有效抑制MDA生成，对DNA上脱氧核糖的氧化损伤抑制作用较好。
3 结 论
荧光素及其一些衍生物临床上已应用于癌症的治疗等，它们也是防腐药和轻泻剂；从化学结构上分析，卟啉?荧光素属于蒽醌类物质［2,3,8,9］。本实验所用的卟啉?荧光素二元化合物的结构式如图5所示，它的主要活性部位是荧光素环上的羟基氢和具有共轭大π键的卟啉环，卟啉环因其具有较强配位作用也属于活性基团之一。因此，有理由认为卟啉?荧光素的抗氧化活性主要是由于蒽醌环上的羟基氢发生作用，卟啉环的活性也不容忽视。本实验研究表明,卟啉?荧光素化合物具有较好的清除活性氧自由基能力，并对卵磷脂脂质过氧化及·OH诱发DNA氧化损伤有显著的抑制作用。卟啉?荧光素二元化合物是一种良好的体外抗氧化试剂，其相关机理仍需进一步研究。
【参考文献】
［1］LU J Z, HUANG J W, FAN L F, et al. Synthesis of a new porphyrin?fluorescein hybrid and its supramolecular self?assembly with amino?porphyrinatomanganese (III) by hydrogen?bonding［J］. Chinese Chem Let, 2005,16 (3):303-304.
［2］马丽，陆家政，范丽芬,等. 卟啉?蒽醌二元化合物催化DNA光断裂性质研究［J］. 中山大学学报:自然科学版, 2003, 42 (4):129-131.
［3］叶芳贵,谢增鸿. 一些新荧光探针的合成和荧光性质研究［J］.分析测试技术与仪器，2003，(9)2:74-79.
［4］王雪梅,张建胜,高云涛,等.姜黄素体外清除活性氧自由基及抗氧化作用研究［J］.食品工业科技, 2008, 29(7): 94-98.
［5］魏朝良,于德红,安利住. 黄酮类化合物及清除自由基机制的探讨［J］.中成药, 2005, 27 (2): 230-241.
［6］邹国林, 张帆, 欧荣. 菲咯啉铜配合物对体外DNA损伤的研究［J］. 武汉大学学报:自然科学版, 1999, 45 (6): 865-868.
［7］高云涛,杨益林,王雪梅.重楼提取物体外清除活性氧及抗氧化作用研究［J］.中成药, 2007, 29 (2): 195-1981
［8］CROSS C E, HALLIWELL B, BORISH E T, et al. Oxygen radical and human disease［J］. Ann Intern Med,1987, 107(4):526-545