3 讨论
CD59是一种GPI蛋白，可以作用于补体激活终末阶段的MAC的形成，使肿瘤细胞免受补体介导的溶细胞作用从而引起肿瘤逃逸。目前已有研究显示,CD59分子中N37～H44位基因突变可导致糖尿病的发生,其NMR结构显示抗补体活性区域也主要集中于N37～H44之间[7]。肿瘤逃逸相关活性位点虽然尚未有明确定位,但无疑为寻找该活性位点提供了理论性的指导，从而引导我们发现肿瘤逃逸中可能存在的其他途径。
表1 突变人CD59与野生型人CD59的差别（略）
表2 ELISA实验结果（略）
与野生Hela细胞比较，*t=3.195～4.842,P<0.01
图1 重组质粒鉴定结果
①DNA Marker;②酶切的重组突变CD59质粒;③未经酶切的突变CD59重组质粒AB
图2 流式细胞术检测结果（略）
对于类似p53编码基因等抑癌基因的研究显示， 肿瘤的发生与肿瘤细胞丧失了正常的凋亡机制有关[8]。近年来的研究还显示，在一些药物诱导的细胞凋亡中，存在caspase?3的活化[9，10]。本课题组已有研究成果显示，CD59基因突变使凋亡相关因子caspase?3表达发生变化。
caspase?3是细胞凋亡过程中的关键分子。 细胞凋亡需经两条不同的途径:一条是Fas与细胞表面的死亡受体FasL结合后,首先激活caspase?8,然后再活化下游的caspase(主要为caspase?3);另一条是各种毒性物质通过刺激线粒体释放的细胞色素C激活caspase?9后,活化下游的caspase(主要也为caspase?3)，这两条途径均需激活caspase?3。因此，通过使CD59的活性位点突变以影响其抗补体活性，并且通过影响caspase?3的表达，进而影响肿瘤细胞的凋亡可能成为肿瘤治疗的新方法。
本研究成功构建了CD59可疑活性氨基酸突变的重组体，使CD59第39～41位氨基酸均突变为色氨酸；Hela细胞转染突变的CD59后凋亡相关因子caspase?3的表达量显著减少。说明CD59分子的色氨酸在突变CD59蛋白发挥抗肿瘤逃逸作用时充当重要角色，提示CD59引起肿瘤逃逸的另一途径可能是通过使凋亡相关因子caspase?3的表达减少，使细胞凋亡减少，从而引起肿瘤细胞逃脱机体的免疫监视而实现的。
综上所述，可以通过封闭CD59的活性位点，减弱CD59分子中的活性氨基酸的功能，提高caspase?3活性使肿瘤细胞凋亡，同时减低其抗补体活性来促使肿瘤细胞不能逃避免疫杀伤，从来达到治疗肿瘤的目的。本研究将为肿瘤靶向治疗提供一条新思路，具有重要临床应用价值。
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